三七總皂苷脂質(zhì)體凝膠的制備及性質(zhì)研究

譚福能，賈文麗，王興能

（文山學(xué)院 化學(xué)與工程學(xué)院，云南 文山 663099）

三七總皂苷（PNS）是從五加科人參屬植物三七中提取的有效藥用成分，其包括20多種皂苷活性物質(zhì)，具有十分重要的藥理作用[1-3]，PNS具有顯著降低血小板表面活性、抑制血小板粘附和聚集、抗血栓形成、改善微循環(huán)等作用，其作用優(yōu)于阿斯匹林。此外，PNS還具有清除自由基、降血壓、抗炎等藥效[4-5]。可用于治療中風(fēng)偏癱、腦梗塞、腦血管病、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、冠心病、顱腦外傷、慢性腎功能衰竭、燒傷后瘢痕增生、牙周炎等疾病[6]?，F(xiàn)代藥學(xué)研究表明，PNS在胃腸黏膜中的透過(guò)性差，即使大量給入吸收率也不高，因此導(dǎo)致了傳統(tǒng)的PNS口服劑的生物利用率很低，三七總皂苷存在吸收差、生物利用率低等缺點(diǎn)[7]，其中，Rg1的生物利用率為4.35%，Rb1為18.40%，而且在血液中消除很快[8]。

為PNS建立一個(gè)新的給藥體系成了近年來(lái)三七藥用研究的熱點(diǎn)之一[9]，通過(guò)新的給藥系統(tǒng)能提高藥物在人體內(nèi)的代謝動(dòng)力學(xué)性能，使血液中藥物濃度維持在一定范圍，不僅能延長(zhǎng)藥物的作用時(shí)間，還能減少給藥的次數(shù)，從而達(dá)到降低藥物的毒副作用，提高患者順應(yīng)性的目的[10-11]。

目前在PNS的給藥體系方面主要是緩釋顆粒劑、片劑、薄膜劑等。而脂質(zhì)體凝膠是近年來(lái)研究較熱的新型給藥系統(tǒng)，相對(duì)于傳統(tǒng)的給藥系統(tǒng)，能更好地與皮膚表面接觸，可透過(guò)表皮層深入到皮膚深層，從而提高藥物在局部皮膚的濃度，發(fā)揮緩釋作用。因此，PNS脂質(zhì)體凝膠具有良好的應(yīng)用前景。

本文采用薄膜分散法制備三七總皂苷脂質(zhì)體凝膠，并對(duì)其配方進(jìn)行了優(yōu)化，對(duì)所制得的脂質(zhì)體凝膠成品進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)價(jià)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

三七總皂苷（西安欣祿生物科技有限公司）；101-2EBS型烘箱（北京市永光明醫(yī)療器械廠）；IRPrestige-21型傅立葉變換紅外光譜儀（日本島津公司）；UV-2550型紫外分光光度計(jì)（日本島津）。卵磷脂（分析純，中國(guó)新興化工試劑研究所）；膽固醇（分析純，中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司）；卡波姆940（山東優(yōu)素化工科技有限公司），甲醇（分析純，國(guó)藥集團(tuán)上海試劑公司）。

1.2 脂質(zhì)體的制備

分別稱取2 g大豆卵磷脂和0.5 g膽固醇于燒杯中，加10 mL三氯甲烷使其溶解完全，然后轉(zhuǎn)至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，25℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去三氯甲烷，同時(shí)控制旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋轉(zhuǎn)的速度，使類脂在圓底燒瓶壁上形成一層均勻的薄膜。將圓底燒瓶取下，干燥24 h后加入溶有PNS的磷酸鹽緩沖溶液（pH6.8）5 mL，在25℃下旋轉(zhuǎn)洗膜150 min，得粘稠的混懸液體，取出后保存于4℃的冰箱中[12]。

1.3 三七總皂苷脂質(zhì)體凝膠的制備

稱取0.5 g卡波姆940，加入蒸餾水且不斷攪拌后放置過(guò)夜，使其能夠溶脹充分，再入磷酸鹽緩沖溶液調(diào)節(jié)pH至6.5，得空白凝膠基質(zhì)。將上述步驟制備的含PNS的脂質(zhì)體加入到該空白凝膠基質(zhì)中，并不斷攪拌，最后加入5 mL甘油，繼續(xù)攪拌均勻后得到PNS脂質(zhì)體凝膠。

1.4 三七總皂苷凝膠的傅立葉變換紅外指紋圖譜分析

取適量干燥的三七總皂苷脂質(zhì)體凝膠，充分研磨后與KBr混合壓片后制得樣品，樣品用IRPrestige-21型傅立葉變換紅外光譜儀進(jìn)行紅外掃描，掃描范圍為4000 cm-1～400cm-1。

1.5 三七總皂苷的紫外—可見(jiàn)分析方法的建立

用電子天平分別稱取三七總皂苷4 mg、8 mg、12 mg、16 mg、20 mg溶于甲醇中，在50 mL規(guī)格的容量瓶中配制溶液，其濃度分別為0.068 mg/mL、0.1360 mg/mL、0.2040 mg/mL、0.2720 mg/mL、0.3400 mg/mL。在紫外—可見(jiàn)吸收光譜儀中測(cè)得其最大吸收波長(zhǎng)為221 nm，在此波長(zhǎng)下繪制其標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.6 載藥率的計(jì)算

取含三七總皂苷的脂質(zhì)體凝膠溶液5 mL，放入離心機(jī)中，于室溫下高速離心40 min（1200 r/min），取上清液，用甲醇定容至5 mL，置于紫外—可見(jiàn)吸收光譜儀上，在波長(zhǎng)為221 nm時(shí)測(cè)定其吸光度，通過(guò)上述步驟得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算三七總皂苷含量，并按以下公式計(jì)算其載藥率：

載藥率=（W總-W游離）/ W總

其中W總為脂質(zhì)體凝膠中三七總皂苷的總量，W游離表示上清液中三七總皂苷的量。

1.7 三七總皂苷脂質(zhì)體凝膠的穩(wěn)定性研究

1.7.1 時(shí)間的影響

分別取1 g不同配方制備的三七總皂苷脂質(zhì)體凝膠放置于表面皿上，放入冰箱中，并且將冰箱的溫度恒溫在-4℃，每隔10分鐘、30分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)、1天、2天觀察三七總皂苷脂質(zhì)體凝膠的質(zhì)量變化情況，以變化質(zhì)量M變化來(lái)表示（M變化= M開(kāi)始-M終止）。

1.7.2 溫度的影響

分別將制備好的三七總皂苷脂質(zhì)體凝膠放入玻璃表面皿上， 其中三七總皂苷：脂質(zhì)體為1∶1、2∶1、4∶1、9∶1， 依次放入恒溫水浴鍋中，并將恒溫水浴鍋的溫度恒溫在 10℃ 、20℃ 、30℃、40℃ 、50℃、60℃ 、70℃ 、80℃、90℃、 95℃下，每隔10分鐘觀察一次三七總皂苷脂質(zhì)的質(zhì)量變化情況，變化質(zhì)量等于開(kāi)始質(zhì)量減去終止質(zhì)量（M變化=M開(kāi)始-M終止）。

2 結(jié)果與討論

2.1 紅外指紋圖譜分析

圖1是不同三七總皂苷脂質(zhì)體凝膠的紅外光譜圖，其中三七總皂苷∶脂質(zhì)體分別為4∶1（a）、1∶1（b）、2∶1（c）、9∶1（d）。

圖 1 不同三七總皂苷脂質(zhì)體凝膠的紅外光譜圖

根據(jù)三七總皂苷脂質(zhì)體凝膠的紅外光譜圖對(duì)比分析可知，三七總皂苷脂質(zhì)體凝膠在3400～3300 cm-1處為-OH伸縮振動(dòng)。3030 cm-1附近的數(shù)個(gè)弱峰是苯環(huán)及-CH3的C—H伸縮振動(dòng)，1850-1600 cm-1出現(xiàn)的峰為C=O伸縮振動(dòng)，2300～2400 cm-1出現(xiàn)的峰為-C≡C-伸縮振動(dòng)，1360 cm-1和1450 cm-1的吸收峰為甲基的C—H伸縮振動(dòng)，2310～2135/cm-1的吸收峰為-N≡N-伸縮振動(dòng)，而三七總皂苷在3000～2800 cm-1出現(xiàn)的峰為C—H伸縮振動(dòng)，2300～2100 cm-1的吸收峰為-N≡N-伸縮振動(dòng)，1650～1560 cm-1出現(xiàn)的峰為—NH2彎曲振動(dòng)，1300～1200 cm-1的吸收峰為—NO2彎曲振動(dòng)，910～890 cm-1出現(xiàn)的峰為=CH2面外搖振動(dòng)擺，從圖1中可見(jiàn)，改變?nèi)呖傇碥蘸椭|(zhì)體的比例對(duì)其各官能團(tuán)的紅外吸收峰位置影響不大。

2.1 三七總皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

在紫外—可見(jiàn)吸收光譜儀中測(cè)得三七總皂苷的最大吸收波長(zhǎng)為221 nm，因此在此波長(zhǎng)下進(jìn)行測(cè)定并將測(cè)定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見(jiàn)圖2）。通過(guò)對(duì)其標(biāo)準(zhǔn)曲線線性擬合后得到線性方程y=8.441x+2.5，相關(guān)系數(shù)為0.998。結(jié)果表明三七總皂苷濃度在0.068 mg/mL～0.340 mg/mL范圍與吸光度線性關(guān)系良好。

圖 2 三七總皂苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.3 制備PNS脂質(zhì)體凝膠的工藝優(yōu)化

通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，對(duì)脂質(zhì)體凝膠的載藥率影響較大的兩個(gè)因素為磷脂與膽固醇的質(zhì)量比（磷膽比），脂類與藥物三七總皂苷的質(zhì)量比（脂藥比），因此以載藥率為考查指標(biāo)，對(duì)其制備工藝進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果見(jiàn)表1。當(dāng)磷膽比為4∶1，脂藥比為6∶1時(shí)，載藥率最高，因此選用此配方制備三七總皂苷脂質(zhì)體凝膠。

表1 PNS脂質(zhì)體凝膠研究

2.4 時(shí)間的影響

取不同的配比的凝膠成品放在表面皿中，于-4℃條件下，不同時(shí)間后觀察其表觀并記錄其質(zhì)量變化情況。

表2 -4℃條件下凝膠成品質(zhì)量變化情況

由表2可知各配比的凝膠成品在低溫條件下質(zhì)量沒(méi)有發(fā)生很大的波動(dòng)即在低溫條件下凝膠成品的穩(wěn)定性都很好。其中磷膽比（9∶1）的凝膠成品質(zhì)量變化比其他三個(gè)要相對(duì)穩(wěn)定。

2.5 溫度的影響

將不同配比的凝膠成品置于洗凈干燥燒杯中，將其置于恒溫水浴中加熱，并于不同的溫度條件下恒溫30 min后，稱其質(zhì)量并記錄其質(zhì)量變化M變化。

表3 同一溫度下不同配比的凝膠成品質(zhì)量變化情況

由表3可知各配比的脂質(zhì)體凝膠成品在不同條件下質(zhì)量沒(méi)有發(fā)生很大的波動(dòng)，這也說(shuō)明凝膠具有良好的溫度穩(wěn)定性，其中磷膽比（9∶1）的凝膠成品質(zhì)量變化最小。

3 結(jié)論與展望

本文以膽固醇、卵磷脂和三七總皂苷為主要原料制備三七總皂苷脂質(zhì)體凝膠。通過(guò)紫外可見(jiàn)光吸收光譜法建立了三七總皂苷的測(cè)定方法，并以該方法測(cè)定脂質(zhì)體凝膠的載藥率，經(jīng)過(guò)反復(fù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)磷脂與膽固醇的質(zhì)量比、脂類與藥物的質(zhì)量比直接影響脂質(zhì)體凝膠的載藥率。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明該脂質(zhì)體凝膠具備良好的穩(wěn)定性，在不同溫度和放置時(shí)間下其質(zhì)量無(wú)明顯變化。

脂質(zhì)體凝膠可通過(guò)延緩三七總皂苷的釋放，以促進(jìn)藥物的透皮吸收，有望制成外用凝膠用于臨床治療，對(duì)開(kāi)發(fā)三七皂苷新劑型研究工作具有重要意義。

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