高效液相色譜法測定安康欣膠囊中苦參堿的含量

摘要：

目的： 建立一種高效液相色譜法測定安康欣膠囊中苦參堿的含量。方法： 以ODS-C18為固定相，乙腈-甲醇-0.15%三乙胺（12.5：12.5：75）（用磷酸調節pH值至7.0）為流動相，檢測波長為210nm。結果： 苦參堿線性范圍為5.0μg/ml～150μg/ml，r=0.9998，加樣回收率為98.56%，RSD為0.63%。結論： 該方法簡便、可靠、準確，可用于安康欣膠囊的質量控制。

關鍵詞：高效液相色譜法；安康欣膠囊；苦參堿

Determination of matrine in Ankangxin Capsules by HPLC

Ten Hong， ZHOU Wen-yan Hu Jing-chu （Anhui Gaoshan Pharmaceutical Co.，Ltd，Jixi 245300，China）

Abstract：

Aim To establish a HPLC method for determination the contect of matrine in Ankangxin Capsules. Methods In this study， ODS-C18 was adopted as stationary phase with the mobile phase of Acetonitrile- methanol -0.15% Triethylamine （12.5：12.5：75），and Adjusted to pH 7.0 with phosphoric acid，the detection wavelength was at 210nm. Result The linear in sample size range of matrine was 5.0μg～150μg，r=0.9998.The average recovery was 98.56%，RSD=0.63%. Conclusion This method is simple，reliable，accurate and can be used as a quality control of Ankangxin Capsules.

Key words：HPLC；Ankangxin Capsules； Matrine

【中圖分類號】

R453 【文獻標識碼】B 【文章編號】1002-3763（2014）08-0079-02

安康欣膠囊由半枝蓮、山豆根、夏枯草、蒲公英、魚腥草、石上柏等18味中藥組成，具有活血化瘀，軟堅散結，清熱解毒，扶正固本的功效，用于肺癌，胃癌，肝癌等腫瘤的輔助治療。本品為我公司獨家產品，療效確切，市場運行良好。本品原國家標準中對樣品中的山豆根進行了含量測定，控制指標為苦參堿，采用的是薄層掃描法，且展開劑含有苯。通過比較發現，高效液相色譜法在準確度、精密度和含量重現性等方面均優于薄層掃描法，且高效液相色譜法為樣品含量測定的常用方法。故本品標準改用高效液相色譜法測定苦參堿的含量，并進行相應方法學的研究，結果滿意。

1 儀器與試藥

1.1 LC-10ATvP高效液相色譜儀（日本島津公司）；756PC型紫外分光光度計（上海光譜儀器有限公司）；AL104型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；JL-60型超聲波清洗器（上海杰理科技有限公司）；HH-S2型數顯恒溫水浴鍋（金壇市金城國勝試驗儀器廠）。

1.2 乙腈、甲醇（色譜純，上海試一化學試劑有限公司）；磷酸（分析純，中國醫藥（集團）上海化學試劑公司）；重蒸水；苦參堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，產品批號：110703-200322）；安康欣膠囊（本公司生產，批號：120108、120201、120330）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件：

色譜柱：C18，150×4.6mm（5μm）；流動相：乙腈-甲醇-0.15%三乙胺（12.5：12.5：75），用磷酸調節pH值至7.0；檢測波長：210nm；柱溫：30℃；進樣量：20μl；流速：1.0ml/min。理論板數按苦參堿峰計算應不低于4000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備： 取苦參堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備： 取本品內容物，混勻，取約1.5g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶中，精密加入0.1%鹽酸25ml，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）15分鐘，濾過，取續濾液10ml，置分液漏斗中，加氨試液1ml，搖勻，用三氯甲烷提取三次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇分次溶解，定量轉移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備： 按處方比例稱取不含山豆根的陰性對照樣品適量，按“供試品溶液的制備”項下方法操作，制備成陰性對照溶液。

2.4 方法可行性考察： 中藥生物堿類成份的測定，多采用乙腈-三乙胺或甲醇-三乙胺系統作為流動相，通過對流動相的比例及組成成份的調整，確定乙腈-甲醇-0.15%三乙胺（12.5：12.5：75）（用磷酸調節pH值至7.0）為最佳流動相。

分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各20μl，在上述色譜條件下進行測定，結果見圖2。結果顯示，樣品色譜圖中與對照品色譜峰保留時間10.7min處有相應的苦參堿色譜峰，理論塔板數為5706.7，與左右相鄰雜質峰分離度分別為8.141和1.786，均能達到基線分離，滿足樣品中含量測定的要求。而陰性樣品在相應位置處沒有吸收峰，說明陰性樣品不干擾樣品中苦參堿的測定。

2.7 供試品溶液的制備方法考察

2.7.1 提取溶劑的選擇：

苦參堿屬吡啶生物堿類化合物，在乙醇、三氯甲烷、甲苯、苯中極易溶解，在丙酮、0.1%鹽酸溶液中易溶，在水中溶解，在石油醚中略溶。結合本制劑處方組成特點，本試驗分別考察了以下三種提取方式對本品中苦參堿的提取效果。三種方式分別為0.1%鹽酸溶液提取，三氯甲烷萃取；用水提取，三氯甲烷萃取和采用三氯甲烷直接提取。

結果表明，以水為提取溶劑，苦參堿提取率較低，提取不完全；三氯甲烷與0.1%鹽酸溶液提取比較完全，以0.1%鹽酸溶液為提取溶劑提取率最高，且苦參堿峰形較好，雜質峰少，不干擾樣品的含量測定。故本品供試品溶液的制備選擇0.1%鹽酸溶液為提取溶劑，用三氯甲烷萃取的提取方法。

2.8 溶液穩定性試驗：

新制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8小時，各取20μl進樣分析，記錄色譜峰面積。結果測得峰面積的RSD為0.73%，表明供試品溶液在8小時內是穩定的。

2.9 加樣回收率試驗：

取已知含量的樣品（產品批號為120108，含苦參堿2.216mg/粒，平均每粒裝量0.5029g），混勻，分別精密稱取細粉約0.79g，共9份，并分別精密加入對照品儲備液（3.38mg/ml）0.8ml、0.8ml、0.8ml、1.0ml、1.0ml、1.0ml、1.2ml、1.2ml、1.2ml，照樣品含量測定方法測定含量，分別進行測定，計算回收率。結果見表1。

3 討論

本品處方中山豆根有小毒，且山豆根為主要成分，故應對山豆根進行含量測定，以苦參堿為控制指標。

參考文獻

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