高效液相色譜法測定奧拉西坦注射液中奧拉西坦的含量

唐燕

【摘 要】 目的：建立用高效液相色譜法測定奧拉西坦注射液中奧拉西坦的含量方法。 方法：色譜柱為Inertsil ODS-SP（4.6×250mm，5μm），流動相為0.05mol/L的磷酸二氫鉀（用磷酸調節pH至3.0），檢測波長為220nm，流速為0.6ml/min。結果：在選定的色譜條件下，空白輔料不干擾主成分的檢測，奧拉西坦的濃度在54.25μg/ml～434.00μg/ml范圍內與峰面積的線性關系良好（r=0.9998，n=5）；方法精密度及穩定性良好；方法平均回收率為99.53%。結論：本方法準確、簡便，專屬性強，靈敏度高，可用于奧拉西坦注射液的含量測定。

【關鍵詞】 高效液相色譜法 奧拉西坦注射液 含量測定

奧拉西坦是由意大利ISF公司于1974 年首先合成的吡咯烷酮類γ-氨基丁酸的環形衍生物，化學名4-羥基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺，于1987年在意大利首次上市，商品名為Neupan，有口服劑型和注射劑型[1]。為新一代腦代謝改善藥吡拉西坦的類似物，能透過血腦脊液屏障，作用強于吡拉西坦[2]-[3]。我國于1991年開始研制，1997年由國家藥品監督管理局批準其原料和膠囊上市，2005年批準注射液上市。自上市以來，國內外大量的研究表明，該藥可用于治療理化因素引起的腦損傷，各種腦缺氧和慢性腦功能不全等。對癡呆、老年性精神衰退綜合癥（如記憶衰退、適應性降低、老年虛弱和精神活動障礙等）、低能兒童的大腦發育以及正常人的記憶力、工作效率的提高均有一定療效。本文參考文獻“湛建峰，黃海偉，劉朝霞，張啟明，HPLC法測定奧拉西坦氯化鈉注射液中奧拉西坦含量及其有關物質” [4]采用HPLC法測定奧拉西坦注射液的含量，并對方法進行了驗證，為控制該產品的質量提供了依據。

1 儀器與試藥

美國SSI1500型高效液相色譜儀；奧拉西坦對照品（來源：中國食品藥品檢定研究院，批號：101032-201402，含量：99.6%），奧拉西坦注射液（四川唯拓生物醫藥有限公司自制，批號：160401、160601、160602、160603）；磷酸二氫鉀為分析純。

2 色譜條件

以0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調節pH至3.0）；檢測波長為220nm；流速為0.6 ml/min。

3 方法學考察

3.1 專屬性試驗

空白輔料溶液的制備：按處方量精密稱取空白輔料適量，按供試品溶液的制備法制備，即得。

供試品溶液的制備：取本品（批號：160401）1.0ml，置10ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液母液。再精密量取供試品溶液母液1.0ml，置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

對照品溶液的制備：精密稱取奧拉西坦對照品10mg，置50ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度， 搖勻，即得對照品溶液。

取空白流動相、空白輔料溶液、供試品溶液及對照品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果空白流動相及空白輔料（依地酸鈣鈉）與供試品溶液主峰分離較好，符合要求。結果見圖1。

3.2 線性關系與范圍

精密稱取奧拉西坦對照品10mg，置25ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得母液。精密量取母液，用流動相稀釋制成一系列濃度梯度的對照品溶液，精密量取各濃度的對照品溶液20μl，進樣，記錄色譜圖，并以樣品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標作線性回歸圖，結果得到線性方程y=6975.9x-2763.4（r=0.9998，n=5），奧拉西坦濃度與峰面積在54.25μg/ml～434.00μg/ml濃度范圍線性關系良好。

3.3 精密度試驗

3.3.1 進樣精密度

取奧拉西坦對照品溶液連續進樣5針，計算峰面積的RSD（%），結果為0.74%。

3.3.2 重復性試驗

取本品（批號：160401），制備6份供試品溶液，分別進樣測定，按外標法測定標示百分含量并計算RSD（%）。結果平均含量為99.63%，RSD（%）為0.48%。

3.3.3 回收率試驗

按處方量的80%、100%、120%各三份進行回收率試驗。于空白輔料中，按本品處方量（1ml注射液中含有200mg奧拉西坦）加入奧拉西坦對照品適量，用流動相稀釋制成低、中、高三種濃度溶液，作為供試品溶液；取奧拉西坦對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1ml中奧拉西坦200μg的溶液，作為對照品溶液。分別進樣20μl，按外標法分別測定含量并計算回收率，結果平均回收率為99.53%，RSD（%）為0.34%。

3.4 穩定性考察

3.4.1 對照品溶液穩定性考察

精密稱取奧拉西坦對照品適量，用流動相制成每1ml中約含奧拉西坦200μg的溶液，置冰箱4℃保存，對照品溶液在放置過程中澄清、透明，在不同時間（0H、2H、4H、6H、8H、24H）分別進樣測定，記錄色譜峰面積，結果峰面積RSD（%）為0.58%，表明對照品溶液在冰箱4℃放置24小時內基本穩定。

3.4.2 供試品溶液穩定性

取本品（批號：160401），制備供試品溶液1份，于室溫下放置，在不同時間（0H、2H、4H、6H、8H）分別進樣測定，記錄色譜峰面積，結果峰面積RSD（%）為0.75%，表明供試品溶液在室溫下放置8小時內穩定。

3.5 樣品中含量測定結果

用所驗證的奧拉西坦注射液含量測定方法，檢測三批中試樣品（批號：160601、160602、160603）結果分別為99.66%、99.12%和99.72%。

4 結論

本文所述的方法準確、簡便，專屬性強，靈敏度高，可用于奧拉西坦注射液的含量測定。

參考文獻

[1] 孫潔.奧拉西坦基礎及臨床應用研究.中外醫療，2009，27（12）。

[2] 張玉明.奧拉西坦與吡拉西坦治療腦卒中后認知功能障礙的療效對比.中國實用神經疾病雜志，2015（14）：28-30。

[3] 閆俊杰.奧拉西坦與吡拉西坦治療腦卒中后認知功能障礙的療效對比.醫藥與保健 2015（7）：91-92。

[4] 湛建峰，黃海偉，劉朝霞，張啟明.HPLC法測定奧拉西坦氯化鈉注射液中奧拉西坦含量及其有關物質.藥物分析雜志，2009，29（12）：2077-2080。