NF-κB在內毒素血癥大鼠肝損傷中的變化及意義

張慕裴凌

NF-κB在內毒素血癥大鼠肝損傷中的變化及意義

張慕1，2裴凌1

目的觀察NF-κB在內毒素血癥大鼠肝損傷中的變化，分析內毒素血癥中NF-κB表達的意義。方法選取40只健康Wistar大鼠，隨機分為肝損傷組和對照組，各20只，肝損傷組大鼠建立內毒素血癥肝損傷模型，在建模前后觀察組間NF-κB表達水平的變化。結果在造模后3 h時、6 h、12 h時，內毒素組NF-κB表達水平[（14．83±1．65）D、（21．35±2．57）D、（31．63±3．57）D]和肝損傷程度[（1．14±0．87）分、（2．06±1．03）分、（3．02±1．35）分]高于對照組，差異有統計學意義，P＜0．05。結論內毒素血癥肝損傷大鼠肝組織內NF-κB表達升高，考慮NF-κB可能參與了肝損傷過程。

NF-κB；內毒素血癥；肝損傷

內毒素血癥能夠通過引發炎癥反應對于肝臟功能造成損傷[1-3]，而急性肝損傷作為肝炎、肝癌等疾病惡化進展的重要因素，積極發掘肝損傷的病理機制對于防治疾病進展極為重要。本實驗通過觀察NF-κB活化程度在內毒素血癥肝損傷模型中的變化，旨在初步闡明NF-κB在肝損傷中的作用，現總結如下。

1 資料和方法

1.1 實驗動物

Wistar大鼠40只（中國醫科大學實驗動物中心，遼檢證第SCXK2008 0002號），體質量約為180～230 g，平均（200±19）g，雌雄各20只，適應性喂養條件均為37℃、45%濕度、自由進食，光暗比1：1。

1.2 實驗試劑

脂多糖（美國Sigma公司）；SABC試劑盒以及NF-κB抗體（武漢博士德生物工程公司）；Olympus 圖像分析系統（日本Olympus公司）

1.3 實驗方法

（1）動物分組：依據數字隨機表進行分組，每組各20只大鼠，組間大鼠的體質量、鼠齡、雌雄比差異均無統計學意義（P＞0.05）。（2）建模方法：參照相關文獻[4]利用脂多糖進行內毒素肝損傷模型建立，注射途徑為經股靜脈注射，注射劑量為5 mg/kg。對照組在同時間注射等體積無菌氯化鈉溶液（0.9%）。實驗期間所有大鼠均自由攝食，光暗比1：1。

1.4 觀察指標

在造模前、造模后3 h、6 h、12 h時分別處死5只大鼠，無菌獲取肝組織并制成石蠟標本切片，部分進行免疫組化染色處理，通過顯微鏡觀察肝組織形態變化，并根據Camargo肝組織損傷程度評價法[5]進行肝組織損傷分級，計分越高，損傷越重。另一部分制成免疫組化切片，利用Olympus顯微攝像分析系統，以積分光密度法檢測肝組織內NF-κB表達水平，每次隨機選取4個高倍（×400）光鏡視野，取4次均值作為最終結果。

1.5 統計學處理

實驗數據通過SPSS.20.0軟件進行對比，計量資料用（均數±標準差）表示，組間使用兩獨立樣本t檢驗，組內不同時間點比較用LSD-T分析，P＜0.05，差異有統計學意義。

2 結果

在造模前，兩組大鼠的肝組織形態均正常，未見損傷征象，且兩組大鼠NF-κB的積分光密度值均較低，模型組為（7.24±1.03）D，對照組為（7.15±1.04）D，組間相比，P＞0.05，差異無統計學意義。在造模后3 h時、6 h、12 h時，模型組損傷評分分別為（1.14±0.87）分、（2.06±1.03）分、（3.02±1.35）分，NF-κB積分光密度值分別為（14.83±1.65）D、（21.35±2.57）D、（31.63±3.57）D，對照組損傷評分分別為（0.15±0.03）分、（0.14±0.04）分、（0.11±0.03）分，NF-κB積分光密度值分別為（7.26±1.05）D、（7.14±1.06）D、（7.21±1.07）D，組間數據相比，P＜0.05，差異有統計學意義。在造模后，模型組肝細胞出現明顯的腫脹、變性以及炎癥浸潤表現，并隨著時間增加，損傷表現逐漸加重，且肝組織內NF-κB表達量不斷升高，與組內造模前相比，差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 討論

肝臟作為重要的解毒場所，肝功能一旦出現損傷，體內排毒機制將受嚴重影響，其不僅使疾病惡化，且易引發多器官功能衰竭，從而威脅生命安全。NF-κB作為體內關鍵性轉錄誘導因子，其能夠通過結合靶蛋白干預特定基因表達，從而對細胞分化生長、炎癥反應和免疫機制產生重要影響。相關實驗發現[6-8]，NF-κB對于肝功能具有重要影響，其在肝炎、肝癌等肝臟疾病發生發展過程中發揮重要作用。本實驗結果顯示，與對照組相比，在建模之后，模型組肝損傷評分升高，肝組織NF-κB表達水平上升，說明內毒素血癥能夠導致肝損傷，雖然正常肝細胞內能夠檢測到少量NF-κB表達，但是當肝臟發生損傷后，肝內NF-κ表達將升高。

綜上所述，內毒素血癥能夠對肝細胞造成損傷，內毒素血癥肝損傷能夠增加NF-κB表達，NF-κB可能對肝損傷機制有調控作用。

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Study On the Changes and Its Significance of NF-κB on Liver Injury for the Rats With Endotoxemia

ZHANG Mu1,2PEI Ling11 Department of Anesthesiology, The First Affiliated Hospital of China Medical University, Shenyang Liaoning 110001, China, 2 Department of Anesthesiology, Shenyang Anorectal Hospital, Shenyang Liaoning 110000, China

ObjectiveTo observe the changes of NF-κB on liver injury for the rats with endotoxemia, to analyze and the significance of NF-κB for endotoxemia.Methods40 healthy wistar rats were selected and randomly divided into liver injury group and control group. There were 20 rats in each group. The endotoxemia liver injury model was established in liver injury group. The changes of NF-κB expression level were observed before and after modeling.ResultsAfter modeling for 3 hours, 6 hours,12 hours,NF-κB expressions in endotoxin Group were [(14.83±1.65) D,(21.35±2.57) D,(31.63±3.57) D] and the degrees of liver injury were [(1.14±0.87) points,(2.06±1.03) points,(3.02±1.35) points], they were significantly higher than the control group, the differences were significant between the groups,P＜0.05.ConclusionNF-κB expression is significantly increased in liver tissue of the liver injury rats with endotoxemia,NF-κB may be the factor for liver injury.

NF-κb; endotoxemia; liver injury

R-3

A

1674-9316（2017）01-0143-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．01．092

1 中國醫科大學附屬第一醫院麻醉科，遼寧 沈陽 110001 2 沈陽市肛腸醫院麻醉科，遼寧 沈陽 110000