淺談顯色培養基檢測沙門氏菌的認識與體會

李玉 徐艷霞 孫紅 孫婷媛

淺談顯色培養基檢測沙門氏菌的認識與體會

李玉 徐艷霞 孫紅 孫婷媛

目的總結顯色培養基檢測沙門氏菌方面一些初步認識與體會。方法通過查閱相關資料和相關檢驗實踐體會，進行分析。結果沙門氏菌顯色培養基種類、應用比對研究現狀、注意事項等。結論沙門氏菌是影響食品公共衛生安全的重要因素之一，目前沙門氏菌檢測方法主要包括傳統標準檢測方法、顯色培養基法、免疫學法等。

顯色培養基；沙門氏菌；認識與體會

顯色培養基是近年來發展起來的一種新型培養基。在傳統培養基制作基礎上，添加了新型組合式特異性發色酶底物，當細菌生長代謝過程中產生的特異性酶特異性發色底物后，目標菌形成不同顏色的菌落，從而對目標菌得到快速的分離和鑒別，同時也可以進行計數。

沙門氏菌是重要食源性，目前沙門氏菌檢測主要采用傳統的生化方法，包括增菌、分離培養、生化鑒定、血清鑒定等多個步驟。耗費時間久，一般一周的時間，操作繁瑣，準確度差，近年來沙門氏菌顯色培養基以它的強選擇性，操作簡單、耗用時間短被大眾所接受[1]。與其他顯色培養基相比，接受度更好一些。經過長期使用顯色培養基進行沙門氏菌檢測的過程總結，以及查閱其他技術人員應用研究成果，得出以下幾點體會[2-3]。

1 種類

1.1 進口沙門氏菌顯色培養基

市面上的有法國科馬嘉、法國AES、英國OXOID、美國BD等品牌，他們共同特點是菌落小、沙門氏菌與其他菌落顏色對比強烈。進口沙門氏菌顯色培養基使用最廣泛的是法國CHROMagar顯色培養基，沙門氏菌顯紫色。

1.2 國產沙門氏菌顯色培養基

由于沙門氏菌顯色培養基使用方便，減少檢驗技術工作量，國內很多培養基廠家都進行了自主研發，目前國產沙門氏顯色培養基銷量最大有北京陸橋、廣東環凱、青島海博。北京陸橋的顏色判斷與法國科馬嘉顯色培養基相同：沙門氏菌為紫紅色，非沙門氏菌是藍綠色、無色或不生長。廣東環凱沙門氏菌顯色培養基2009年獲得全國發明銀獎。顏色判定為沙門氏菌為粉紅色。大腸菌群和大腸桿菌顯藍色。枸櫞酸桿菌顯紫色。其他菌落顯黃色或者無色。

2 應用研究

法國CHROMagar公司從1974年就開始研發顯色培養基，沙門氏菌顯色培養基是從2000年開始使用，使用研究有兩大方面：一是沙門氏菌顯色培養基與傳統選擇性培養基進行比對實驗，從而得出沙門氏顯色培養基可以取代傳統選擇性培養基的結論；二是國產沙門氏菌顯色培養基與進口沙門氏菌顯色培養基進行比對試驗。

2.1 培養基及試劑

亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）、GN增菌液、沙門氏、志賀氏瓊脂（SS、HE）、腸道增菌液。腸道綜合雙糖管及腸桿菌科鑒定編碼等培養基試劑購自北京陸橋生物技術有限責任公司。沙門氏菌顯色培養基（CAS）產自法國科馬嘉公司，鄭州博騫生物技術研究所分裝。沙門氏菌、志賀氏菌、大腸埃希氏菌診斷血清購自蘭州生物制品研究所。以上試劑均在有效期內。

2.2 主要儀器設備

生物安全柜、電熱恒溫培養箱、全自動高壓滅菌鍋、電子天平、顯微鏡。

2.3 方法

除培養基配制和顯微鏡觀察外，其余操作過程均在100—1000級生物潔凈室內。（1）菌株檢測方法按照GB/T4789—2008中相應操作規程進行；（2）菌株的篩選和鑒定經過初篩在CAS、SS、HE分離平板上挑取相應的疑似菌落接種雙糖鑒別生化管，初篩符合者，血清玻片凝集試驗和鏡檢，系統生化鑒別實驗。

3 討論

沙門氏菌是引起食物中毒和腸道腹瀉的病原菌之中一種，是重要的腸道病原菌[3-4]。它添加了特異的顯色底物組合能更加準確檢測出樣品中含有的沙門氏菌，大大提高了檢出率[5]。

目前傳統的沙門氏菌檢驗主要采用傳統的生化方法，包括亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液增菌，分離培養，生化鑒定，血清型鑒定等多個步驟，一般過程需要一周時間，操作復雜，已不能滿足微生物快速檢測的需要[6-8]，因此使用快速檢測準確的沙門氏菌顯色培養基來鑒定非常重要。

利用顯色培養基鑒定微生物是近年來開發的新型快速檢測技術，直接根據菌落顏色就可以對菌種做出初步鑒定，減少干擾因素。由于腸道門診中采樣及食物采樣不規范，培養基的特異性有限等因素影響，使傳統的分離方法的靈敏度有所降低。鑒于顯色培養基快速、靈敏、高效等諸多優點，其作為一種新的微生物快速檢測技術已經得到了廣泛的認可。

沙門氏菌在CAS顯色平板上菌落顏色為較易辨認的紫色，而非沙門氏菌表現為藍色或灰白色，說明CAS平板的沙門氏菌檢出率高于SS、HE平板，而且節省時間，簡化了程序。由此可見，顯色培養基是有價值的分離鑒定平板，可以作為傳統平板的補充。

綜上所述，CAS平板有易于鑒別，選擇性好，它的優勢遠大于普通培養基的選擇性，特別是突發公共衛生事件處理中，和有混合菌的沙門氏菌處理中，CAS平板是首選的，并能取得較好的結果。將顯色培養基與傳統檢測方法結合對食源泉性致病菌進行快速檢驗已成為微生物快速檢測技術發展的重要方向。

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Discussion on the Recognition and Experience of the Detection of Salmonella in the Color Development Medium

LI Yu XU Yanxia SUN Hong SUN Tingyuan Department of Bacterial Laboratory, Harbin Center for Disease Control and Prevention, Harbin Heilongjiang 150036, China

ObjectiveTo summarize in chromogenic medium for detection of Salmonella has some preliminary knowledge and experience.MethodsThrough access to relevant information and related test practice, analysis.ResultsSalmonella chromogenic culture medium, application research on status quo, matters needing attention.ConclusionSalmonella Salmonella is one of the important factors affecting the food security of public health, the current detection methods of Salmonella detection methods,including traditional standard color medium method, immunological method etc. The recognition and experience of the detection of salmonella in the color medium is summarized.

color medium; salmonella; knowledge and experience

R446．1

A

1674-9316（2017）01-0104-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．01．069

哈爾濱市疾病預防控制中心細菌檢驗科，黑龍江 哈爾濱150036