Sprague-Dawley大鼠自發性乳腺癌分子分型的動物實驗研究

郭縉 戴順東

Sprague-Dawley大鼠自發性乳腺癌分子分型的動物實驗研究

郭縉1，2戴順東1

目的 探討Sprague-Dawley（SD）大鼠患有自發性乳腺癌的分子分型情況。方法 選取20只無特定病原體級雌性4周SD大鼠。通過分析全部大鼠乳腺癌分子分型，找到自發性乳腺腫瘤相關分子分型特點。結果 LuminalA型（55．00%）乳腺癌大鼠顯著高于Basal-like型、LuminalB型和Her-2過表達型（P均＜0．05），其余三組差異無統計學意義（P均＞0．05）。結論 臨床上除常規生化指標及影像學診斷以外，配合ER、CerbB-2及PR檢測對早期鑒別大鼠乳腺癌有積極意義。

Sprague-Dawley大鼠；自發性乳腺癌；分子分型

隨著分子生物學技術的高速發展，人類完整基因圖譜得以描繪，乳腺癌的分子分型也逐漸受到更多婦科專家的重視[1]。本研究通過對雌性SD大鼠罹患乳腺癌及其分子分型數據改變的分析，旨在找到乳腺癌分子分型與疾病相關的規律，為臨床上乳腺癌的預防和預后提供一定參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

選取無特定病原體級4周齡雌性SD大鼠20只。全部大鼠均購自北京維通利華實驗動物公司（許可證號：SCXK京 2006～0009）。全部大鼠均在屏障環境動物室飼養，室內相對濕度維持在50%上下，溫度控制在24℃上下，令大鼠自行進食攝水，保持室內空氣新鮮，定時清理消毒。

1.2 乳腺癌大鼠建模

待大鼠適應2 w后，對所有大鼠一次性皮下注射二羥甲基丁酸（上海譜振生物科技公司提供）按體重20 mg/100 g，且每日向大鼠飲水中添加紫蘇油（由上海譜振生物公司提供）液體，誘導大鼠乳腺癌模型成立。

1.3 試劑與儀器

本實驗主要儀器為光學顯微鏡（由上海光學儀器廠提供）、石蠟切片機、組織包埋儀、組織攤片烤片機（均由湖北徠克醫療儀器公司提供），本實驗圖像分析程序為MoticImagesAdvanced 3.0。試驗中所需CerbB-2（即癌基因產物-胞膜-陽性率）、孕激素受體（progesteronereceptor，PR）、雌激素受體（estrogenreceptor，ER）羊抗鼠單克隆抗體（均由賽默飛世爾公司提供），DAB二抗與顯色試劑盒（由福州邁新生物公司提供）。

1.4 實驗方法

用3%水合氯醛注射建模成功的SD大鼠腹腔，待其麻醉后處死，摘取其乳腺組織，以10%甲醛固定，進行基礎透明、滲蠟、包埋等處理后制成4μm切片，脫蠟后行HE染色和免疫組化染色。在光學顯微鏡下觀察切片形態，計算高倍鏡下腺體均值。再按照試劑盒的操作說明，分別行PR、CerbB-2和ER染色。以免疫組化染色SP法進行，DAB顯色，吹干，觀察各指標陽性情況。

1.5 評價指標[2]

通過CerbB-2、PR和ER表達情況進行分型。分為：（1）LuminalA型：ER和/或PR（陽性），CerbB-2（陰性）；（2）LuminalB型：ER和/或PR（陽性），CerbB-2（陽性）；（3）Her-2過表達型：ER和/或PR（陰性），CerbB-2（陽性）；（4）Basal-like型：ER和/或PR（陰性），CerbB-2（陰性）。分別統計各型大鼠比率。

1.6 統計學方法

應用SPSS 18.0統計工具分析數據，計數資料表達方式為率（%），組間比較行χ2檢驗，P＜0.05，為差異具有統計學意義。

2 結果

本研究大鼠全部建模成功，其中LuminalA型大鼠11只（55.00%），LuminalB型2只（10.00%），Basal-like型大鼠4只（20.00%），Her-2過表達型3只（15.00%）。LuminalA型高于其他類型乳腺癌大鼠（P均＜0.05），其他三組組間差異無統計學意義（P均＞0.05）。

3 討論

乳腺癌嚴重危害女性生存安全和心理健康，且近幾年乳腺癌呈現年輕化發展趨勢，其患病率逐年增高[3-4]。臨床有研究發現，病理分期與組織學形態相同的乳腺癌患者，在治療反應性、臨床癥狀及生存期限等方面卻往往有很大差別，因而，有專家揣測，這可能與乳腺癌具有不同的分子分型結構有關[5-7]。現今，臨床上常見的乳腺癌分子分型主要有[8]：LuminalA型，該組類型內分泌或輔助化療療效相對較好，預后情況普遍較好；LuminalB型，經過內分泌治療有一定效果，但其藥效低于LuminalA型，現臨床普遍采用化療、內分泌與靶向聯合治療；Her-2過表達型，該種類型內分泌治療效果欠佳，化療療效相對較好，通常采用化療輔助靶向治療；Basal-like型，臨床常用化療治療，對內分泌療法敏感性較差，預后情況最差。雖然對乳腺癌分子分型有一定劃分，但其臨床實際應用案例較少，本實驗以SD大鼠為研究對象，通過研究發現，LuminalA型乳腺癌大鼠患病率顯著高于其他三型，說明CerbB-2、PR和ER檢測在確定乳腺癌分子分型中有一定意義，可進一步推廣到臨床人體診斷研究。

綜上所述，對SD大鼠進行自發性乳腺癌模型實驗，能夠分析出其不同的分子分型，有助于乳腺癌的臨床治療和預后評價。

[1] 齊殿君，張清富，馮亮，等． 有氧運動對DMBA誘導大鼠乳腺癌發生的影響及其機制的研究[J]． 中國婦幼保健，2014，29（18）：2981-2983．

[2] 孫永強，施文． 患乳腺癌大鼠骨髓間充質干細胞定向分化能力實驗研究[J]． 現代腫瘤醫學，2012，20（9）：1791-1794．

[3] 鄒利光，張松，戚躍勇，等． 二甲基苯蒽誘發大鼠乳腺癌的組織形態學和微血管密度觀察[J]． 現代腫瘤醫學，2012，20（1）：24-27．

[4] 賈羅琦，王超，程明軍，等． 裸大鼠人乳腺癌皮下移植瘤模型的建立和評價[J]． 復旦學報醫學版，2014，41（5）：685-689．

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[8] 金妙妙，傅健飛． 陽和化巖湯對大鼠乳腺癌癌前病變細胞超微結構的影響[J]． 中國中醫急癥，2015，24（7）：1162-1164．

Animal Experimental Study on Spontaneous Breast Cancer Molecular Classifcation of Sprague-Dawley Rats

GUO Jin1,2DAI Shundong11 Pathology Teaching and Research Section, Basic Medical College, China Medical University, Shenyang Liaoning 110122, China; 2 Toxicity Pathology Lab, Drug Safety Evaluation Center, Shenyang Chemical Industry Research Institute Co., LTD, Shenyang Liaoning 110141, China

Objective To discuss the situation of spontaneous breast cancer molecular classifcation of Sprague-Dawley (SD) rats. Methods 20 females 4 weeks SD rats without specific pathogen were selected. Through the analysis of all rats breast cancer molecular classifcation, to fnd the related molecular classification characteristics of spontaneous breast cancer. Results Luminal A type (55.00%) breast cancer rats was signifcantly higher than Basal-like type, Luminal B and Her-2 expression type (P ＜ 0.05), there was no signifcant difference in other three groups (P > 0.05). Conclusion In clinic, in addition to the conventional biochemical indexes and imaging diagnosis, the ER, CerbB-2 and PR detection have positive signifcance for early identifcation of breast cancer in rats.

Sprague-Dawley rats; spontaneous breast cancer; molecular classifcation

R-332

A

1674-9316（2017）02-0147-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．02．091

1 中國醫科大學基礎醫學院病理學教研室，遼寧 沈陽110122； 2 沈陽化工研究院有限公司新藥安全評價中心毒性病理研究 室，遼寧 沈陽110141

戴順東，E-mail：raejj070885@qq．com