尿毒癥毒素對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞外基質(zhì)的影響及臨床意義

劉孝猛 劉勁松 李萌 劉麗穎

尿毒癥毒素對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞外基質(zhì)的影響及臨床意義

劉孝猛 劉勁松 李萌 劉麗穎

目的 探討尿毒癥毒素對(duì)人體腎小管上皮細(xì)胞外基質(zhì)的影響。方法 選擇88例血清樣本。疾病組44例尿毒癥患者樣本；健康組44例健康人群樣本。結(jié)果 疾病組中20%濃度樣本膠原蛋白含量高于健康組及其它濃度樣本，纖連蛋白含量規(guī)律與膠原蛋白相同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。結(jié)論 尿毒癥毒素能夠?qū)θ梭w腎小管上皮細(xì)胞外基質(zhì)的代謝形成干擾，促進(jìn)腎小管間質(zhì)纖維化病變進(jìn)程。

腎小管上皮細(xì)胞外間質(zhì)；尿毒癥毒素；影響

腎小管結(jié)構(gòu)病變?cè)絹?lái)越受到關(guān)注，其不僅在腎臟疾病中會(huì)被累及，而且自身上皮細(xì)胞外間質(zhì)也會(huì)發(fā)生各種病變，其中以纖維化最為典型，導(dǎo)致腎臟對(duì)蛋白質(zhì)吸收率大幅下降，影響泌尿系統(tǒng)功能[1-3]。現(xiàn)研究尿毒癥毒素對(duì)人體腎小管上皮細(xì)胞外基質(zhì)病變的影響，如下為具體研究。

1 資料及方法

1.1 一般資料

研究共選擇2014年12月—2016年12月的88例受檢者。疾病組中男27例，女17例，患者年齡45～83歲，平均年齡為（65.37±2.82）歲。健康組中男29例，女15例，患者年齡44～81歲，平均年齡為（65.29±2.95）歲。兩組受檢者除患病因素外，其余一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

根據(jù)88例受檢者是否患病將其分為兩個(gè)小組，其中一組患有尿毒癥，所得數(shù)據(jù)記疾病組；另外一組則為參與體檢的健康人群，所得數(shù)據(jù)記健康組。在清晨6∶00～8∶00采集受檢者血清樣本，要求采集前至少空腹8 h，在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)將血清樣本混勻、滅活和過(guò)濾，保存溫度應(yīng)控制在零下20℃。選擇疾病組血清樣本，采用梯度稀釋法，按照5%濃度將樣本配置成濃度為20%、15%、10%以及5%四組。

將血清轉(zhuǎn)移至含有小牛血清（10%）的RPMI1640培養(yǎng)基上進(jìn)行孵化，連續(xù)培養(yǎng)24～48 h后，選擇相差顯微鏡和電鏡分別對(duì)細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行觀察，同時(shí)采用細(xì)胞角蛋白18結(jié)合免疫組化方式對(duì)腎小管上皮細(xì)胞進(jìn)行確定。在顯微鏡下腎小管上皮細(xì)胞多呈鵝卵石狀（多邊形），且單個(gè)細(xì)胞體積大于其它血清細(xì)胞，折光率較強(qiáng)，細(xì)胞間排列緊密且互相銜連，可觀察到融合性單層分布。經(jīng)過(guò)免疫組化處理后的腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕褐色顆粒物，且呈不均勻狀態(tài)分散在細(xì)胞漿內(nèi)；其它細(xì)胞漿內(nèi)無(wú)染色顆粒物，且細(xì)胞核呈紫色。電鏡下腎小管上皮細(xì)胞膜上分布由較多的微絨毛結(jié)構(gòu)，使得細(xì)胞間能夠緊密連接，其它細(xì)胞無(wú)此特征。然后將上皮細(xì)胞重新轉(zhuǎn)移至RPMI1640培養(yǎng)液上孵化，利用消化法對(duì)孵化后上清液中膠原蛋白含量進(jìn)行確定，采用ELISA法對(duì)纖連蛋白含量進(jìn)行確定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本次研究采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用（）表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05，表示數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

健康組血清中膠原蛋白含量為（30.19±1.62）μg/ml、疾病組5%濃度組含量為（35.61±2.63）μg/ml、疾病組10%組含量為（39.73±2.91）μg/ml、疾病組15%組含量為（41.07±2.33）μg/ml、疾病組20%組含量為（44.52±0.83）μg/ml。由此可見(jiàn)疾病組血清膠原蛋白含量高于健康組，各組數(shù)據(jù)間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且尿毒癥毒素濃度越高膠原蛋白含量越高。

健康組血清當(dāng)中纖連蛋白含量為（105.58±17.73）ng/ml、疾病組5%濃度組含量為（211.87±19.51）ng/ml、疾病組10%組含量為（218.03±23.62）ng/ml、疾病組15%組含量為（229.62±21.37）ng/ml、疾病組20%組含量為（244.89±15.38）ng/ml。由此可見(jiàn)疾病組血清膠原蛋白含量高于健康組，各組數(shù)據(jù)間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且尿毒癥毒素濃度越高纖連蛋白含量越高。

3 討論

腎小管上皮細(xì)胞間質(zhì)病變是所有腎臟疾病進(jìn)展過(guò)程中所必然發(fā)生的病癥，從生理功能角度看，腎小管是腎小球當(dāng)中吸收蛋白質(zhì)的主要結(jié)構(gòu)，在腎臟發(fā)病后腎小球透過(guò)率就會(huì)異常升高，此時(shí)腎小管吸收負(fù)荷增加，因而導(dǎo)致結(jié)構(gòu)病變。膠原蛋白是腎小管上皮細(xì)胞外基質(zhì)中的主要物質(zhì)，該物質(zhì)影響了基質(zhì)內(nèi)膠原纖維的合成，人體健康狀態(tài)下基質(zhì)中膠原蛋白含量非常低，從而保證其處于液體狀態(tài)[4-8]。現(xiàn)研究結(jié)果表明隨著尿毒癥毒素的不斷升高，細(xì)胞外基質(zhì)當(dāng)中膠原蛋白的含量也在不斷增加，而且高于健康人群。

纖連蛋白的主要功能是連接間質(zhì)纖維或促進(jìn)間質(zhì)纖維化，根據(jù)現(xiàn)代臨床研究顯示，當(dāng)患者腎臟發(fā)生纖維化病變時(shí)，纖連蛋白屬于最早異常增加的蛋白質(zhì)種類。該物質(zhì)可加快腎小管細(xì)胞外基質(zhì)的凝聚速度，而且可引發(fā)細(xì)胞本身纖維化，促進(jìn)纖維化后的細(xì)胞聚集。現(xiàn)研究結(jié)果中可以看出，尿毒癥毒素濃度5%時(shí)纖連蛋白含量為（211.87±19.51）ng/ml、濃度10%時(shí)為（218.03±23.62）ng/ml、濃度15%時(shí)為（229.62±21.37）ng/ml、濃度20%時(shí)為（244.89±15.38）ng/ml。纖維蛋白與膠原蛋白一樣，與尿毒癥毒素濃度呈正比，說(shuō)明尿毒癥毒素越高，腎小管上皮細(xì)胞外基質(zhì)纖維化的程度越高。

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The Effect and Clinical Significance of Uremic Toxin on the Extracellular Matrix of Human Renal Tubular Epithelial Cells

LIU Xiaomeng LIU Jinsong LI Meng LIU Liying Nephrology Department, Heilongjiang Province Hospital, Harbin Heilongjiang 150036, China

Objective To investigate the effects of uremic toxins on the extracellular matrix of human renal tubular epithelial cells. Methods 88 cases of serum samples were collected. A sample of 44 cases of uremic patients in the disease group and a sample of healthy subjects in the healthy group (n=44). Results The collagen content of the 20% samples in the disease group was significantly higher than that in the healthy group and the other samples. The content of fi bronectin was similar to that of collagen, the difference was statistically significant (P＜ 0.05). Conclusion Uremic toxin can interfere with the metabolism of extracellular matrix of human renal tubular epithelial cells, and promote the process of tubule interstitial fi brosis.

renal tubular epithelial extracellular matrix; uremic toxin; effect

R692

A

1674-9316（2017）08-0031-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．08．017

黑龍江省醫(yī)院腎內(nèi)科，黑龍江 哈爾濱 150036