抗CCP抗體檢測在診斷小兒JIA中的應用價值

徐 利，申長清，蔡文仙

(濟寧醫學院附屬醫院兒科，山東 濟寧 272000)

抗CCP抗體檢測在診斷小兒JIA中的應用價值

徐 利，申長清，蔡文仙

(濟寧醫學院附屬醫院兒科，山東 濟寧 272000)

目的 探討環瓜氨酸(CCP)抗體檢測在診斷小兒幼年特發性關節炎(JIA)中的臨床應用價值。方法 以2014年3月至2015年6月在濟寧醫學院附屬醫院接受治療的50例JIA患兒為觀察對象，同時選取50例非JIA兒童作為對照組。觀察兩組抗CCP抗體陽性和血清炎癥細胞因子水平的差異，分析抗CCP抗體陽性率和血清炎癥細胞因子水平的相關性。結果 JIA組患兒抗CCP抗體陽性率為90.00%，明顯高于對照組(16.00%)，兩組差異具有統計學意義(χ2=54.958，P<0.05)；JIA組患兒的C反應蛋白(CRP)、血沉(ESR)、白細胞計數(WBC)、白細胞介素-18(IL-18)和白細胞介素-6(IL-6)等炎癥細胞因子水平明顯高于對照組，差異均具有統計學意義(t值分別為41.878、33.074、36.034、21.288、22.911，均P<0.05)；抗CCP抗體陽性率與CRP、ESR、IL-18和IL-6等炎癥細胞因子水平均呈正相關(r值分別為0.452、0.389、0.364、0.415，均P<0.05)，而與WBC水平無明顯相關關系(P>0.05)。結論 JIA患兒抗CCP抗體陽性率較高，且與血清炎癥細胞因子水平明顯正相關，可作為臨床鑒別監測的指標。

環瓜氨酸；幼年特發性關節炎；炎癥細胞因子；相關分析

小兒幼年特發性關節炎(juvenile idiopathic arthritis，JIA)是小兒時期一種常見的結締組織病，以慢性關節炎為主要特點，可伴有全身多系統損害。長期的JIA病變可以導致脊柱、關節等部位畸形，其是導致幼兒殘疾以及失明的重要原因。臨床上對JIA的診斷主要依靠臨床癥狀以及MRI或者CT等影像學檢查，但早期JIA患者并不表現出明顯癥狀，且影像學檢查多無陽性發現，臨床應用存在一定的局限性[1-2]。

血清學指標檢測具有簡便、經濟、可反復測量等優點，類風濕因子(rheumatoid factor，RF)以及細胞炎癥因子如白細胞介素(IL)-6、IL-8等是反應JIA對幼兒患者結締組織慢性損傷的重要因素，通過RF等細胞因子的檢測可以為提高JIA早診斷的真陽性率提供參考，同時為糖皮質激素以及免疫抑制劑如環磷酰胺的治療結局提供預后參考。但相關研究證實單純RF或者聯合IL-6在評估JIA的治療轉歸中預后價值的靈敏度以及特異度的作用不佳，難以在臨床廣泛推廣[3-4]。環瓜氨酸(cyclic citrulinated peptide，CCP))抗體是以IgG型為主的抗體，對類風濕性關節炎等結締組織病具有較為理想的早期診斷評估價值[5-6]，但在JIA中的臨床探討不足。本次研究重在探討抗CCP抗體在小兒JIA中的表達變化，進而有利于對早期診斷及治療預后的評估。

1對象與方法

1.1研究對象

選取2014年3月至2015年6月在濟寧醫學院附屬醫院接受治療的50例JIA患兒為研究對象。納入標準：①年齡≤12周歲者；②確診為JIA；③無免疫系統疾病者；排除標準：①不符合納入標準者；②合并感染性疾病者；③患兒家屬拒絕參與本項研究者。根據納入排除標準共納入研究對象50例，其中男28例，女22例，年齡3～11歲，平均7.35±2.38歲；病程3個月～4年，平均1.39±0.75年。對照組為體檢排除JIA的兒童，共納入50例，男25例，女25例，年齡3～12歲，平均7.42±2.81歲。兩組患兒的年齡、性別比較均無明顯差異(均P>0.05)，具有可比性。本項研究經醫院倫理委員會評審通過，且所有患兒家屬均知情同意。

1.2方法

所有對象均在清晨空腹狀態下抽取外周靜脈血標本2mL，離心分離血清。采用電化學發光法檢測血清IL-18和IL-6，分析試劑及定標試劑均購自德國羅氏公司，分析儀器為美國雅培公司生產的i2000全自動電化學發光分析儀。

采肘靜脈血2mL血樣在室溫下靜置30min后，4 000r/min離心10min分離血清，4℃保存待測，以標準品稀釋液將標準品復溶，靜置15min后混勻，對比稀釋為7個濃度，取出板條，除了對照孔外每個孔加入不同濃度的標準品，劑量為100μL/孔，采用封板蓋封住，室溫反應120min，使用PBS液體洗滌3次，除了空白對照孔，每孔加入檢測液(100μL)，室溫孵育1h，PBS洗滌3次，加入底物(50μL/孔)，避光孵育25min，加入終止液5min后測定450nm處吸光度。CCP抗體購自南京凱基生物科技有限公司，配套試劑購自羅氏檢測公司，嚴格按照說明書的要求進行操作。

1.3評價指標

觀察兩組患兒抗CCP抗體陽性情況和血清炎癥細胞因子[C反應蛋白(CRP)、血沉(ESR)、白細胞計數(WBC)、IL-18和IL-6]水平的差異，分析抗CCP抗體陽性表達率和血清炎癥細胞因子水平的相關性。

1.4統計學方法

所有數據經雙人錄入后，采用SPSS 11.5統計學軟件進行分析。計數資料采用例或百分率表示，計量資料采用均數±標準差表示。根據資料類型采用t檢驗或卡方檢驗進行分析，采用Spearman相關分析法分析抗CCP抗體陽性表達率與血清炎癥細胞因子水平的相關性，以P<0.05為差異具有統計學意義。

2結果

2.1兩組抗環瓜氨酸抗體陽性情況

JIA組患兒抗環瓜氨酸抗體陽性率為90.0%，明顯高于對照組(16.0%)，兩組比較差異具有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組抗CCP抗體陽性的比較結果(n)

Table 1 Comparison of positive expression of anti CCP antibody between two groups(n)

2.2兩組血清炎癥細胞因子水平情況

JIA組患兒的CRP、ESR、WBC、IL-18和IL-6炎癥細胞因子水平均明顯高于對照組，兩組比較差異均具有統計學意義(均P<0.05)，見表2。

表2 兩組血清炎癥細胞因子水平的比較結果±S)

2.3抗環瓜氨酸與炎癥細胞因子水平的相關情況

抗CCP抗體陽性率與CRP、ESR、IL-18和IL-6炎癥細胞因子水平均呈正相關(均P<0.05)，而與WBC水平無明顯相關關系(P>0.05)，見表3。

表3 抗CCP抗體情況與炎癥細胞因子水平的相關性分析結果

Table 3 The correlation analysis between the expression of anti CCP antibody and the level of inflammatory cytokines

抗CCP抗體陽性率rPCRP(mg/L)0．4520．026ESR(mm/H)0．3890．019WBC(×109/L)0．1580．124IL?18(mg/L)0．3640．037IL?6(mg/L)0．4150．024

3討論

3.1目前關于幼年特發性關節炎病情評估的一般情況

國際風濕病學聯盟兒科常委專家組2001年將兒童時期不明原因關節腫脹持續6周以上，統一定為JIA，JIA包括以往幼年類風濕關節炎和幼年慢性關節炎等異質性疾病。近年來相關研究表明，隨著環境污染、自身免疫性疾病以及遺傳等因素的誘導，JIA的發病率呈現出逐年上升的趨勢[7-8]，特別是近3年來JIA的患病率和發病率可分別達0.80%和0.34%[9]。JIA患兒可出現關節畸形如腕關節強直、掌指關節半脫位和手指“天鵝頸”樣畸形，肝脾及淋巴結腫大，胸膜炎及心包炎，病變的長期發展可以導致患兒重要關節部位功能的喪失，且JIA患兒伴發的虹膜睫狀體炎可導致其失明。由于JIA患兒早期關節以及脊柱等部位的損傷表現并不典型，臨床上難以早期通過影像學進行診斷。RF可分為IgM、IgA、IgG、IgD、IgE 5型，其中針對IgG FC片段上抗原表位的一類自身抗體可以對于具有自身結締組織病以及慢性自身免疫性疾病具有良好的標記作用，然而由于正常人群中即可出現部分RF因子的陽性表達，同時類風濕性關節炎、風濕性關節炎、滑膜炎以及各種炎癥反應的急性期等均可出現RF的陽性表達[10-11]，導致RF在JIA病情嚴重程度的評估以及治療結局的預測價值不高。

3.2環瓜氨酸的背景研究分析

CCP是類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis，RA)患者血清中抗filaggrin相關抗體識別的主要組成性抗原決定簇成分，分子構造上主要由19個氨基酸殘基組成的瓜氨酸肽鏈中的2個絲氨酸替換為半胱氨酸，形成與β-轉角具有相似結構的二硫鍵結構。CCP抗體對RA具有相當高的特異性和敏感性(68%～75%)[12-13]，但與JIA的關系研究不足，鑒于CCP抗體對于自身結締組織病以及慢性自身免疫性滑膜炎癥損傷具有較為理想的標記作用，本研究創新性地探討了JIA組患兒的CRP、ESR、WBC、IL-18和IL-6炎癥細胞因子與CCP的關系，進而為揭示CCP在JIA患兒中的診斷以及預后作用提供參考。

3.3環瓜氨酸在幼年特發性關節炎中的異常表達及與血清相關指標的關系

本研究中JIA組患兒抗CCP抗體陽性率為90.00%，明顯高于對照組的16.00%，上升的CCP可以通過白細胞介素(IL-1、-6、-8)、腫瘤壞死因子(TNF)、粒-單細胞集落刺激因子(GM-CSF)等，進而誘導滑膜成纖維細胞及關節軟骨細胞的慢性炎癥性損傷，特別是對于具有明顯關節腔累及、關節畸形或者全身多個系統損傷的患者，CCP的上升往往更為明顯。Lange等[14-15]學者通過分析94例JIA患兒的臨床診斷資料，發現CCP在多關節型患兒早期出現關節僵硬、腫痛和局部發熱等癥狀時，CCP即可上升3～4倍，且隨著JIA患兒末端指關節累及程度以及數量的增加，CCP可進一步上升，線性關系較為明顯。CRP、ESR、WBC、IL-18和IL-6炎癥細胞因子是評估JIA患兒慢性結締組織病的組織損傷程度和體內炎癥系統反應的重要指標，CRP、ESR、WBC、IL-18和IL-6的上升對于早期診斷與JIA的臨床預后均具有一定的參考價值，CRP、ESR、WBC、IL-18和IL-6越高患兒的病情越為嚴重。本研究中JIA組患兒的CRP、ESR、WBC、IL-18和IL-6炎癥細胞因子水平明顯高于對照組，其中CRP可上升3～4倍，而IL-6也可上升至34.28±5.12mg/L，關節侵蝕或關節腔狹窄破壞等患兒的血清學IL-18和IL-6的上升程度往往更高，預后更差。經相關性分析可見，抗CCP抗體陽性率與CRP、ESR、IL-18和IL-6炎癥細胞因子水平均呈正相關(均P<0.05)，進一步表明CCP對于JIA患兒關節損害中以及對治療反應的預測具有潛在的價值；但本研究并未發現WBC總數與JIA病情的關系，提示臨床上不應以WBC或者中性粒細胞作為評估病情預后的指標。

綜上所述，JIA患兒抗CCP抗體陽性率較高，且與血清炎癥細胞因子水平呈明顯正相關，可作為臨床治療結局預測的重要指標，但本研究并未進行相關診斷學的分析，存在一定的不足。

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[專業責任編輯： 孫 新]

Application value of anti CCP antibody in diagnosis of juvenile idiopathic arthritis

XU Li, SHEN Chang-qing, CAI Wen-xian

(Department of Pediatric, Affiliated Hospital of Jining Medical College, Shandong Jining 272000, China)

Objective To study the clinical application value of anti cyclic citrulinated peptide (CCP) antibody expression detection in diagnosis of juvenile idiopathic arthritis (JIA) unique in children. Methods Fifty children with JIA treated in Affiliated Hospital of Jining Medical College from March 2014 to June 2015 were selected as objects, and 50 healthy children were selected in control group. The positive expression of anti CCP antibody and serum inflammatory cytokine levels were observed in two groups, and the correlation between them was analyzed. Results The positive rate of anti CCP antibody in JIA group was 90.00%, which was higher than that (16.00%) in the control group with statistically significance (χ2=54.958,P<0.05). In JIA group levels of C reactive protein (CRP), erythrocyte sedimentation rate (ESR), white blood cell count (WBC), leukocyte mediated IL-18 (IL-18) and leukocyte mediated IL-6 (IL-6) levels were significantly higher than those in the control group, and the differences were statistically significant (tvalue was 41.878, 33.074, 36.034, 21.288 and 22.911, respectively, allP<0.05). The positive rate of anti CCP antibody was positively correlated with the levels of inflammatory cytokines including CRP, ESR, IL-18 and IL-6 (rvalue was 0.452, 0.389, 0.364 and 0.415, respectively, allP<0.05), but there was no significant correlation with WBC level (P>0.05). Conclusion The positive rate of anti CCP antibody in children with JIA is higher, and it is positively correlated with the levels of inflammatory cytokines in serum. It can be taken as an index in clinical differential controlling.

cyclic citrulinated peptide (CCP); juvenile idiopathic arthritis (JIA); inflammatory cytokines; correlation analysis

2016-05-09

徐 利(1979-)，女，主治醫師，主要從事兒內科疾病的臨床診療工作。

蔡文仙，副主任醫師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.11.023

R726.8

A

1673-5293(2016)11-1364-04