伴基因斷裂的小圓細(xì)胞軟組織肉瘤3例穿刺組織活檢結(jié)果分析

緱向楠，劉秋雨，關(guān)會娟

(河南省人民醫(yī)院病理科,河南 鄭州 450003)

伴基因斷裂的小圓細(xì)胞軟組織肉瘤3例穿刺組織活檢結(jié)果分析

緱向楠，劉秋雨，關(guān)會娟

(河南省人民醫(yī)院病理科,河南 鄭州 450003)

目的 探討伴基因斷裂的小圓細(xì)胞軟組織肉瘤的臨床病理特征和分子遺傳學(xué)改變。方法 3例小圓細(xì)胞軟組織肉瘤穿刺組織，對其臨床特征、組織形態(tài)、免疫表型和熒光原位雜交結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果 患者發(fā)病年齡21～70歲，主要臨床表現(xiàn)為無痛性實性腫塊。例1為存在FKHR基因斷裂的腺泡狀橫紋肌肉瘤，鏡下瘤細(xì)胞主要為未分化的小圓形或卵圓形細(xì)胞，被不規(guī)則的纖維血管分割成巢狀、腺泡狀、管狀或裂隙狀，無基膜，免疫組化染色示Vimentin、CD56、Desmin、MyoD1和Myogenin(+)；例2為存在CHOP基因斷裂的黏液樣脂肪肉瘤或圓形細(xì)胞脂肪肉瘤，鏡下瘤細(xì)胞由形態(tài)較為一致的小圓細(xì)胞組成，排列緊密，背靠背，呈片狀或團(tuán)塊狀，有時呈梁索狀或腺樣排列，瘤細(xì)胞核質(zhì)比大，核仁不明顯，核分裂相易見，免疫組化染色示Vimentin、S-100(+)；例3為存在EWSR1基因斷裂的尤文氏肉瘤，鏡下瘤細(xì)胞由緊密成片或呈小葉狀分布的小圓細(xì)胞組成，小葉間為寬窄不等的纖維結(jié)締組織間隔，瘤細(xì)胞核圓形或卵圓形，核膜清楚，染色質(zhì)細(xì)致，呈粉塵狀，核仁小而不明顯，核分裂相易見，免疫組化染色示Vimentin、CD99、CD56、SCLC、D2-40和FLI-1(+)，AE1/AE3(部分+)。以上病例均通過熒光原位雜交法證實。結(jié)論 應(yīng)用熒光原位雜交法等分子手段檢測特異性標(biāo)記為小圓細(xì)胞軟組織肉瘤的診斷提供新的思路和視野。

小圓細(xì)胞軟組織肉瘤；穿刺組織活檢；熒光原位雜交；基因斷裂

小圓細(xì)胞軟組織肉瘤是一組光鏡形態(tài)缺乏特異性的腫瘤，但其臨床進(jìn)展快，致畸、致死率極高，一直以來是病理診斷中的難點(diǎn)[1-3]。隨著精準(zhǔn)醫(yī)療和微創(chuàng)技術(shù)的開展，穿刺標(biāo)本越來越多，由于組織少而局限，對病理診斷提出了更大的挑戰(zhàn)。本文選取3例穿刺組織病例，采用組織形態(tài)學(xué)、免疫組化及分子生物學(xué)相結(jié)合的方法來檢測確定診斷為小圓細(xì)胞軟組織肉瘤，為腫瘤的診斷提供了新的診斷思路，同時為臨床精準(zhǔn)靶向治療提供了依據(jù)[4]。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 例1：男，21歲，因“右側(cè)腰部疼痛伴小便困難1月余，加重1周”入院。患者無明顯誘因出現(xiàn)右側(cè)腰部疼痛，未給予重視，隨后出現(xiàn)小便困難，伴尿頻，無尿痛、尿血等不適。MRI:考慮前列腺占位性病變，前列腺肉瘤可能并精囊腺受累，右側(cè)盆壁及盆腔轉(zhuǎn)移可能。實驗室檢查：TPSA<0.03 ng·mL-1，F(xiàn)PSA 0.013 ng·mL-1。例2：男，28歲，因“發(fā)現(xiàn)頸部腫塊4月余，加重1周”入院。腫塊約雞蛋大小，質(zhì)韌，固定，隨吞咽上下活動，伴吞咽困難、胸悶、呼吸困難，無局部紅腫、發(fā)熱、疼痛等不適。彩超：甲狀腺右側(cè)葉后外側(cè)不均質(zhì)回聲包塊。例3：女，70歲，因“胸悶，右側(cè)肢體無力半月”入院。在當(dāng)?shù)匦行厮餍g(shù)，引流出血性液，后患者突發(fā)右側(cè)上肢不能活動。入院診斷：1)腦梗塞；2)腦動脈硬化；3)肺癌，胸腔引流術(shù)后；4)冠狀動脈硬化。CT示：右肺下葉肺癌并右側(cè)胸膜、右肺門及縱隔淋巴結(jié)、左肺上葉轉(zhuǎn)移可能性大，不除外以上部位均為轉(zhuǎn)移瘤。

1.2 方法 標(biāo)本經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%中性甲醛固定，常規(guī)取材、石蠟包埋，切片厚4 μm，HE染色，光鏡下觀察。采用免疫組化S-P法進(jìn)行指標(biāo)檢測。所用抗體：AE1/AE3、Vimentin、CD99、CD56、Desmin、MyoD1、Myogenin、Myoglobin、SCLC、D2-40、FLI-1和S-100，均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

熒光原位雜交(FISH)是一項在體外直接觀察細(xì)胞中特定核酸的技術(shù)。雜交包括以下幾個步驟：首先需要將石蠟包埋的組織切片進(jìn)行老化，預(yù)處理；其次將DNA變性為單鏈，再與探針雜交；雜交完成后，通過一系列的洗滌，將多余的未結(jié)合探針洗去，再用DAPI將細(xì)胞核復(fù)染成藍(lán)色；最后用熒光顯微鏡在合適的濾鏡下觀察DAPI及探針發(fā)出的熒光信號。FKHR基因斷裂檢測探針及EWSR1基因斷裂檢測探針均購自廣州安必平醫(yī)藥科技有限公司。

2 結(jié)果

2.1 大體觀 例1:前列腺穿刺組織：送檢碎組織，直徑約0.3 cm。例2:前上縱隔腫塊穿刺組織：送檢灰白色穿刺組織3條，長1.8～2.3 cm，直徑0.1 cm。例3：胸腔穿刺組織：送檢碎組織，直徑0.3 cm。

2.2 組織學(xué)形態(tài) 例1為存在FKHR基因斷裂的腺泡狀橫紋肌肉瘤，鏡下瘤細(xì)胞主要為未分化的小圓形或卵圓形細(xì)胞，被不規(guī)則的纖維血管分割成巢狀、腺泡狀、管狀或裂隙狀，無基膜；例2為存在CHOP基因斷裂的黏液樣脂肪肉瘤或圓形細(xì)胞脂肪肉瘤，鏡下瘤細(xì)胞由形態(tài)較為一致的小圓細(xì)胞組成，排列緊密，背靠背，呈片狀或團(tuán)塊狀，有時呈梁索狀或腺樣排列，瘤細(xì)胞核質(zhì)比大，核仁不明顯，核分裂相易見；例3為存在EWSR1基因斷裂的尤文氏肉瘤，鏡下瘤細(xì)胞由緊密成片或呈小葉狀分布的小圓細(xì)胞組成，小葉間為寬窄不等的纖維結(jié)締組織間隔，瘤細(xì)胞核圓形或卵圓形，核膜清楚，染色質(zhì)細(xì)致，呈粉塵狀，核仁小而不明顯，核分裂相易見。見圖1。

2.3 免疫組化 例1:免疫組化染色示Vimentin、CD56、Desmin、MyoD1和Myogenin(+)；例2：免疫組化染色示Vimentin、S-100(+)；例3:免疫組化染色示Vimentin、CD99、CD56、SCLC、D2-40和FLI-1(+),AE1/AE3(部分+)。

2.4 熒光原位雜交 例1為腺泡狀橫紋肌肉瘤，存在FKHR基因斷裂；例2為黏液性脂肪肉瘤，存在CHOP基因斷裂；例3為尤文氏肉瘤，存在EWSR1基因斷裂。見圖2。

圖1 3例小圓細(xì)胞軟組織肉瘤穿刺組織活檢常規(guī)病理檢查結(jié)果

A：腺泡狀橫紋肌肉瘤，瘤細(xì)胞主要為未分化的小圓形或卵圓形細(xì)胞，被不規(guī)則的纖維血管分割；B：黏膜樣脂肪肉瘤或圓形細(xì)胞脂肪肉瘤，瘤細(xì)胞由形態(tài)較為一致的小圓細(xì)胞組成，瘤細(xì)胞核質(zhì)比大，核仁不明顯；C：尤文氏肉瘤，瘤細(xì)胞由緊密成片或呈小葉狀分布的小圓細(xì)胞組成，小葉間為寬窄不等的纖維結(jié)締組織間隔

圖2 3例小圓細(xì)胞軟組織肉瘤穿刺組織活檢熒光原位雜交檢查結(jié)果

A：腺泡狀橫紋肌肉瘤，存在FKHR基因斷裂；B：黏膜樣脂肪肉瘤或圓形細(xì)胞脂肪肉瘤，存在CHOP基因斷裂；C：尤文氏肉瘤，存在EWSR1基因斷裂

2.5 治療與隨訪 例1:進(jìn)行雙側(cè)髂內(nèi)動脈造影+化療栓塞術(shù)；例2:腫物切除術(shù)后進(jìn)行化療；例3:因合并腦部疾病及肺部感染，全身情況差，患者出院。

3 討論

病理診斷主要根據(jù)組織學(xué)特點(diǎn)，對于穿刺組織，由于其病變較少，此時引入輔助診斷手段顯得尤為重要[5-6]。形態(tài)學(xué)特點(diǎn)不典型時，可用免疫組化染色、分子生物學(xué)、電鏡檢查和特殊染色等手段協(xié)助診斷。鑒別診斷：1)非霍奇金淋巴瘤，腫瘤細(xì)胞彌漫分布，腫瘤細(xì)胞表達(dá)相關(guān)的淋巴細(xì)胞性(T細(xì)胞、B細(xì)胞等)標(biāo)記；2)腺癌，腫瘤細(xì)胞表達(dá)AE1/AE3和CEA，不表達(dá)Desmin；3)透明細(xì)胞肉瘤，透明細(xì)胞型腺泡狀橫紋肌肉瘤表達(dá)Desmin和Myogenin，而透明細(xì)胞肉瘤表達(dá)HMB45和S-100等；4)神經(jīng)母細(xì)胞瘤，富于細(xì)胞的腫瘤，由成片的均一的小圓形原始細(xì)胞構(gòu)成，細(xì)胞核深染，但該腫瘤常見Homer-Wright假菊形團(tuán)，NSE、嗜鉻素和突觸素免疫染色陽性。

大多數(shù)的軟組織肉瘤中存在克隆性的細(xì)胞和分子遺傳學(xué)異常，表現(xiàn)為染色體數(shù)目、結(jié)構(gòu)的異常以及相應(yīng)基因的突變、擴(kuò)增，或表現(xiàn)為染色體易位產(chǎn)生融合基因。細(xì)胞遺傳學(xué)及分子生物學(xué)研究顯示，在70%～80%的腺泡狀橫紋肌肉瘤中可檢測到特異性染色體易位：t(2；13)(q35；q14)易位和t(1；13)(p36；q14)易位，F(xiàn)KHR可與PAX3和PAX7基因家族發(fā)生相互易位，2種易位分別形成相應(yīng)的融合基因PAX3-FKHR或PAX7-FKHR[7-8]。而胚胎性橫紋肌肉瘤卻無這2種染色體易位。CHOP位于染色體12q13.3，是轉(zhuǎn)錄因子C/EBP家族的一個成員，在正常組織中廣泛表達(dá)，累及該基因的染色體易位t(12;16)(q13;p11)和t(12;22)(q13;q12)導(dǎo)致TLS/FUS-CHOP和EWS/CHOP融合基因形成，與黏液樣脂肪肉瘤和黏液性脂肪肉瘤或圓形細(xì)胞脂肪肉瘤的發(fā)生密切相關(guān)。大于95%黏液樣脂肪肉瘤存在特異性t(12;16)(q13;p11)染色體易位，由此產(chǎn)生的TLS/FUS-CHOP融合基因被認(rèn)為是黏液樣脂肪肉瘤的一個診斷標(biāo)記。在大于90%尤文肉瘤患者中，EWSR1基因可出現(xiàn)斷裂及與多種基因融合，如與FLI1基因融合(85%)、與ERG基因融合(10%)。

通過這3例我們可以看到，小圓細(xì)胞軟組織肉瘤診斷主要依據(jù)組織形態(tài)及免疫組化染色，借助分子生物學(xué)方法進(jìn)行相應(yīng)細(xì)胞遺傳學(xué)檢測，能夠有效地輔助臨床病理診斷[9]。同時，融合基因?qū)︻A(yù)后有提示作用，融合基因PAX7-FKHR型陽性的腫瘤比PAX3-FKHR型者預(yù)后好[10]，后者已發(fā)生廣泛轉(zhuǎn)移，特別是轉(zhuǎn)移到骨髓。

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緱向楠(1986-)，女，碩士，主要從事腫瘤病理研究。E-mail:gouxiangnan@163.com

關(guān)會娟(19 -)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事腫瘤病理研究。E-mail:guanhuijuan1314@163.com

10.3969/j.issn.1673-5412.2016.06.023

R738.6

B

1673-5412(2016)06-0525-03

2016-05-12)