豬圓環病毒3型在韓國豬群中的流行狀況調查

咸 文，梁海英，曾智勇

（貴州大學動物科學學院，貴州 貴陽 550025）

豬圓環病毒3型在韓國豬群中的流行狀況調查

咸 文，梁海英，曾智勇

（貴州大學動物科學學院，貴州 貴陽 550025）

豬圓環病毒（Porcine circovirus， PCV）是環狀病毒科圓環病毒屬的無囊膜病毒，基因組為單股環狀DNA。眾所周知，豬圓環病毒1型（PCV1）和豬圓環病毒2型（PCV2）對均豬具有感染性。但是，最早被鑒定為PK-15細胞污染物的PCV1已知對豬是無致病性的，而PCV2感染則可導致諸如斷奶仔豬多系統衰竭綜合征（PMWS），豬皮炎與腎病綜合征（PDNS）及種豬繁殖障礙等多種與豬圓環病毒2型相關疾?。≒CVAD），使養豬業遭受巨大的經濟損失。在韓國，PCV2于1999年從具有PMWS的樣品中被首次鑒定報道，現已成為韓國豬群中普遍存在的病原之一。

最近，利用宏基因組學方法，在具有PDNS和繁殖障礙的臨床病例中，鑒定出一種被稱為豬圓環病毒3型（PCV3）的新型豬圓環病毒。此外，PCV3在患心臟和多系統炎癥的病豬中也可被檢測到。盡管對PCV3的關注越來越多，但目前在韓國對這種病毒的分布情況知之甚少。本研究擬對收集的口腔液樣品進行PCR檢測，以確定PCV3在韓國的流行現狀和遺傳特征。

2016年，實驗共隨機收集了源自6個地理省份的73個不同養殖規模（200～500頭母豬）的自繁自養豬場的共360管口腔液樣本（1管樣本約來自20頭豬），每個采樣豬場的臨床病史和疾病狀況未做調查。樣本被分為4組，即斷奶組（67/360），生長組（136/360），成年組（124/360）和病豬組（33/360）。所有樣品分別以3 000 r/min離心10 min處理后，取上清液分裝保存于-80 ℃備用。使用DNA提取試劑盒，分別提取-80℃保存備用的口腔液樣品中的病毒DNA。利用針對PCV3 ORF2的特異性引物，對提取的DNA進行PCR檢測，預擴增大小為330 bp(Palinski et al.， 2017)。檢測結果顯示，在360管口腔液樣本中，159個樣本呈現PCV3病毒DNA陽性（44.2%），72.6%（53/73）的豬場中存在PCV3病毒DNA，廣泛分布于韓國各省。四組中患病率最高的為病豬組，比例為51.5%；生長組（42.6%）和成年組（41.1%）明顯低于斷奶組（49.3%）。

從9個不同豬場中選出PCV3強陽性樣本，分別使用兩對PCV3特異性引物進行擴增，共獲得了9個毒株（KU毒株）的全長基因組（GenBank登錄號 KY996337 ～ KY996345）， 大 小 與其他PCV3毒株相同均為2 000 bp，推導的 ORF2大小均為645 bp。序列分析結果表明，PCV3韓國毒株與美國毒株全基因序列相似性為98.9～99.8%，推導的ORF2的序列相似性為97.9～99.8%；PCV3韓國毒株之間的全基因序列相似性為99.0%～99.9%，ORF2的序列相似性為98.1%～100%；PCV3韓國毒株與美國毒株的Cap蛋白氨基酸序列相似性均為97.6～100%。系統發育分析顯示，韓國PCV3 病毒與美國和中國PCV3 病毒株密切相關。在這兩個系統發育中，韓國PCV3毒株是分散的，沒有任何基于國家的地理關聯。

PCV3是最近在豬場中出現的一種豬的新型病毒，其感染的豬表現出PDNS和繁殖障礙等臨床癥狀；尤其是經過宏基因組測序顯示，只有PCV3能從流產胎兒中被檢測出來 (Phan et al.， 2016； Palinski et al.， 2017)。 在韓國也出現了類似情況，即從發生繁殖障礙的豬場中獲得的流產胎兒，經檢測僅從樣本中發現有PCV3，卻未檢測到任何與流產相關的其他病原體。據報道，在中國PCV3也是在繁殖障礙豬群及新生仔豬急性死亡中唯一能檢測到的病原體（Ku et al，2017）。這些報道表明，PCV3與繁殖障礙之間可能存在關系。雖然尚未在豬細胞系中分離獲得PCV3（Palinski et al，2017），但通過建立一個能在體外分離獲得病毒的體系來研究PCV3的發病機理，不失為一個新的研究方向。

本研究擴大了對PCV3分布和遺傳特征的認識，PCV3在韓國豬群中廣泛分布，病豬群樣本檢出率最高。在韓國，PCV3在豬群和豬場的陽性檢出率，明顯高于此前中國豬群（34.7%，77/222）和豬場（68.6%，24/35）的流行病學調查結果（Ku et al，2017），這可能與口腔液樣品采集方法更具廣泛性有關，其是評估豬群健康狀況的有效方法。遺傳進化分析表明，PCV3毒株間的基因組成高度相似，然而也發現了較小的遺傳多樣性。由于PCV2疫苗效果在一定程度上體現了PCV2的臨床意義，雖然PCV3的臨床意義尚未明確，但還需通過各種方法進行臨床觀察及實驗研究，以確定PCV3與臨床表現之間的關聯。

摘譯自 Taeyong Kwon 等 ， Veterinary Microbiology．2017，207：178-180

國家自然科學基金項目“豬圓環病毒iDNA標記疫苗及其免疫應答效果的研究”（項目批準號31560688）作者簡介：咸文（1992—），女，在讀碩士，研究方向：動物傳染病病原分子生物學。E-mail:572130309@qq.com

*通訊作者：曾智勇（1978—），男，教授，博士，碩士生導師，從事動物傳染病病原分子生物學研究，E-mail:zyzeng@gzu.edu.cn

2017-08-24）