蒙山黑山羊李氏桿菌與弓形體混合感染診治報告

李巖 （山東省平邑縣畜牧獸醫局流峪畜牧獸醫站 273300）

蒙山黑山羊李氏桿菌與弓形體混合感染診治報告

李巖 （山東省平邑縣畜牧獸醫局流峪畜牧獸醫站 273300）

弓形體是人畜共患的寄生蟲病，經常引起豬的感染發病，山羊較少感染發病，尤其與李氏桿菌混合感染實屬罕見。臨沂市平邑縣某黑山羊養殖戶發生了一起黑山羊弓形體與李氏桿菌混合感病例，現就其發病與診治情況報告如下。

1 流行病學調查

2016年7月14日該養羊戶飼養的52只黑山羊始陸續發病，至16d發病16只，死亡8只。發病后曾用青霉素、鏈霉素、板藍根注射液肌肉注射治療兩天，治療效果不好，陸續又有4只羊先后死亡。我們對該病的發生進行臨床流行病學調查分析，綜合臨床診斷結果和實驗室診斷結果確診本次疾病的發生，是由弓形體與李氏桿菌混合感染導致。

2 臨床癥狀

多數病羊有體溫升高現象，病羊體溫高達39～41℃，發病羊離群獨立一偶，食欲不佳，個別病羊食欲廢絕，鼻鏡干燥無光澤，個別羊鼻液呈膿性，有的出現流涎和腹瀉，疾病后期有的病羊出現小便失禁情況，初期有的羊呈現短暫的神經興奮期，出現煩躁不安的癥狀。疾病發展到中后期往往出現精神郁狀態，最后病羊臥地不起，起立后不愿行走，共濟失調及后軀麻痹，眼結膜出現潮紅，病羊眼有膿性的分泌物。一般維持2～4d后死亡。

3 剖檢變化

對發病死亡的4只黑山羊進行剖檢，剖檢結果顯示，病死羊皮下均有出血性膠凍樣淡黃色浸潤，前肢腋下較重，心肌柔軟，心臟內膜出血，心包有淡黃積液，胸腔液增多呈淡黃紅色，腸系膜淋巴結水腫增大，結腸段黏膜肥厚，真胃呈輕度卡他性炎癥。肝質地變硬發脆，表面有淡黃色的壞死灶，膽囊腫大。脾、腎等實質器官萎縮有出血點。腦、脊髓有出血點。

4 實驗室診斷

4.1 病料涂片染色鏡檢

取病死羊肝、脾、胸腔積液進行涂片，然后分別進行革蘭氏和姬姆薩染色干燥鏡檢。結果顯微鏡下各涂片中均發現散在、成對構成 “V”型或 “Y”型排列的細菌，有的幾個菌體堆在一起，細菌兩端鈍圓，革蘭氏染色為稍彎曲的陽性小球桿菌。鏡檢該菌未發現莢膜和芽胞，有2～4根鞭毛[1]。姬姆薩染色鏡檢，發現有數量不等的一端鈍圓，另一端稍尖，呈弓形或呈香蕉形的蟲體，胞漿呈淺藍色，內含有顆粒，核染成深藍紫色，偏向鈍圓的一端，每個顯微鏡視野中可見單個、成雙或多個蟲體存在[2]。

4.2 細菌分離培養

無菌采取病死羊的肝、脾、胸腔積液接種血液葡萄糖瓊脂培養基平皿中，然后放置于37℃恒溫培養箱中，培養18～24h后取出觀察結果。結果可見培養基上生長有圓形、露滴狀、透明、邊緣整齊的菌落，菌落周圍有β溶血環。用45°斜射透光顯微鏡觀察菌落形態，可見菌落呈藍綠色閃光。取呈藍綠色閃光的典型菌落穿刺接種到明膠高層培養基中，可見細菌沿穿刺線成云霧狀生長，并且瓊脂表面以下3～5mm處形成一特殊傘狀，根據細菌的生長情況，可確定該細菌有鞭毛。

4.3 生化試驗

無菌條件下，用接種針取分離菌接種于葡萄糖、果糖、蕈塘、麥芽糖、M.R、V-P、硫化氫和靛基質微量生化管中，然后放置于37℃恒溫培養箱中，培養24h后觀察結果，該菌發酵葡萄糖、果糖、蕈塘和麥芽糖，產酸不產氣。M.R和V-P反應陽性，不產生硫化氫和靛基質。

4.4 病理組織學檢驗

取新鮮病死黑山羊的肝臟、肺臟組織用10%的福爾馬林固定，石蠟包埋，切片，染色鏡檢，可見肝小葉內有散在大小不等的壞死灶，壞死灶部位的肝細胞的輪廓清楚，細胞核已經碎裂或溶解消失，在肝小葉的竇狀隙內有弓形體的滋養體；在枯否氏細胞內可見弓形體假囊呈圓形或橢圓形。肺泡壁毛細血管擴張充血，肺泡內可見均勻紅染的漿液，在肺泡上皮和塵埃細胞內可見弓形體的假囊。

4.5 動物接種試驗

取新鮮病死羊的肝臟、淋巴結，以1∶5的比例加入生理鹽水研磨，制成生理鹽水乳劑，再按每毫升加入青霉素1000U、鏈霉素100mg。然后室溫中放置1h，用前振蕩，待顆粒沉淀后，取上清液接種于小白鼠。取10只20g左右的小白鼠隨機分成試驗組和對照組，每組5只。試驗組每只腹腔接種0.5ml上述乳劑；對照組腹腔注射0.5ml生理鹽水。接種后每天進行觀察，接種27h后試驗組有一只小白鼠發病，到66h后5只小白鼠全部發病，病鼠食欲廢絕，腹部膨大，有大量腹水，最后死亡；對照組無異常變化。采集病鼠的腹水涂片染色鏡檢，可發現典型的弓形體和李氏桿菌，鏡檢結果同4.1。

4.6 血清學診斷結果

采用色素試驗 （染色試驗DT），這是弓形體病特有的血清學診斷方法，特異性較高，是標準的診斷方法。抽取接種死亡的小白鼠腹水加生理鹽水反復離心洗滌2～3次，做成每毫升含有弓形體500萬個左右的標準抗原；取發病羊的血清，置 56℃水浴中滅能 30min， 用生理鹽水做 1∶2， 1∶4， 1∶8，1∶16， 1∶32， 1∶64， 1∶128 倍的稀釋， 而后各取 0.1ml， 加入正常人血清0.2ml，再加抗原0.1ml。置37℃恒溫箱中作用12h，取出待冷，加美藍染色液2～4滴，振蕩5～6min后取出鏡檢。判斷標準為在400倍下鏡檢，如50%以上不被染色為陽性。結果大部分1∶64或1∶128為陽性 （注：此試驗應同時設3個對照，并符合判定標準），說明羊已感染弓形體[3]。

4.7 藥敏試驗

采用紙片擴散法 （K-B法）對細菌進行的敏感性試驗。以涂布法接種分離的菌株，采用無菌吸管吸取24 h細菌肉湯培養液0.2ml，滴在普通瓊脂平板表面的中央位置，用無菌涂棒將細菌懸液沿各個方向涂布均勻，室溫下放置5min，使細菌液充分吸附培養基。然后將藥敏紙片貼在培養基上，放入培養箱中培養24h后，測量抑菌圈直徑。結果如下 （括號內數值為抑菌圈直徑)。氟苯尼考 （25mm）、鹽酸左旋氧氟沙星 (20.5mm)、乳酸環丙沙星 (18mm)、恩諾沙星 (11mm)、氟哌酸 (10mm)、頭孢唑啉 (19mm)、磺胺嘧啶鈉 (10mm)、卡那霉素 (13mm)、慶大霉素 (10mm)、鏈霉素 (6mm)，對紅霉素、青霉素G、痢菌凈耐藥。

根據疾病流行病學、臨床癥狀、病理變化和實驗室診斷結果綜合判定，本次疾病的流行是由弓形體與李氏桿菌混合感染引起。

5 防治措施

對羊舍及周邊環境用百勝-30（絡合碘制劑）消毒液按1∶800比例稀釋，每天早晚各全面消毒1次；對污染的用具用1～2%的氫氧化鈉溶液浸泡進行徹底清洗消毒。對病死羊挖坑撒生石灰進行深埋處理。

發病黑山羊用氟苯尼考注射液5～10mg/kg體重的劑量肌肉注射，1次/d，連用4d。同時配合維生素B1及維生素C注射液各5ml混合一次肌注。精飼料中用磺胺嘧啶鈉10～20mg/kg體重拌料飼喂。

加強飼養管理，對未發病的黑山羊在日糧中適量的多維素及微量元素，增強機體抵抗力。同時在日糧中添加復方磺胺嘧啶。每20mg/kg，2次/d。連飲3～5d。疾病得到有效控制后要及時添加微生態制劑以調理瘤胃內正常的微生物菌群。

6 討論與小結

本病的控制是加強生物安全措施，加強飼養管理，平時注意消毒工作。該病發生后要早診斷，早治療，后期治療效果不佳。

貓是弓形體的終末宿主，帶蟲而不發病。所以養殖場內要應嚴禁飼養貓，并做好滅鼠工作。當貓糞便污染飼料及飲水。羊食用了被污染的飼料和飲水就會引起感染發病，引起本病的暴發和性流行。

該羊圈與豬圈毗鄰，豬場已于6月份發生李氏桿菌與弓形體混合感染，這是造成該次疾病流行的主要原因。因此，在養殖場建設時要充分考慮生物安全問題，避免相互感染傳播。

弓形體病和李氏桿菌均可以引起人感染發病，是人畜共患性疾病。因此，在剖檢診斷及治療時，要采取一定的保護措施和消毒工作，防止人的感染發病。

[1]楊金艷.梅花鹿弓形體與李氏桿菌混合感染的診治[J].黑龍江畜牧獸醫,2009(7):109.

[2]李海斌.豬附紅細胞體病與豬弓形體病混合感的診[J].中國畜禽種業,2012(11):106-107.

[3]陳明陽,陳志杰,李峰.豬瘟和弓形體病混合感染的診斷與防治[J].鄭州牧業工程高等專科學校學報,2011,31(3):25-27.