癸壬化石丸對大鼠亞急性毒性實驗研究

黃雨佳盧興鳳武偉楊樹娟萬婕袁葉飛　唐喻瑩　劉勇劉珉甬

【摘 要】 目的：通過癸壬化石丸對大鼠亞急性毒性實驗研究評價其安全性，為新藥開發和臨床安全用藥提供實驗依據。方法：將20只SD大鼠隨機分為對照組和實驗組，對照組用50%吐溫80+生理鹽水灌胃3mL/（次·d）；實驗組將癸壬化石丸浸膏+50%吐溫80+生理鹽水配置成濃度05g/mL混懸液（相當于生藥濃度285g/mL），灌胃3mL/（次·d），連續給藥14d。觀察大鼠一般情況（血尿、大便、活動度、體重、進食量及死亡）；血液生化檢測ALT、AST、AST/ALT、Urea；大體解剖觀察心、肺、肝、腎外觀有無異常；HE染色光鏡下觀察肝、腎組織有無病理改變。結果：實驗組與對照組一般情況比較：均無血尿，活動度、大便性狀無異常，進食量呈同步變化，體重變化差異無統計學意義（P>005）；血液生化各項指標比較差異無統計學意義（P>005）；肉眼觀察兩組大鼠心、肺、肝、腎無異常改變；光鏡觀察實驗組僅見肝細胞輕度水腫；腎小管上皮輕度水腫，局灶可見空泡變性，間質少量淋巴細胞浸潤。結論：在本實驗條件下，癸壬化石丸無明顯的亞急性毒性，安全性較高。

【關鍵詞】 癸壬化石丸；大鼠；腎結石；亞急性毒性

【中圖分類號】R2855 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）23-0046-03

腎結石是泌尿系統常見病，發病率在15%左右，尤其是中國川南地區發病率極高[1]，且采用手術治療術后再發率高達50%左右[2-3]。西藥枸櫞酸鹽、鎂制劑、磷酸鹽、乙酰半胱氨酸等對結石直徑>06cm的患者效果不明顯，且副作用較大。癸壬化石丸治療腎結石在川南地區經較長時間應用，臨床效果顯著，擬開發為國家新藥。前期試驗研究結果表明[4]，癸壬化石丸對大鼠的急性毒性經口LD50>500g/kg，按急性毒性分級標準規定，該受試物為無毒級。本研究進行大鼠的亞急性毒性試驗，旨在進一步探討癸壬化石丸的毒性作用，對其安全性進行評價，為臨床提供理論依據。

1 材料與方法

11 材料

111 實驗動物 SPF級SD大鼠20只，體重（200±20）g，雌雄各半，西南醫科大學動物實驗中心提供，實驗動物生產許可證號SCXK（川）2013-17。

112 藥物 生理鹽水（批號：15042343，美大康佳樂藥業）；5%吐溫80 （批號：080928，成都金山化學試劑）；癸壬化石丸浸膏（西南醫科大附屬中醫院制備）；戊巴比妥鈉（批號：F20050405，上海化學）。

12 方法 前期采用限量實驗，癸壬化石丸對大鼠的急性毒性經口LD50>500g/kg，按急性毒性分級標準規定，該受試物為無毒級。對照組用50%吐溫80+生理鹽水灌胃3mL/（次·d），連續14d。實驗組用癸壬化石丸最大使用濃度灌胃，即癸壬化石丸浸膏+50%吐溫80+生理鹽水配置成05g/mL混懸液（相當于生藥濃度285g/mL）灌胃3mL/（次·d），連續14d。每次癸壬化石丸浸膏灌胃劑量約75g/kg，相當于3375g生藥/kg。

13 觀察指標

131 一般情況 每天觀察記錄大鼠有無血尿，大便情況，活動度，體重變化、進食量及有無死亡。

132 血液生化 實驗第15d用3%戊巴比妥鈉腹腔麻醉后，經眼眶靜脈采血查ALT、AST、AST/ALT、Urea。

133 組織病理學 大鼠采血后斷頸處死并解剖，肉眼觀察心、肝、腎、肺外形、體積、顏色有無異常；將肝、腎用10%甲醛固定、石蠟包埋切片、HE染色后光鏡下觀察肝組織結構、肝細胞，腎小管結構、腎實質改變。

14 統計學方法 數據采用SPSS190統計軟件進行分析，計量資料以（x±s）表示，兩組間均數比較采用兩獨立樣本成組t檢驗和重復測量數據的方差分析，P<005表示差異有統計學意義。

2 結果

21 一般情況 實驗組與對照組均無血尿、大便性狀正常、活動度正常。實驗組2只、對照組1只大鼠在灌胃后立即死亡，解剖觀察各臟器無異常改變，僅見胸腔內約有2mL灌胃液，分析系灌胃溶液誤入氣管導致窒息死亡。對比進食量，實驗組與對照組進食量呈同步變化（見圖1）。隨時間推移，實驗組與對照組體重較前均穩定增長，差異有統計學意義（P<005），兩組平均體重差異無統計學意義（P>005），時間與干預因素不存在交互作用（P>005），表明癸壬化石丸對體重無明顯影響。

22 血液生化 實驗組與對照組比較，差異無統計學意義（P>005）。

23 肉眼觀察各臟器 實驗組與對照組心、肝、腎、肺外形、體積、顏色無異常。

24 病理組織檢查 對照組肝、腎均正常（見圖2、圖3）；實驗組肝組織結構基本正常，僅見肝細胞輕度水腫；腎小管結構正常，皮髓質分界清，腎小管上皮輕度水腫，局灶可見空泡變性，間質少量淋巴細胞浸潤（見圖4、圖5）。

3 討論

中醫認為腎結石本虛標實，頑固難愈，非一般草木之品所能宣達，必借蟲類走竄之品搜剔竄透，方能濁開凝去，邪去正復。癸壬化石丸是根據中醫藥“清熱利濕，化瘀通絡，補益肝腎等法于一方，攻補兼施，溶排相合”理論，結合現代生物學研究，根據腎結石的特點研制的內服中藥。前期研究表明癸壬化石丸無明顯毒副作用，為進一步評價其安全性，開展了本次研究。

動物排尿、排便、活動、進食量、體重變化是綜合反映藥物毒性對機體代謝、健康狀況影響的基本指標，本次實驗中對照組和實驗組大鼠均未見血尿，大便性狀、活動度正常，體重穩定增長，進食量呈同步變化，表明癸壬化石丸經口按劑量3375g生藥/kg灌胃，連續給藥14d對大鼠生長代謝無明顯影響（P<005）。肝臟是外源化合物在體內進行生物轉化的主要器官，由外源性化合物引起動物肝臟損害時，會引起動物血清中一系列相關酶的變化。腎臟是外源化合物及其代謝產物的主要排泄器官，也是本實驗受試藥物的主要作用靶器官，通過對腎臟功能生化指標的檢測，可了解受試藥物對腎臟功能的影響。本研究結果顯示對照組和實驗組谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、ALT/AST、尿素（Urea）差異無統計學意義（P>005），說明癸壬化石丸連續給藥14d對大鼠肝腎功能無影響。內臟是機體發揮生理功能的場所，其組織結構的改變將對機體正常生理功能的發揮產生影響。病理組織檢查顯示實驗組肝臟、腎臟有輕度細胞水腫，腎小管上皮局灶可見空泡變性，間質少量淋巴細胞浸潤，均屬可逆性改變，提示癸壬化石丸浸膏給藥劑量75g/kg，連續給藥14d對大鼠肝、腎臟產生了一定影響，發生機制有待進一步研究。

在上述實驗條件下，癸壬化石丸浸膏灌胃的安全劑量約為75g/kg，相當于3375g生藥/kg，相當于人臨床用量的20250倍（人臨床用量為100g/60kg），連續經口給藥14d對大鼠的體重、血液生化指標等均無明顯影響，而在該劑量范圍內對大鼠心、肝、腎、肺等臟器組織也無可見病變損傷，因此癸壬化石丸無明顯的亞急性毒性，安全性較高。

參考文獻

[1]師晶麗.中醫腎病臨床實踐[M].貴陽：貴州科學技術出版社，2012：53-324.

[2]朱軍，沈玉華，謝安建，等.草酸鈣型尿結石的研究進展[J].化學世界，2007，3：175-178.

[3]周向文，黃冬梅，呂建新.中醫藥治療泌尿系結石臨床研究進展亞太傳統醫藥[J].2011，4：151-152.

[4]張廣平，葉祖光.有毒中藥的“毒性”與毒性分級[J].世界中醫藥， 2014 ，9 （2）：175-177.

（編輯：梁志慶）