大黃麻黃方對大鼠血壓及血漿腎素—血管緊張素—醛固酮系統的影響※

于立杰 肖荷妹 李鳳丹 雷新鋒 李炳茂 韓衛紅

(哈勵遜國際和平醫院綜合內科，河北 衡水 053000)

實 驗 研 究

大黃麻黃方對大鼠血壓及血漿腎素—血管緊張素—醛固酮系統的影響※

于立杰 肖荷妹 李鳳丹1雷新鋒 李炳茂2韓衛紅

(哈勵遜國際和平醫院綜合內科，河北 衡水 053000)

目的 觀察大黃麻黃方對大鼠收縮壓、腎素活性(PRA)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)和血管緊張素轉換酶(ACE)的時間生物學特征的影響。方法 將64只健康雄性SD大鼠隨機分為2組，即正常對照組及大黃麻黃方組，每組各32只。正常對照組予蒸餾水10 mL，大黃麻黃方組予大黃麻黃方藥液10 mL，均每日2次灌服，連續4周。2組大鼠最后一次灌胃后分別于02：00、08：00、14：00、20：00四個時間點每組分別取8只大鼠，檢測各個大鼠收縮壓，然后處死大鼠，取心血，采用放射免疫分析法測定血漿PRA、AngⅡ和ACE，然后應用最小二乘法進行余弦擬合法(cosine fitting)，分析并比較2組血壓及血漿PRA、AngⅡ和ACE的時間生物學特征。結果 大黃麻黃方組大鼠服藥4周后02:00、08:00、14:00、20:00四個時間點收縮壓及血漿PRA、AngⅡ、ACE水平均低于正常對照組同期，比較差異均有統計學意義(P<0.05)。與正常對照組相比，大黃麻黃方組大鼠收縮壓及血漿AngⅡ、ACE曲線的中值(M)均減小，有統計學意義(P<0.05)，AngⅡ、收縮壓A變化明顯，有統計學意義(P<0.05)，同時PRA、AngⅡ的峰值時間(T)明顯變化，有統計學意義(P<0.05)。大黃麻黃方組大鼠收縮壓、PRA、AngⅡ和ACE曲線的Φ均發生不同程度的位移(P<0.05)。結論 大黃麻黃方可降低血壓，同時對維持血壓晝夜節律、改善RASS系統功能有明顯影響。

血壓；晝夜節律；大黃；麻黃；腎素—血管緊張素系統；動物實驗

正常情況下，人體血壓表現為一定的晝夜節律，呈雙峰一谷的長柄杓型[1]，即夜間血壓較日間下降10%～20%，稱之為杓型血壓。這種有規律的晝夜節律對保護心、腦、腎等器官功能有重要作用。血壓晝夜節律是獨立于血壓水平之外的心腦血管病預測因素，血壓晝夜節律消失，預示著更易發生心腦血管事件，并有更嚴重的靶器官損害傾向[2]。血壓晝夜節律主要由神經內分泌系統調節，其中腎素—血管緊張素—醛固酮(RAAS)系統對血管張力、水鈉代謝、血壓等具有重要作用[3]。報道顯示，晝夜血壓非杓型原發性高血壓患者血漿RAAS水平明顯高于杓型組，RAAS與血壓變異及晝夜節律有關[4]。近年來，中醫藥用于降低血壓、恢復異常血壓晝夜節律，以其毒副作用小、多靶點發揮療效等優點逐漸受到重視[1，5-6]。研究證實，分別由大黃、麻黃、仙鶴草、甘草組成的方劑具有調節血壓、改善靶器官損害等作用[7-9]，但其作用機制還有待進一步研究。本研究以雄性健康SD大鼠為研究對象，觀察大黃麻黃方干預對收縮壓、腎素活性(PRA)、血管緊張Ⅱ(AngⅡ)和血管緊張素轉化酶(ACE)的變化，為大黃麻黃方治療高血壓、改善RASS系統功能及血壓節律、減輕靶器官損害的影響提供實驗基礎。

1 材料與方法

1 材料

1.1.1 實驗動物 清潔級健康雄性10周齡SD大鼠64只(購自河北醫科大學實驗動物中心，動物合格證號：1404079)，體質量250～300 g。常規飼養于河北省衡水市人民醫院動物中心，自由進食，室溫(22±2) ℃。

1.1.2 藥品及試劑 大黃麻黃方組方：大黃6 g，麻黃5 g，仙鶴草15 g，甘草15 g。將上述藥品加10倍量水浸泡1 h，煮沸后小火繼續煎煮1 h，第2次加8倍量水煎煮，煮沸后小火繼續煎煮1 h，將2次煎煮的藥液合并，備用。PRA、AngⅡ和ACE測定試劑盒購自北京北方生物技術研究所有限公司。

1.1.3 主要儀器 鼠尾血壓儀采用RBP-1B型光電法鼠尾測定儀，中日友好醫院生產。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗分組及給藥方法 64只大鼠適應性飼養4周后，隨機分為2組，即正常對照組、大黃麻黃方組，每組各32只。正常對照組予蒸餾水10 mL，每日2次灌服。大黃麻黃方組予大黃麻黃方藥液10 mL，每日2次灌服。2組均連續4周。

1.2.2 檢測指標及方法

1.2.2.1 血壓測定 2組大鼠最后一次灌胃后，采用RBP-1B型光電法鼠尾測定儀分別于02：00、08：00、14：00、20：00四個時間分別測定大鼠收縮壓，2組每個時間點分別取8只進行測量。

1.2.2 PRA、AngⅡ及ACE測定 2組大鼠在02：00、08：00、14：00、20：00時間點測完血壓后，分別予10%水合氯醛0.5 mL/100 g腹腔注射，待大鼠麻醉后迅速開胸，暴露心臟，10 mL注射器抽取心室血。取血1 mL置入盛有0.3 mol/L依地酸二鈉10 μL、0.32 mol/L二巰基丙醇5 μL、0.34 mol/L 8-羥基喹啉硫酸鹽10 μL的離心管，3 000 r/min低溫離心10 min，留取血漿，-20 ℃保存備用。采用放射免疫分析法測定血漿PRA、AngⅡ和ACE，按照試劑盒說明書進行操作。

2 結 果

2.1 2組大鼠服藥4周后收縮壓及血漿PRA、AngⅡ、ACE水平比較 見表1。

由表1可見，大黃麻黃方組大鼠服藥4周后02:00、08:00、14:00、20:00四個時間點收縮壓及血漿PRA、AngⅡ、ACE水平均低于正常對照組同期，比較差異均有統計學意義(P<0.05)。

表1 2組大鼠服藥4周后收縮壓及血漿PRA、AngⅡ、ACE水平比較

與正常對照組比較，*P<0.05

2.2 2組大鼠收縮壓及血漿PRA、AngⅡ、ACE生物節律特征比較 見表2。

表2 2組大鼠收縮壓及血漿 PRA、AngⅡ、ACE生物節律特征比較

注：*數據與表1相比為原始數值所得

對2組大鼠服藥后收縮壓血漿PRA、AngⅡ和ACE進行余弦擬合法分析得出余弦擬合曲線的特征值，對各曲線的特征值分析可見，與正常對照組相比，大黃麻黃方組大鼠收縮壓及血漿AngⅡ、ACE曲線的M值均減小，有統計學意義(P<0.05)，AngⅡ、收縮壓A值變化明顯，有統計學意義(P<0.05)，同時PRA、AngⅡ的T值明顯變化，有統計學意義(P<0.05)。大黃麻黃方組大鼠收縮壓、PRA、AngⅡ和ACE曲線的Φ均發生不同程度的位移(P<0.05)。

3 討 論

非杓型血壓是左室肥厚、腦血管疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、蛋白尿的獨立危險因素[10]。研究表明，RAAS系統既參與高血壓的發病機制，也有助于逆轉異常的血壓節律[11]。RAAS系統各組分的血漿水平及其活性均表現出近日節律現象，這些物質的近日節律與其相應的mRNA表達量密切相關，而且RAAS系統各組分的mRNA表達也都存在近日節律[12]。RAAS系統是血壓調節的一條重要途徑，對血壓的時間生物學形態可能有重要影響。在某些病理條件下，RAAS系統晝夜節律紊亂，人體血壓的近日節律也相應改變，并與靶器官損害有著密切的關系。高血壓患者常常存在高腎素活性，而且高腎素型高血壓患者存在交感—腎上腺素系統和RAAS系統的激活。近年來，以整體觀念和辨證論治為核心思想的中醫越來越受到人們的重視，通過傳統中醫療法控制血壓，能夠減少藥物不良反應，恢復異常的血壓晝夜節律，減少靶器官的損害。且中藥的作用機制是多途徑、多環節、多靶點的，并能兼顧高血壓的其他病理環節[5-6]。

中醫學認為，高血壓屬于眩暈、頭痛等范疇，其病理因素主要為風、火、痰、虛、瘀，病變臟腑以肝、腎為主，涉及心、脾，病機主要與肝陽上亢、痰濁中阻、瘀血阻滯等相關?！端貑栃C原病式》載：“風氣甚而頭目眩暈者，由風木旺，必是金衰不能制木，而木復生火、風火皆屬陽，多為兼化，陽主乎動，兩動相搏，則為之旋轉?！敝赋龈侮柹峡?，風火相搏為眩暈的病機?！鹅`樞·衛氣》認為：“上虛則眩。”《景岳全書》指出：“眩暈一癥，虛者居其八九，而兼火、兼痰者不過一二?！薄蹲C治匯補·眩暈》載：“以肝上連目系而應于風，故眩為肝風，然亦有因火，因痰，因虛，因暑，因濕者?！敝赋鲲L、火、痰、虛、暑、濕6種邪氣皆可導致眩暈?！兜は姆āゎ^?！份d“頭眩，痰挾氣虛并火，治痰為主，挾補氣藥及降火藥。無痰則不作眩，痰因火動”，氣虛痰瘀，痰濁阻遏，升降失常，痰火氣逆，上犯清竅而成眩暈，力倡“無痰不作?！?。研究顯示，24 h平均血壓與機體的正邪關系密切，更能反映正邪盛衰；而晝夜節律和陰陽關系更密切，更能反映機體陰陽虛實[13]。人體氣血的盛衰、氣機的升降出入等一切節律性變化遵循著陰陽之道。李洪波等[14]研究認為，高血壓患者的血壓晝夜節律與陰陽關系密切，可以以人體一日內的陽陰消長來解釋?！端貑枴ぶ琳嬉笳摗吩唬骸捌降┲寥罩?，天之陽，陽中之陽也；日中至黃昏，天之陽，陽中之陰也；合夜至雞鳴，天之陰，陰中之陰也；雞鳴至平旦，天之陰，陰中之陽也。故人亦應之。”《靈樞·營衛生會》言:“夜半為陰隆，夜半后為陰衰，平旦陰盡而陽受氣矣。日中為陽隆，日西而陽衰，日入為陽盡而陰受氣矣，夜半而大會，萬民皆臥，命曰合陰。”《靈樞·順氣一日分為四時》載：“以一日分為四時，朝則為春，日中為夏，日入為秋，夜半為冬。朝則人氣生，病氣衰，故旦慧；日中人氣長，長而勝邪，故安；夕則人氣始衰，邪氣始生，故加；夜半人氣入藏，邪氣獨居于身，故甚也?！币陨辖浳闹赋觯讜優殛?，夜晚為陰，從白晝到夜晚的過程就是陽消陰長的過程，而從夜晚到白晝的過程則是陽長陰消的過程，人體之陰陽也隨之產生相應的變化，因此人的血壓也遵循著這種規律。血壓的高低主要由陽氣主宰，上午為“陽中之陽”，血壓在陽氣的鼓動下逐漸達到峰值，而夜半之前屬“陰中之陰”，為一日之內陰氣漸盛之時，陽氣收斂而入陰，陽氣鼓動無力，故血壓下降[15]。而高血壓患者人體陰陽失衡，陰虛不制陽，肝陽上亢，導致夜間血壓下降不夠，從而出現血壓晝夜節律異常。因此，在治療上要抓住陰虛為本、痰濁為標的發病機制，以調整陰陽為主要治則。大黃麻黃方中大黃味苦、性寒，入胃、大腸、肝、脾經，能瀉下攻積，導濕熱從大便出，活血逐瘀，推陳出新，降氣利尿，用于火熱亢盛、迫血上溢；甘草味甘、性平，可補氣健脾，清熱解毒，調和藥性，為緩急之劑，與大黃配伍，相輔相成，瀉中寓補，通中寓守，共奏清熱燥濕、益氣活血之功。血壓的升高往往由氣機升降失調引起，而麻黃外宣毛竅，下助利尿，陽氣得宣，腠理開而汗出，則氣機條達協調平衡，血液運行無阻，血壓也就自然易于恢復。仙鶴草為收澀之品，既可收元氣之耗散，又能斂虛火之浮越，兼補虛、熄風、祛痰、斂火諸功，故有止眩之效。

本研究結果顯示，經大黃麻黃方干預后的大鼠，02:00、08:00、14:00、20:00四個時間點收縮壓及血漿PRA、AngⅡ、ACE水平均低于正常對照組同期，比較差異均有統計學意義(P<0.05)。對2組相關指標生物節律特征分析顯示，經大黃麻黃方干預后的收縮壓平均值明顯下降，但峰值時間不同，峰值相位有明顯位移，大黃麻黃方組峰值時間為01:56，正常對照組峰值時間為02:31；2組大鼠血漿PRA的中值、振幅相同，但兩者的峰值相位、峰值時間明顯不同，大黃麻黃方組峰值時間為16:22，對照組為05:25；大黃麻黃方組大鼠血漿ACE濃度中值較正常對照組減小，振幅相同，但峰值相位、峰值時間不同，大黃麻黃方組峰值時間為06:31，對照組為06:07；大黃麻黃方組大鼠血漿AngⅡ的中值較正常對照組明顯減低，振幅、峰值相位、峰值時間明顯不同，大黃麻黃方組峰值時間為09:58，正常對照組為15:34。上述結果表明，大黃麻黃方對收縮壓、PRA、ACE、AngⅡ不同時間的生物學特征值有明顯的影響，從而說明大黃麻黃方對血壓及血壓的晝夜節律具有影響。研究顯示，大黃、仙鶴草有明確的降低血壓作用[7-8,16]。麻黃可以雙向調節血壓[9]。大黃能抑制去氧腎上腺素及組胺誘導的血管收縮反應；大黃還是鈣離子拮抗劑，能夠阻止鈣離子進入細胞，從而使血管松弛，阻力減小，血壓降低；大黃中含有大黃素、大黃蒽醌衍生物，其中大黃素有利尿、排尿的效果，大黃蒽醌衍生物對高血壓發病過程中血管緊張素轉化酶有抑制作用，從而降低血壓[6]。甘草有類激素樣作用，可抑制激素對自身受體的下調作用，增強和延長激素療效，其含有的甘草酸影響腎上腺素的敏感性[17]，是否對血壓及RASS系統產生影響，還有待于進一步研究。

目前，高血壓的治療原則要求不僅要降低血壓，更應關注24 h的血壓是否獲得平穩控制，清晨血壓是否相應降低，血壓變異是否降低，谷峰比值是否高于50%，并發癥的發生是否減少等。本實驗顯示，大黃麻黃方能夠降低大鼠血壓、改善RASS系統功能，維持血壓晝夜節律，有關機制有待進一步深入研究證實。

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(本文編輯：曹志娟)

Effects of Dahuang-mahuang formula on blood pressure and plasma renin-angiotensin system in rats

YULijie,XIAOHemei,LIFengdan,etal.

DepartmentofGeneralMedicine,HalisonInternationalPeaceHospital,Hebei,Hengshui053000

Objective To observe the effects of Dahuang-mahuang formula on the chronobiology characteristic of systolic pressure (SBP), plasma renin activity (PRA), angiotensinⅡ(AngⅡ), angiotensin converting enzyme (ACE) in rats. Methods 64 healthy male SD rats were randomly divided into two groups that normal control group and Dahuang-mahuang formula group, 32 rats in each group. The normal control group received distilled water (10 mL), the Dahuang-mahuang formula group received Dahuang-mahuang decoction (10 mL), gavage twice daily for four weeks. We measured all the rats' blood pressure at different times in one day (02:00, 08:00, 14：00, 20:00) after the last gavage, 8 rats in each timing, and the the rats were executed, adopt blood form heart. The plasma PRA, AngⅡ and ACE were measured by radioimmunoassay, and then analyzed the blood pressure its chronobiology characteristic of PRA,AngⅡ and ACE in two groups by means of osine fitting in two groups. Results The SBP, PRA, AngⅡand ACE after treatment in Dahuang-mahuang formula group were lower than those in control group at four timing (02:00, 08:00, 14：00, 20:00), with statistical differences (P<0.05). As compared with normal control group, the M-value of SBP, AngⅡ and ACE in Dahuang-mahuang formula group were decreased, with statistical differences (P<0.05), the amplitude (A) of AngⅡand SBP changed obviously (P<0.05), and the peak time (T) of PRA and AngⅡchanged obviously, with statistical differences (P<0.05). The peak phase (Φ) of SBP, PRA, AngⅡand ACE in Dahuang-mahuang formula group had phase shift in varying degree (P<0.05). Conclusion Dahuang-mahuang formula can decrease blood pressure, and has significant effects of maintain circadian rhythm of blood pressure and improve RASS function.

Blood pressure; Circadian rhythm; Dahuang; Mahuang formula; Renin-angiotensin system;Animal experiment

10.3969/j.issn.1002-2619.2016.11.020

※ 項目來源：河北省中醫藥管理局2014年度中醫藥類科研計劃課題(編號：2014320)

于立杰(1976—)，女，副主任醫師，碩士。從事綜合內科臨床診療工作。研究方向：心血管疾病。

R544；R285.5

A

1002-2619(2016)11-1683-05

2016-05-11)

1 哈勵遜國際和平醫院麻醉科，河北 衡水 053000

2 哈勵遜國際和平醫院中醫科，河北 衡水 053000