尿標(biāo)本前處理對(duì)測(cè)定尿微量清蛋白的影響

譚 昆，李全雙，徐 湛，任思坡，韓光宇，吳 燕，梁 軍

(1.江蘇省徐州市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所 221006;2.江蘇省徐州市中心醫(yī)院 221006;3.江蘇省徐州市糖尿病研究所 221006)

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·臨床研究·

尿標(biāo)本前處理對(duì)測(cè)定尿微量清蛋白的影響

譚 昆1，李全雙1，徐 湛1，任思坡1，韓光宇1，吳 燕1，梁 軍2,3△

(1.江蘇省徐州市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所 221006;2.江蘇省徐州市中心醫(yī)院 221006;3.江蘇省徐州市糖尿病研究所 221006)

目的 探討標(biāo)本前處理對(duì)免疫透射比濁法測(cè)定尿微量清蛋白(mALB)的影響。方法 患者尿液標(biāo)本54例，其中清澈組25例，渾濁組29例。清澈組、渾濁組均分為3組，未離心組、離心1 min組及離心5 min組，用免疫透射比濁法檢測(cè)mALB。結(jié)果 清澈組3組之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；渾濁尿標(biāo)本中mALB檢測(cè)未離心組與離心1 min和5 min組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而2組離心標(biāo)本之間mALB檢測(cè)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 清澈尿標(biāo)本可直接用于mALB檢測(cè)，而渾濁尿標(biāo)本需離心1 min后測(cè)定結(jié)果較準(zhǔn)確。

尿微量清蛋白； 透射免疫比濁法； 尿液； 離心

尿微量清蛋白(mALB)是指在尿液中含有的微量清蛋白，其濃度的正常范圍小于20 mg/24 h[1]，是臨床上發(fā)現(xiàn)早期腎損傷的一種重要的預(yù)示因子之一[2]。透射免疫比濁法測(cè)定mALB操作簡(jiǎn)便、快速，可隨時(shí)進(jìn)行標(biāo)本相關(guān)檢測(cè)，已在臨床實(shí)驗(yàn)室得到廣泛應(yīng)用[3-4]。但由于受患者飲食、疾病等影響導(dǎo)致患者尿標(biāo)本渾濁程度不一。渾濁尿標(biāo)本較為復(fù)雜，常含有微顆粒、細(xì)胞碎片等，常會(huì)對(duì)mALB測(cè)定產(chǎn)生，本研究通過對(duì)患者尿標(biāo)本進(jìn)行不同時(shí)間離心處理，探討對(duì)mALB檢測(cè)的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年徐州市中心醫(yī)院住院患者尿液標(biāo)本54份，每份標(biāo)本尿液6 mL，mALB濃度10～180 mg/L。

1.2 方法與儀器 將尿液標(biāo)本分為清澈組25例，渾濁組29例，每例標(biāo)本平均分為3份，每份2 mL，分別標(biāo)記為未離心組、離心1 min組、離心5 min組，離心速度3000 r/min；用透射免疫比濁法分組檢測(cè)mALB，先檢測(cè)清澈組后檢測(cè)渾濁組，分別按離心5 min組、1 min組和未離心組順序測(cè)定。奧林巴斯AU400全自動(dòng)生化分析儀，試劑上海科華生物科技公司。批量選擇mALB檢測(cè)項(xiàng)，儀器自動(dòng)檢測(cè)并顯示結(jié)果。

2 結(jié) 果

清澈組中3組間mALB水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；渾濁組中，未離心組與離心1min組及離心5min組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而離心1min和5min組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 清澈組和渾濁組mALB測(cè)定結(jié)果

3 討 論

正常狀態(tài)清蛋白很難通過腎小球?yàn)V過膜，只有極少量的清蛋白可通過尿液排出到體外，但隨著腎小球?yàn)V過膜功能與結(jié)構(gòu)的異常改變，導(dǎo)致清蛋白的排出增加，靈敏地反映出腎臟開始出現(xiàn)異常，滲漏蛋白質(zhì)。尿清蛋白是腎臟疾病的一個(gè)重要指標(biāo)，在某些腎病疾病的早期，用尿常規(guī)測(cè)定蛋白常為陰性，但此時(shí)尿中蛋白含量實(shí)際已有增加。一旦發(fā)現(xiàn)糖尿病、高血壓、心血管等疾病對(duì)腎臟造成損害，可以對(duì)尿中的mALB進(jìn)行相應(yīng)檢測(cè)，達(dá)到早期診斷、監(jiān)控，有效地預(yù)防并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展[5]。糖尿病的病程和年齡與mALB的發(fā)生有密切關(guān)系[6]。一般發(fā)現(xiàn)mALB時(shí)，糖尿病的病程至少5年以上，糖尿病臨床腎病多發(fā)生在糖尿病發(fā)病后10～15年，隨著病程的發(fā)展，若血糖得不到有效控制，部分患者將最終發(fā)展成尿毒癥期，有效地控制糖尿病患者的血糖，推遲發(fā)病時(shí)間，能降低糖尿病代謝對(duì)自身腎臟等器官的損害和并發(fā)癥的出現(xiàn)。糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展與脂代謝發(fā)生紊亂有密切關(guān)系。血脂的異常與mALB有一定的關(guān)系。糖尿病患者由于血糖升高明顯，胰島素相對(duì)缺乏，胰島抵抗，使游離脂肪酸升高，卵磷脂膽固醇轉(zhuǎn)肽酶等活性降低，肝脂酶活性升高等，從而出現(xiàn)三酰甘油、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇升高等脂代謝的紊亂。糖尿病腎臟嚴(yán)重程度與糖化血紅蛋白的增高有一定的關(guān)聯(lián)，長(zhǎng)期糖化血紅蛋白增高，會(huì)增加mALB的排出。

目前，國(guó)際上十分重視mALB的測(cè)定，認(rèn)為尿mALB的測(cè)定不僅是對(duì)糖尿病腎病的早期診斷和改善預(yù)后具有重要意義，評(píng)估并發(fā)癥的危險(xiǎn)，而且對(duì)高血壓、腎病及心血管疾病等都有極其重要的診斷價(jià)值[7-8]。免疫透射比濁法的原理是可溶性抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)后形成的免疫復(fù)合物，使介質(zhì)濁度發(fā)生了改變，光線通過抗原抗體反應(yīng)后的溶液時(shí)，被其中免疫復(fù)合物微粒吸收，在保持抗體過量的情況下，吸光度(A值)與免疫復(fù)合物呈正相關(guān)。與已知濃度的抗原標(biāo)準(zhǔn)品相比較，可確定標(biāo)本中抗原的含量。免疫透射比濁法測(cè)定mALB具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、測(cè)定范圍寬、試劑穩(wěn)定性好及操作簡(jiǎn)便快速易于自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)[9]，影響透射免疫比濁法檢測(cè)靈敏度和特異度的主要因素有以下兩個(gè)方面：(1)反應(yīng)體系中抗原抗體復(fù)合物濃度和特性；抗體特異性高、親和力強(qiáng)，反應(yīng)的特異性強(qiáng)。(2)反應(yīng)體系中的基質(zhì)會(huì)影響光散射。反應(yīng)體系的基質(zhì)影響主要來源于標(biāo)本，如血清標(biāo)本高脂血會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。本方法的mALB濃度范圍在10～180mg/L，如果濃度超過500mg/L，會(huì)受到前帶現(xiàn)象的影響，結(jié)果可能呈假性降低，分析前用0.9%NaCl稀釋使它的濃度處于10～180mg/L。留尿前，患者應(yīng)避免鍛煉或運(yùn)動(dòng)，若不能及時(shí)測(cè)定，向尿液中加入防腐劑，貯存于2～8 ℃,另外分析前的質(zhì)量控制對(duì)標(biāo)本準(zhǔn)確檢測(cè)也有重要的意義[10]。郭蔚等[11]比較了尿液留取的時(shí)間對(duì)檢測(cè)mALB的影響；劉新華等[12]探討了低溫保存對(duì)mALB檢測(cè)結(jié)果的影響。而尿液中微顆粒等對(duì)測(cè)定的影響尚未有研究探討。本研究是通過對(duì)不同渾濁程度的尿液標(biāo)本進(jìn)行測(cè)定前處理，以此來探討尿液微顆粒等對(duì)測(cè)定的影響情況。從數(shù)據(jù)可以看出，尿液標(biāo)本清澈的標(biāo)本無需離心(均P>0.05)，可以直接檢測(cè)；而渾濁尿液標(biāo)本，微顆粒對(duì)測(cè)定結(jié)果有顯著影響，需要先離心后檢測(cè)，離心速度3 000r/min，時(shí)間可以由5min縮短到1min。從而得出結(jié)論，使用透射免疫比濁法檢測(cè)mALB時(shí)，清澈尿液標(biāo)本的標(biāo)本無需離心，可以直接檢測(cè)；使用透射免疫比濁法檢測(cè)mALB時(shí)存在微顆粒干擾，使mALB測(cè)量值偏高，因此，對(duì)臨床渾濁的尿液標(biāo)本，應(yīng)先離心后測(cè)量。 離心速度在3 000r/min時(shí)，離心5min和離心1min對(duì)檢測(cè)mALB結(jié)果無影響，可以將離心時(shí)間縮短至1min，提高檢測(cè)效率。

本實(shí)驗(yàn)通過優(yōu)化尿液標(biāo)本前處理操作步驟，消除尿液標(biāo)本中微顆粒等物質(zhì)對(duì)mALB檢測(cè)的影響，減少標(biāo)本測(cè)量誤差對(duì)疾病診療的影響。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.24.036

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1673-4130(2016)24-3474-03

2016-05-29

2016-09-02)

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