改良龍膽紫快速染色法檢測陰道分泌物真菌的研究應用

張 玲,陳艷文,周碧云,李淑嘉,趙 望,巫小莉

(廣州金域醫學檢驗中心 510168)

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·臨床研究·

改良龍膽紫快速染色法檢測陰道分泌物真菌的研究應用

張 玲,陳艷文,周碧云,李淑嘉,趙 望,巫小莉△

(廣州金域醫學檢驗中心 510168)

目的 研究一種簡易快速染色法，提高陰道真菌的檢出率，為臨床提供診斷依據。方法 改良龍膽紫快速染色法：于白帶常規的試管中加入生理鹽水約0.3 mL，龍膽紫(革蘭Ⅰ液)1滴，室溫染2 min，1滴懸液均勻涂于玻片中鏡檢。結果 孢子無色而夾膜則呈亮黃綠色，真菌菌絲著色不均勻呈紫色或無色，上皮細胞、白細胞、球菌、加德納菌、線索細胞染成紫色，滴蟲、乳酸桿菌不上色，紅細胞呈暗紅色。孢子檢出率高于革蘭快速染色法和生理鹽水懸液濕片法。結論 改良龍膽紫快速染色法，融合了傳統生理鹽水懸液濕片法和革蘭快速染色法的優點，快速、簡單，易掌握，涂片色差大，孢子易于辨認，檢測準確性高，實用性強，有臨床應用價值。

改良龍膽紫快速染色法; 革蘭快速染色法; 生理鹽水懸液濕片法; 真菌

真菌、細菌及滴蟲性陰道炎、子宮炎是婦科的常見病和多發病，但這3種病患者的臨床表現常無區別[1]。陰液(白帶)常規是婦科炎癥一種常見的常規檢查手段，檢查結果準確與否直接影響臨床醫生對患者的診斷、用藥和治療，如何能快速準確給臨床提供診斷依據，是檢驗界一直探討的問題。常用的生理鹽水懸液濕片法干擾因素多，體積細小的孢子混雜在分泌物中容易漏檢，所以檢出率低[2]；而革蘭快速染色法操作繁瑣檢測時間長，難以應付大批量的門診標本，為改變這種局面，作者嘗試用龍膽紫(革蘭第Ⅰ液)直接滴加到白帶常規鹽水懸液中染色，濕片鏡檢,收到理想的效果，作者稱之為改良龍膽紫快速染色法。

1 材料與方法

1.1 材料 奧林巴斯BX-43雙目顯微鏡、玻片、0.9%生理鹽水、革蘭染色液(貝索企業，批號415061)。

1.2 標本來源 376例來自廣州中醫藥大學金沙洲醫院2015年11月體檢中心及婦科門診患者陰液常規標本。

1.3 方法

1.3.1 0.9%生理鹽水懸液濕片法 于陰液常規管內加入生理鹽水約0.3 mL制成懸液，涂片高倍鏡(40×)鏡檢(并留用于革蘭染色)。

1.3.2 革蘭快速染色法 上述涂片，按照《全國臨床檢驗操作規程》進行初染、媒染、脫色、復染[3]，油鏡(100×)鏡檢。

1.3.3 改良龍膽紫快速染色法 于上述0.9%生理鹽水懸液(約0.3 mL)中加入龍膽紫(革蘭Ⅰ液)1滴，室溫染2 min，1滴懸液均勻涂于玻片中，高倍鏡(40×)鏡檢。

2 結 果

2.1 生理鹽水懸液法 背景雜質多，孢子不易辨認，特別是不典型的小孢子,很容易漏檢；見圖1。

2.2 革蘭快速染色法 孢子、菌絲、乳酸桿菌染成紫色，上皮細胞、白細胞、加德納菌、線索細胞、染成紅色；見圖2。

注：菌絲+孢子。

圖1 生理鹽水懸液法(高倍鏡，40×)

注：菌絲+孢子。

圖2 革蘭快速染色法(油鏡，100×)

2.3 改良龍膽紫快速染色法 孢子無色而夾膜則呈亮黃綠色，真菌菌絲著色不均勻呈紫色或無色，上皮細胞、白細胞、球菌、加德納菌、線索細胞染成紫色，滴蟲、乳酸桿菌不上色、紅細胞呈暗紅色，見圖3。

2.4 3種方法結果對比 376例陰液常規標本，真菌檢出率以改良龍膽紫快速染色法為首，革蘭快速染色法為次，生理鹽水懸液濕片法次之，結果見表1。

注：菌絲+孢子。

圖3 改良龍膽紫快速染色法(高倍鏡，40×)

3 討 論

陰道分泌物檢查真菌，是診斷女性生殖道真菌感染的一種最直接有效的方法，結果準確與否嚴重影響臨床醫生對患者的診斷、用藥和治療[4-7]。目前很多醫院都在采用生理鹽水濕片法或革蘭快速染色法。生理鹽水濕片法，背景雜質多，孢子不易辨認，容易漏檢和誤檢，檢出率低；革蘭快速染色法經過固定、初染、媒染、脫色、復染等步驟，操作繁瑣，檢測時間長，難以應付大批量的門診標本。而且在工作中發現，革蘭快速染色法雖然有固定的步驟，孢子會在染片過程中因沖洗而流失部分不易找到，往往造成鏡檢時間長的局面；改良龍膽紫快速染色法，孢子無色而夾膜則呈亮黃綠色，真菌菌絲著色不均勻，呈紫色或無色。不僅孢子、菌絲易于辨認，而且還不影響不干擾陰液常規中其他項目的檢查，上皮細胞、白細胞、球菌、乳酸桿菌、加德納菌、線索細胞染成紫色、滴蟲無色(滴蟲在懸液中與鹽水濕片法一樣會游動)、紅細胞呈暗紅色。孢子與涂片顏色反差大，很容易辨別。但隨著染色時間延長，鏡檢中也可以看到染成紫色的孢子，可能是孢子離體時間長，新陳代謝減弱，還原性減弱，滲透到孢子壁內的染液增多，故而染上色，作者認為這一類是死孢子；而活孢子細胞壁完整光滑，染液不易滲透至孢子體內[8]，故不上色。建議染色時間以2 min為宜，一般不超過10 min。

改良龍膽紫快速染色法檢測陰道真菌，融合了傳統生理鹽水懸液濕片法和革蘭快速染色法的優點，涂片色差大，孢子易于辨認，檢測準確性高，實用性強，有較高的推廣應用價值。

[1]王武．3種方法檢測陰道分泌物常規對比分析[J]．檢驗醫學與臨床，2011，8(8)：959-960．

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.24.035

A

1673-4130(2016)24-3473-02

2016-05-26

2016-07-29)

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