高效液相色譜法測定胃樂膠囊中硫酸阿托品含量

李德潮

（廣西醫(yī)科大學(xué)制藥廠，廣西 南寧 530021）

高效液相色譜法測定胃樂膠囊中硫酸阿托品含量

李德潮

（廣西醫(yī)科大學(xué)制藥廠，廣西 南寧 530021）

目的 建立測定胃樂膠囊中硫酸阿托品含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱為Kromasil C18柱（250 mm×4．6 mm，5 m），流動(dòng)相為0．05 mol／L磷酸二氫鈉溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至2．8）－乙腈（90∶10），柱溫為30℃，流速為1．0 mL／min，檢測波長為210 nm。結(jié)果 硫酸阿托品質(zhì)量濃度在10．0～100．0 g／mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，平均回收率為98．88%，RSD為0．50%(n＝6)。結(jié)論 該方法準(zhǔn)確、靈敏、重復(fù)性好，可作為胃樂膠囊的質(zhì)量控制方法。

高效液相色譜法；胃樂膠囊；硫酸阿托品；含量測定

胃樂膠囊為復(fù)方制劑，由氫氧化鋁、白及、顛茄流浸膏等組方，具有行氣止痛、收斂生肌、促進(jìn)潰瘍愈合的功效，臨床用于治療胃脹悶疼痛、噯氣泛酸、惡心嘔吐、食少、疲乏無力、大便不暢等疾病，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十七冊)》。處方中顛茄流浸膏的主要有效成分為硫酸阿托品，為解痙藥，可解除平滑肌痙攣、鎮(zhèn)痛等[1]，是胃樂膠囊止痛功效的主要組分。其現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無顛茄流浸膏主要成分的定量分析。為提高胃樂膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，筆者參考文獻(xiàn)[2－5]，采用高效液相色譜(HPLC)法測定硫酸阿托品含量，操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（515泵，美國Waters公司）；天平（德國Sartorius公司）；臺(tái)式超聲波振蕩儀。硫酸阿托品對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100040－201312）；胃樂膠囊（廣西醫(yī)科大學(xué)制藥廠，批號分別為20141101，20141201，20150101）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件[3]及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0．05 mol／L磷酸二氫鈉溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至2．8）－乙腈（90∶10）；流速：1．0 mL／min；檢測波長：210 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)以硫酸阿托品峰計(jì)算不低于4 000。在此色譜條件下，對照品溶液與供試品溶液在相同保留時(shí)間處有相同的色譜峰，供試品溶液有效峰與雜峰能很好分離，分離度大于2．0，拖尾因子不超過1．05，陰性對照品溶液與對照品溶液及供試品溶液在相同保留時(shí)間處無相應(yīng)色譜峰，色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

精密稱取120℃干燥至恒重的硫酸阿托品對照品10．0 mg，置100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取胃樂膠囊20粒，取藥粉，研細(xì)，精密稱取4．0 g，置具塞三角瓶中，加流動(dòng)相溶液20．0 mL，稱重，超聲30 min，完全溶解，放冷，稱重，用流動(dòng)相溶液補(bǔ)足質(zhì)量，充分搖勻，用微孔濾膜（0．45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按胃樂膠囊的處方比例及制備工藝，制成缺顛茄流浸膏的制劑，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取對照品溶液 1．0，2．0，4．0，6．0，8．0，10．0 mL，置10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶液稀釋至刻度，搖勻，得10．0，20．0，40．0，60．0，80．0，100．0 μg／mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣10 μL，以硫酸阿托品峰面積（A）為縱坐標(biāo)、對照品質(zhì)量濃度（C，μg／mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A＝54 960 C－26 758，r＝0．999 5（n＝6）。結(jié)果表明，硫酸阿托品質(zhì)量濃度在10．0～100．0 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對照品溶液5．0 mL，置10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶液稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果的 RSD為0．68%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液（批號為20141201），分別于 0，2，4，6，8，12，16 h時(shí)進(jìn)樣。結(jié)果的 RSD為 0．64（n＝7），表明供試品溶液在 12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取本品（批號為20141101）適量，按擬訂方法分別制備5份供試品溶液，進(jìn)樣測定。結(jié)果的RSD為0．59%（n＝5），表明該方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取樣品(批號為20141201，含量以0．143 mg／g計(jì)）3．0 g 6份，分別置20 mL容量瓶中，再分別精密加入硫酸阿托品對照品溶液 1．0，4．0，7．0 mL，按擬訂方法制備6份供試品溶液，測定硫酸阿托品的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

2．4 樣品含量測定

取本品3批，測定硫酸阿托品含量。結(jié)果批號為20141101，20141201，20150101的樣品中硫酸阿托品的含量分別為0．143，0．143，0．144 mg／g。

表1 硫酸阿托品加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

3 討論

胃樂膠囊為復(fù)方制劑，含顛茄流浸膏成分較少，要盡可能地提取完全硫酸阿托品，才能準(zhǔn)確地定量檢測。參考文獻(xiàn)[3－6]，試驗(yàn)了2種提取方法：用氨溶液溶解樣品，然后用乙酸乙酯萃取；用超聲波振動(dòng)提取。結(jié)果用第2種方法提取硫酸阿托品更完全。同時(shí)，試驗(yàn)分別采用10，20，30，45，60 min進(jìn)行超聲提取，結(jié)果提取30 min后硫酸阿托品提取率趨于恒定，故確定30 min為超聲提取時(shí)間。

試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，流動(dòng)相及流動(dòng)相成分比例對本法測定含量有較大影響。試用了水－甲醇、磷酸五氫鈉溶液－乙腈、水－緩沖鹽－乙腈等，經(jīng)反復(fù)多次試驗(yàn)，選用磷酸二氫鈉溶液－乙腈為流動(dòng)相較合適；同時(shí)，試驗(yàn)中改變流動(dòng)相中磷酸二氫鈉與乙腈的比例，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈量減少，洗脫時(shí)間會(huì)相應(yīng)延長，且峰形拖尾嚴(yán)重，檢測靈敏度降低明顯；磷酸二氫鈉量減少，樣品中硫酸阿托品峰與其他峰分離不好。本研究中選定的流動(dòng)相及成分比例比較合適，分離度好且保留時(shí)間適宜。

本研究中建立的HPLC法測定胃樂膠囊中硫酸阿托品的含量，能有效分離色譜峰，精密度、重復(fù)性及線性關(guān)系良好，回收率滿意，方法可行，可作為胃樂膠囊的質(zhì)量控制方法。

[1]肖培根．新編中藥志[M]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：402．

[2]李曉燕，呂 杰．高效液相色譜法測定硫酸阿托品注射液的含量[J]．中國藥業(yè)，2009，18（13）：29－30．

[3]國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：396－397．

[4]劉益慶，陳乃江．高效液相色譜法測定維U顛茄鋁鎂片中硫酸阿托品含量[J]．中國藥業(yè)，2011，20（10）：35－36．

[5]黃東亮，黃小玲．超聲波提取顛茄草有效成分莨菪堿的技術(shù)[J]．中國藥業(yè)，2002，11（10）：58－59．

[6]韓忠剛，馮 華，羅秀瓊．HPLC色譜法測定顛茄浸膏片中硫酸阿托品的含量[J]．中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，14（9）：82－83．

Determination of Atropine Sulfate in Weile Capsules by HPLC

Li Dechao
（Pharmaceutical Factory of Guangxi Medical University，Nanning，Guangxi，China 530021）

Objective To establish an HPLC method for the determination of atropine sulfate in Weile Capsules．M ethods The chromatographic column was the Kromasil C18column（250 mm×4．6 mm，5 μm）at the temperature of 30℃，with 0．05 mol／L sodium dihydrogen phosphate solution（adjusting pH to 2．8 with phosphoric acid）－acetonitrile（90∶10）as the mobile phase and detected with UV 210 nm and the flow rate of 1．0 mL／min．Results The Atropine Sulfate in the range of 10．0－100．0 μg／mL showed good linear relatiomship with the peak area，the average recovery rate was 98．88%，RSD＝0．50%(n＝6)．Conclusion This method is accurate，sensitice and reproducible，which can be used for the determination of atropine sulfate in Weile Capsules．

HPLC；Weile Capsules；atropine sulfate；content determination

李德潮（1972－），男，高級工程師，主要從事質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和制劑開發(fā)研究工作，（電話）0771－5350239。

2015－02－05；

2015－07－13)

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)02－0068－02