六味地黃膠囊質量標準提升研究

張 競，王艷偉

（河南省食品藥品檢驗所，河南 鄭州 450003）

六味地黃膠囊質量標準提升研究

張 競，王艷偉

（河南省食品藥品檢驗所，河南 鄭州 450003）

目的 建立測定山茱萸中馬錢苷含量的高效液相色譜（HPLC）法，修訂并提高六味地黃膠囊的質量標準，增加熟地黃的薄層色譜鑒別方法。方法 色譜柱為 Agilent Zorbax SB－C18柱（250 mm×4．6 mm，5 m），流動相為乙腈－0．05%磷酸溶液（9∶91），流速為1．0 mL／min，檢測波長為236 nm。結果 薄層色譜斑點清晰，陰性無干擾，馬錢苷進樣量在0．099～1．324 g范圍內與峰面積線性關系良好（r＝0．999 9），平均回收率為99．13%，RSD為1．43%（n＝6）。結論 該法操作簡便、專屬性強，能更好地控制六味地黃膠囊的質量。

六味地黃膠囊；薄層色譜鑒別；馬錢苷；高效液相色譜法

六味地黃膠囊收載于 2010年版《中國藥典（一部）》，由熟地黃、酒萸肉、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉組方，用于腎陰虧損、頭暈耳鳴、腰膝酸軟、骨蒸潮熱、盜汗遺精、消渴，療效確切，是滋陰補腎的代表方劑[1]。臣藥酒萸肉中含有熊果酸、馬錢苷、齊墩果酸等有效成分，現行質量標準采用薄層掃描法來測定酒萸肉中熊果酸的含量，專屬性不強。現代研究證明，熊果酸并不是真正的活性成分，而馬錢苷能顯著增強機體免疫、抗炎、抗休克的作用，是酒萸肉的主要活性成分[2－3]。為更好地控制產品質量，本試驗中參考文獻[4－11]建立了測定六味地黃膠囊中馬錢苷含量的高效液相色譜法，并增加了熟地黃的薄層色譜鑒別，為六味地黃膠囊的質量控制提供參考。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀－Waters 2998二極管陣列檢測器；AX205DR型電子天平（瑞士Mettler公司）。六味地黃膠囊（不同生產企業提供，共14批次）；馬錢苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為111640－200503）；熟地黃對照藥材（中國藥品生物制品檢定所，批號為121196－200502）；甲醇、乙腈為色譜純（Merck公司），水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 薄層色譜鑒別(熟地黃)

取本品內容物3 g，加水50 mL，溫熱使充分溶散，加熱至沸，放冷，離心，取上清液，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取熟地黃對照藥材4 g，加水60 mL，煎煮30 min，放冷，用脫脂棉濾過，濾液用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。按處方和制備工藝制備缺熟地黃的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。取上述3種溶液各4 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以二甲苯－乙酸乙酯（1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2，4－二硝基苯肼乙醇試液。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，見圖1。耐用性試驗考察了高濕度與低濕度（RH 75%，RH 25%）、室溫與低溫（RT 20℃，RT 18℃，RT 7℃）、不同廠家薄層色譜板（青島海洋化工廠分廠、煙臺市化學工業研究所）對薄層色譜峰的影響。結果表明，色譜分離基本無影響，方法可行。

圖1 薄層色譜圖

2．2 酒萸肉中馬錢苷含量測定

2．2．1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Agilent Zorbax SB－C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），以乙腈－0．05%磷酸溶液（9∶91）為流動相；流速：1．0 mL／min；檢測波長：236 nm；進樣量：10 μL。理論板數按馬錢苷峰計算應不低于4 000。

2．2．2 溶液制備

取馬錢苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液，即得對照品溶液；取裝量差異項下的本品內容物，研細，混勻，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，稱定質量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質量，用50%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按照處方比例制備缺山茱萸的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2．2．3 方法學考察

陰性對照試驗：分別取2．2．2項下3種溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果在與對照品溶液色譜峰相應位置上，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰，馬錢苷和相鄰雜質峰分離良好，陰性對照品溶液無干擾，色譜圖見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

線性關系考察：精密稱取馬錢苷對照品適量，加50%甲醇制成每1 mL含33．1 μg的對照品溶液，精密吸取3，5，10，15，20，30，40 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜峰面積，以進樣量（X）為橫坐標、馬錢苷峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 Y＝2 E＋06 X－86 077，r＝0．999 9(n＝6)。結果表明，馬錢苷進樣量在0．099～1．324 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取2．2．2項下方法制備的對照品溶液，連續進樣6次，測定。結果馬錢苷峰面積的 RSD為0．61%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液（批號為100401），分別于0，2，4，6，8，10，12 h時各進樣10 μL。結果馬錢苷峰面積的 RSD為0．56%（n＝7），表明供試品溶液在12 h內基本穩定。

重復性試驗：取同一批樣品（批號為100401）1 g，共6份，精密稱定，按2．2．2項下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定馬錢苷的含量。結果馬錢苷含量平均值為 2．004 7 mg／g，RSD為 1．29%(n＝6)，表明該方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知馬錢苷含量的樣品（批號為100401）約0．5g共6份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入不同量的馬錢苷對照品溶液（0．997 g／L）0．5，1．0，1．5 mL 3個濃度各2份，按擬訂方法制備供試品溶液，測定馬錢苷的含量，計算回收率。結果見表1。

表1 馬錢苷加樣回收試驗結果（n＝6）

2．2．4 樣品含量測定

取不同生產企業的樣品共14批，按2．2．2項下方法制備供試品溶液，進樣測定含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（mg／g）

3 討論

檢測波長選擇：本試驗中采用二極管陣列紫外檢測器，于200～400 nm波長范圍紫外光譜掃描顯示，馬錢苷在236 nm波長處有最大吸收，因此選擇236 nm作為檢測波長。

提取方式和溶劑選擇：分別考察了50%甲醇加熱回流和超聲提取，結果表明，回流提取含量比超聲提取較高，故選擇回流提取。分別考察了甲醇和50%甲醇作為提取溶劑，結果表明，50%甲醇提取含量比甲醇提取較高，故選擇50%甲醇提取。提取溶劑用量分別考察了50 mL和25 mL，50 mL比25 mL提取含量較高，故選擇50%甲醇50 mL回流提取。

耐用性試驗：考察了3根不同商品規格的色譜柱，如Agilent Zorbax SB－C18柱、Phenomenex Luna 5u C18柱和Wondasil C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），測定同一批樣品，結果3種色譜柱測定結果重復性較好。

柱溫試驗：分別考察了柱溫為25℃和40℃時進樣測定馬錢苷的含量，兩者基本無差異。說明不同柱溫測定結果的重復性較好。

本試驗所測定的14批樣品馬錢苷含量存在較大差異，這與原料藥材山茱萸中的馬錢苷含量高低有關。因此，為了更好地控制六味地黃膠囊的質量，有必要加強原料藥材山茱萸和制劑中馬錢苷含量的檢測。

綜上所述，本試驗中建立的方法操作簡便、專屬性強，精密度、重復性、回收率均滿足要求，可作為六味地黃膠囊的質量控制方法。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2010：600－601．

[2]劉軼華，朱紅麗．山茱萸的現代藥理研究及應用[J]．中國醫藥指南，2012，10（31）：601－602．

[3]水彩紅，曹 紅．HPLC法測定山茱萸藥材及六味地黃膠囊中馬錢苷的含量[J]．中國藥品標準，2005，6（4）：17－20．

[4]吳俊賢，陳楷斌，趙琦君，等．高效液相色譜法測定氣陰養骨片中馬錢苷含量[J]．中國藥業，2011，20（9）：24－25．

[5]楊 鋒，李 茜，費 嘉，等．對《中國藥典》2010版一部六味地黃膠囊的商榷[J]．解放軍藥學學報，2012，28（6）：569－570．

[6]張翠英，李忠保，李振國，等．HPLC測定六味地黃顆粒中馬錢苷和丹皮酚含量[J]．中成藥，2008，30（12）：1 791－1 794．

[7]張曉堅，康 建．六味地黃丸（濃縮丸）質量標準研究[J]．中國藥房，2009，20（27）：2 133－2 135．

[8]閻東海．HPLC測定濃縮六味地黃丸中馬錢苷含量[J]．中國現代中藥，2007，9（7）：18－19，23．

[9]林 靜，樂卿清，謝榮偉．高效液相色譜法測定六味地黃丸（濃縮丸）中馬錢苷的含量[J]．海峽藥學，2010，22（6）：91－92．

[10]姜建萍，曹 音，李建芳．六味地黃丸含量測定方法研究進展[J]．中醫藥導報，2010，16（6）：136－138．

[11]王 聰．RP－HPLC測定六味地黃丸中馬錢苷的含量[J]．中國中醫藥現代遠程教育，2015，13（2）：146－147．

Research on Improving the Quality of Liuweidihuang Capsules

Zhang Jing，Wang Yanwei
（Henan Provincial Institute for Food and Drug Control，Zhengzhou，Henan，China 450003）

Objective To establish an HPLC method for the content determination of loganin in Fructus Corni，and to modify and improve the quality standard for Liuweidihuang Capsules，to add the TLC method ofRadix Renntanniae．Methods Agilent Zorbax SB－C18column（250 mm×4．6 mm，5 μm） was used with the mobile phase consisted of acetonitrile－0．05% phosphoric acid（9∶91），at the flow rate of 1．0 mL／min，the detection wavelength was 236 nm．Results The TLC spots were clear and there were no interferences on the negative controls．The liner range of loganin was 0．099－1．324 μg（r＝0．999 9）．The average recovery was 99．13%，RSD was 1．43%（n＝6）．Conclusion This method is simple，specialty and suitable to control the quality of Liuweidihuang Capsules．

Liuweidihuang Capsules；TLC；loganin；HPLC

張競，大學本科，研究方向為藥物分析，（電子信箱）zjing780624＠163．com。

2015－06－17；

2015－08－05)

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)02－0061－03