保存溫度及時間對血清游離脂肪酸檢測的影響

摘要：目的 探討血清標本在不同保存溫度和不同保存時間下，對游離脂肪酸測定結果的影響。提出標本保存的合理方法，為臨床測定結果的準確性提供試驗依據。方法 隨機抽取住院患者血液標本18例，即刻離心測定，吸取血清分別保存在室溫、4℃和-20℃以下，于采血后4h、8h、24h、48h分別測定保存于室溫和4℃下標本游離脂肪酸濃度，于采血后24h、48h測定保存于-20℃以下標本游離脂肪酸濃度，對各組檢測結果進行比較分析。結果 室溫下放置4h、8h、24h、48h血清游離脂肪酸濃度與即刻檢測結果比較有統計學差異；4℃下放置4h血清游離脂肪酸濃度與即刻結果無統計學差異，而放置8h、24h、48h后均明顯升高，-20℃冷凍條件下放置24h后血清游離脂肪酸濃度與即時結果之間無統計學差異，而放置48h后與即時濃度之間有統計學差異。結論 標本放置時間及條件對游離脂肪酸測定有影響，為保證游離脂肪酸結果穩定，必須對血清標本低溫保存并快速檢測。

關鍵詞：血清；保存時間；溫度；游離脂肪酸

游離脂肪酸主要產生于皮下和內臟脂肪脂解，部分由血中脂肪酶水解脂肪產生，是機體的主要能量物質，人體約70%的熱量來源于血液中循環的游離脂肪酸。有大量研究顯示，過高的游離脂肪酸導致的高游離脂肪酸血癥與代謝綜合征、動脈粥樣硬化、急性冠脈綜合征、心力衰竭等疾病的發生發展相關[1]。由于脂肪酶的代謝作用，其濃度隨放置時間的延長而逐漸升高，因此保證結果的準確性除了加強檢驗過程的質量控制外，檢驗前過程也是影響檢測結果的重要因素，現就檢驗前過程的一些影響因素進行分析以期規范工作流程。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機抽取住院患者新鮮血清標本18例，其中男性13例，女性5例，平均年齡51.9歲。

1.2儀器與試劑 奧林巴斯AU2700全自動生化分析儀，一次性真空采血管（含促凝劑），游離脂肪酸檢測試劑盒由北京九強生物科技有限公司提供（批號：14-0312P），校準品為朗道CAL2350（批號：828UN）。

1.3方法 標本抽取完畢后立即以4000r/min在4℃低溫下離心5min，并即時測量其游離脂肪酸濃度；每一份患者標本均分別吸取100ul樣品共10份，分別置于0.5mL規格的冷凍管中，其中兩份樣品即時保存于-20℃冷凍冰箱內分別放置24h、48h；其余8份分別在4℃、20℃狀態下放置4h、8h、24h、48h，待達到放置時間后即時測量。其中4℃環境：標本存放于冰箱冷藏柜，溫度設置為4℃；20℃環境：標本存放于生化實驗室，空調溫度設置為20℃，實驗期間空調處于不間斷運行狀態。

1.4統計學處理 各組所測得的游離脂肪酸結果以（x±s）表示，用t檢驗方式分析標本放置時間和處理方式對游離脂肪酸濃度的影響，所有統計分析采用軟件SPSS19.0進行。

2 結果

由表1可見，4℃下放置4h后血清游離脂肪酸濃度與即時游離脂肪酸濃度結果之間的差異無統計學意義（t=-1.683，P>0.05），而放置8h、24h、48h后與即時游離脂肪酸濃度結果之間差異有統計學意義（P<0.05）；20℃室溫下放置4h、8h、24h、48h血清游離脂肪酸濃度與即刻檢測結果比較差異均有統計學意義（P<0.05），血清濃度隨時間的延長有明顯升高。-20℃冷凍條件下放置24h后血清游離脂肪酸濃度與即時結果之間差異無統計學差異（P>0.05），而放置48h后與即時濃度之間有統計學差異（P<0.05）。

3 結論

游離脂肪酸（FFA）是指血清中未與甘油、膽固醇等酯化的脂肪酸，又稱非酯化脂肪酸（NEFA）或未酯化脂肪酸，正常情況下，血漿中含量極少，僅占總脂肪酸含量的5%～10%，在血漿中半衰期2～3min，主要與血清蛋白結合轉運到全身組織利用。

血中游離脂肪酸可反映人體脂肪代謝情況及血脂水平，胰島素、促酰化蛋白、過氧化物酶增殖因子激活受體γ、脂聯素和泛酸等因素會導致NEFA水平降低；腫瘤壞死因子α、兒茶酚胺類激素、白細胞介素-6和瘦素會導致NEFA水平升高[2]。研究表明，FFA病理性升高會造成細胞和組織毒性[3]，并且血清中FFA的含量與胰島素抵抗呈正相關性，可直接導致胰島β細胞凋亡[4]。由于FFA與各種代謝性疾病的密切聯系，其在相關研究中的地位也日益重要。

本研究結果顯示，室溫下放置4h、8h、24h、48h血清游離脂肪酸濃度與即刻檢測結果比較有統計學差異；4℃下放置4h血清游離脂肪酸濃度與即刻結果無統計學差異，而放置8h、24h、48h后均明顯升高，-20℃冷凍條件下放置24h后血清游離脂肪酸濃度與即時結果之間無統計學差異，而放置48h后與即時濃度之間有統計學差異。同時，血清標本于-20℃下可保存24h，與廠家提供的試劑說明書描述一致。

由此，對于游離脂肪酸標本應在抽取后及時離心，并即時檢測；若不能即時檢測，則需保存在4℃下于4h內檢測完畢，或在-20℃下保存24h，以減少脂肪酶代謝的影響，確保檢測結果的準確性。

參考文獻：

[1]于佳雪，徐亞偉，等.游離脂肪酸與心血管疾病[J].現代生物醫學進展，2013，13（10）：1979-1982.

[2]常燕琴，李偉.影響血漿游離脂肪酸水平的因素[J].蘭州大學學報：醫學版，2007，33（2）：81-84.

[3]陳杰，楊昱，吳陽，等.血清游離脂肪酸與2型糖尿病患者糖脂代謝相關性的研究[J].中國實用醫藥，2011，6（32）：134-135.

[4]李靜，邵亮.2型糖尿病與血清游離脂肪酸水平的關系[J].實用臨床醫學，2011，12（2）：31-33.

編輯/周蕓霏