pH和生長因子對茯苓1號、茯苓5.78號菌絲生長的影響

摘要：為了研究茯苓1號、茯苓5.78號菌絲的最適pH和生長因子，采用在不同pH和生長因子條件下，對茯苓1號、茯苓5.78號菌株進行斜面試管培養(yǎng)試驗。結(jié)果表明，茯苓1號菌絲的最適生長因子為維生素C，最適pH為5；茯苓5.78號菌絲的最適生長因子為維生素C，最適pH為4。可見茯苓1號、茯苓5.78號都是偏酸性的，最適生長因子都是維生素C。

關(guān)鍵詞：茯苓；pH；生長因子

中圖分類號：S601；S646 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）19-5117-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.19.058

Abstract： To study the most suitable pH and growth factor of poria cocos strain 1 and 5.78， the bevel media culture experiment of poria cocos strain 1 and 5.78 were performed under different pH and growth factor conditions. The results showed that， the optimum growth factor was VC，the most suitable pH was 5 for the mycelia growth of poria cocos strain 1. The optimum growth factor was VC and the optimum pH was 4 for the mycelia growth of poria cocos strain 5.78. All related data showed that poria cocos strain 1 and 5.78 were faintly acid and the optimum growth factor of each was VC.

Key words： poria cocos； pH； growth factor

茯苓（poria cocos）是一種高等擔(dān)子菌，隸屬于非褶菌（ApHyllopHorales），多孔菌科（Polyporaceae），茯苓屬[1]，為腐生在松樹根上的菌類植物，形狀像甘薯，外皮為黑褐色，里面為白色或粉紅色。野生茯苓在中國分布較廣，但零星分散，難以采挖，所以茯苓藥材多由人工栽培提供[2]。茯苓功效十分廣泛，而且應(yīng)用范圍廣、用量大，被譽為大宗常用中藥中的“八珍”之一[3]。茯苓性平，味甘、淡，歸心、肺、脾、腎經(jīng)，主治水腫尿少[4]，且具益脾健胃[5]，抗腫瘤[6]，其多糖具有增強機體免疫力[7]等功能。經(jīng)檢驗得出，茯苓的主要成分有茯苓多糖以及茯苓素等，其有免疫調(diào)節(jié)、利尿、保肝、抗病毒等作用[8]。在現(xiàn)代醫(yī)藥研究的推動下，茯苓的藥理性研究也越來越深入，對于茯苓的多糖提取和生物學(xué)特性研究也越來越多。

本試驗研究pH和生長因子對茯苓1號、茯苓5.78號菌絲生長的影響，采用斜面試管培養(yǎng)法來探究出最適的pH和生長因子，從而為培養(yǎng)出更好的茯苓母種提供更適合的生長環(huán)境。

1 材料與方法

1.1 供試菌種

茯苓1號、茯苓5.78號均引自安徽省岳西多生食用菌專業(yè)合作社。

1.2 培養(yǎng)基

1.2.1 母種培養(yǎng)基（PDA培養(yǎng)基） 去皮馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂15～20 g、水1 000 mL、pH自然[9]。

1.2.2 完全培養(yǎng)基（CYM培養(yǎng)基） 蔗糖200 g、蛋白胨4 g、KH2PO4 3 g、MgSO4 1.5 g、瓊脂20 g、水1 000 mL、pH自然[9]。

1.3 試驗試劑

1 mol/L NaOH、1 mol/L HCl、5 mg/L的維生素B1、5 mg/L的維生素B12、5 mg/L的維生素C、5 mg/L的葉酸。

1.4 試驗儀器

立式自控電熱壓力蒸汽滅菌器LDZX-40I型（上海申安醫(yī)療器械廠）；37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱（廣州醫(yī)療設(shè)備廠）；超凈工作臺SW-CJ-2FD（蘇州凈化設(shè)備有限公司）；電子天平JT1002（上海精天電子儀器有限公司）。

1.5 準(zhǔn)備試驗菌種

常規(guī)制作PDA培養(yǎng)基。超凈工作臺上分別接種茯苓1號、茯苓5.78號后，置于電熱恒溫培養(yǎng)箱（25±1） ℃培養(yǎng)來完成擴接。在7～8 d之后，將擴接好的茯苓1號、茯苓5.78號菌株分類包好，放入冰箱冷藏，準(zhǔn)備pH試驗及生長因子試驗。

1.6 pH試驗[10]

1.6.1 調(diào)試培養(yǎng)基初始pH 用1 mol/L NaOH和1 mol/L HCl將CYM培養(yǎng)基的初始pH分別調(diào)為4.0、5.0、6.0、7.0及對照等5個處理。

1.6.2 接種與培養(yǎng) 按正確規(guī)范的接種方法分別接種茯苓1號、茯苓5.78號后，置于電熱恒溫培養(yǎng)箱（25±1） ℃培養(yǎng)。

1.7 生長因子試驗[11]

1.7.1 培養(yǎng)基中加入不同生長因子 常規(guī)制作CYM培養(yǎng)基，趁熱倒入5個燒杯中。將5 mg/L的維生素B1、5 mg/L的維生素B12、5 mg/L的維生素C、5 mg/L的葉酸分別加入其中4個燒杯中，另一個不加生長因子的燒杯為對照，配制成5份不同的培養(yǎng)基，并做好標(biāo)記。

1.7.2 接種與培養(yǎng) 按正確規(guī)范接種方法接種茯苓1號、茯苓5.78號后，置于電熱恒溫培養(yǎng)箱（25±1） ℃培養(yǎng)。

1.8 菌絲生長速度測定方法[10]

待培養(yǎng)基培養(yǎng)2 d之后，在試管上的菌絲前沿用細標(biāo)記筆劃線，用游標(biāo)卡尺測量其長度。每支試管每次在測量時，連續(xù)測3次取其平均值，之后算出菌絲的日平均生長速率。每隔2 d測量1次，8 d為一個觀測周期，共測量4次，然后再取其平均值。記錄并繪制表格直觀表現(xiàn)出不同pH以及不同生長因子對茯苓1號菌絲體、茯苓5.78號菌絲體的生長影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 pH試驗分析

2.1.1 pH對茯苓1號菌絲體生長的影響 pH對茯苓1號菌絲體生長的影響結(jié)果見表1。由表1可知，茯苓1號菌絲的5支試管的生長速度不盡相同，但都在一定范圍內(nèi)，對照組屬于自然pH。由平均值可見，此時pH大致為5.0～6.0之間；茯苓1號菌絲的最適pH為5.0，最不適pH為7.0，若用曲線圖表示則為一條有峰點的曲線。由此可見，茯苓1號菌絲的生長速度在pH為5.0之前隨著pH的升高而升高，菌絲長勢變密，在pH為5.0之后隨著pH的升高而降低，菌絲長勢變疏。

2.1.2 pH對茯苓5.78號菌絲體生長的影響 pH對茯苓5.78號菌絲體生長的影響結(jié)果見表2。由表2可知，茯苓5.78號菌絲的對照組pH大致在6.0～7.0之間；茯苓5.78號菌絲的最適pH為4.0，最不適pH為7.0，用曲線圖表示為一條平緩下降的曲線。由此可見，茯苓5.78號菌絲的生長速度隨著pH的升高而降低，菌絲長勢也變疏。

2.2 生長因子試驗分析

2.2.1 生長因子對茯苓1號菌絲體生長的影響 生長因子對茯苓1號菌絲體生長的影響結(jié)果見表3。由表3可知，生長因子對于茯苓1號菌絲不僅有促進作用也有抑制作用，當(dāng)然也有可能由于一些接種不規(guī)范等外界因素導(dǎo)致維生素B12的試驗出現(xiàn)誤差，需進行多次試驗來驗證。表3結(jié)果顯示，最適合茯苓1號菌絲的生長因子為維生素C，效果最差的生長因子為維生素B12，且維生素B12使茯苓1號菌絲生長受到抑制，而其他的生長因子對其效果不明顯。

2.2.2 生長因子對茯苓5.78號菌絲體生長的影響 生長因子對茯苓5.78號菌絲體生長的影響結(jié)果見表4。由表4可知，生長因子對于茯苓5.78號菌絲的作用并不明顯，促進作用也不大；由對照組可見，茯苓5.78號菌絲生長速度偏慢，可能由于此株菌株生長力不強；最適合茯苓5.78號菌絲的生長因子為維生素C，效果最差的是對照組，說明在此項試驗中生長因子對茯苓5.78號菌絲的促進作用并不大，其他生長因子對其效果也不明顯。

3 小結(jié)與討論

pH試驗結(jié)果表明，在菌絲長勢方面，茯苓5.78號與茯苓1號并無明顯區(qū)別；在菌絲生長速率方面，茯苓5.78號菌絲適宜的pH要略偏低，但茯苓1號菌絲生長速率要略快于5.78號，5.78號在pH為7.0時，幾乎不會生長。由表1、表2可見，茯苓1號與苓5.78號的菌絲適宜pH范圍均在4.0～5.0，在偏酸性的條件下生長較好。生長因子的試驗結(jié)果表明，生長因子對茯苓1號和茯苓5.78號菌絲在生長過程中有促進作用，也可能由于量的不同而引起抑制作用。但由表3、表4可知，在幾種生長因子中，維生素C是最促進菌絲生長的生長因子，其次是維生素B1和葉酸，其效果基本一樣，效果最差的是維生素B12。

由幾組試驗的結(jié)果可以看出，在菌種的生長和商業(yè)價值方面，茯苓1號的品種可能要略微優(yōu)于茯苓5.78號。在同等的條件下，茯苓1號菌絲生長的速度與長勢均比茯苓5.78號要好，因此茯苓1號可以帶來更高的商業(yè)價值。在pH試驗中，同樣的pH條件下，茯苓1號的菌絲生長速度與菌絲長勢都明顯比茯苓5.78號更好；在生長因子的試驗中，茯苓1號菌絲也顯現(xiàn)出了比茯苓5.78號更好地生長態(tài)勢。因此，可以進一步做更細致的試驗，找到最適合茯苓1號菌絲生長的pH以及生長因子，以獲得最大的商業(yè)價值。

本試驗只研究了pH和生長因子對茯苓菌絲生長的影響，要想對茯苓的生物學(xué)特性研究有更深的了解，還要探討不同的碳源、氮源以及碳氮比來研究出最適合茯苓菌絲生長的培養(yǎng)基環(huán)境，再通過栽培試驗培養(yǎng)出最佳的茯苓母種。

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