地膚子自由基清除活性和總酚含量測定研究

摘要：用冷浸法得到了3種不同溶劑（乙醇、丙酮和乙酸乙酯）的地膚子提取物，并采用ABTS體系評估其自由基清除能力，進一步研究其總酚含量與自由基清除能力之間的關系。結果表明，地膚子不同溶劑提取物均表現出一定的自由基清除能力，其中乙酸乙酯提取物的清除效果最優。地膚子不同溶劑提取物均可作為天然抗氧化劑應用。

關鍵詞：地膚子；自由基；抗氧化

中圖分類號：TS202.3 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）11-2899-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.11.048

抗氧化劑具有清除自由基的能力，通過補充抗氧化劑可以平衡體內自由基，從而達到抗衰老和預防治療疾病的功效[1-3]。近年來，從植物中尋找天然抗氧化劑已經成為研究的熱點[2]。地膚（Kochia scoparia）是藜科地膚植物，一年生草本，高50～100 cm。根略呈紡錘形。莖直立，圓柱狀，淡綠色或帶紫紅色，有多數條棱，稍有短柔毛或下部幾無毛；分枝稀疏，斜上。花期6～9月，果期7～10月[4]。地膚子為地膚的果實，呈扁球狀五角星形，直徑1～3 mm。外被宿存花被，表面灰綠色或淺棕色，周圍具膜質小翅5枚，北面中心有微突起的點狀果梗痕及放射狀脈紋5～10條；剝離花被，可見膜質果皮，半透明。種子扁卵形，長約1 mm，黑色。氣微，味微苦。利小便，清濕熱。治小便不利、淋病、帶下、疝氣、風疹、瘡毒、疥癬、陰部濕癢。《本經》：“主膀胱熱，利小便。補中，益精氣。”《別錄》：“去皮膚中熱氣，散惡瘡，疝瘕，強陰，使人潤澤。”《藥性論》：“與陽起石同服，主丈夫陰痿不起，補氣益力；治陰卵癀疾，去熱風，可作湯沐浴。”地膚子具有眾多藥用功效，但其抗氧化方面的研究未見報道。本研究用冷浸法得到3種不同溶劑（乙醇、丙酮和乙酸乙酯）的地膚子提取物，并采用ABTS體系評估其自由基清除能力，進一步研究其總酚含量與自由基清除能力之間的關系。

1 材料與方法

1.1 試驗材料、主要試劑與儀器

UV1901型紫外可見分光光度計（北京普析電子科技有限公司）；地膚子購于廣西玉林藥材市場。沒食子酸標準品購于百靈威試劑公司（北京）。所有試劑均為分析純。

1.2 試驗方法

1.2.1 地膚子不同溶劑提取物制備 稱取20 g地膚子粉末，加入200 mL 95%乙醇，冷浸72 h。重復上述操作3次，合并提取液。旋轉蒸發回收溶劑，得到地膚子乙醇提取物（EE）0.8 g，得率為4.0%。同法，用丙酮及乙酸乙酯提取，得到丙酮提取物（AE）0.6 g和乙酸乙酯提取物（EAE）0.8 g，得率分別為3.0%和4.0%。

1.2.2 ABTS·+自由基清除能力測定[4] 將2，2′-聯氨-雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二胺鹽（ABTS）用去離子水配制成2 mmol/L溶液，取50 mL上述溶液與200 mL K2S2O8水溶液（70 mmol/L）混合均勻，避光放置12～16 h，得到ABTS·+溶液。用磷酸鹽緩沖液將ABTS·+溶液稀釋至吸光度為（0.70±0.02）（Abs=734 nm處）。將地膚子提取物用95%乙醇稀釋為

7個不同濃度藥液，取一定量提取物藥液，加入1.9 mL ABTS·+溶液，混勻，在1、3、5、10 min時測其吸光度。ABTS·+自由基清除率（S%）計算公式如下：S%=（A0-A）/A0，其中A0為ABTS·+溶液的吸光度，A為加藥液后的吸光度。

1.2.3 總酚含量測定

1）Folin-Ciocalteu試劑的配制。稱取80 g鎢酸鈉和20 g鉬酸鈉于圓底燒瓶中，用560 mL去離子水溶解，加入40 mL磷酸溶液（85%）和80 mL濃鹽酸，文火回流10 h，然后加入12 g硫酸鋰及60 mL雙氧水，加熱沸騰15 min至溶液呈亮黃色。冷卻，移入 1 000 mL容量瓶中，用去離子水定容，貯于棕色瓶中。

2）總酚標準曲線繪制。精確稱取沒食子酸標準品25 mg，用去離子水溶解并定容到250 mL，得到0.1 mg/mL的對照品標準溶液。精密吸取對照樣品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于10 mL容量瓶中，加入1 mL Folin-Ciocalteau試劑，搖勻后加入3 mL 2% Na2CO3溶液，去離子水定容至10 mL，室溫下反應2h后在760 nm處測定吸光度，繪制標準曲線，推出回歸方程。

3）提取液中總酚含量的測定。將各提取物溶液按“1.2.3”中“2）”的方法測定吸光度，3次測量求平均值。根據回歸方程計算總酚的沒食子酸當量，總酚含量以每克干物質的沒食子酸當量（mg）表示。

2 結果與分析

2.1 不同濃度提取物對ABTS·+自由基清除能力

由圖1可知，隨著濃度的增加，EAE對ABTS·+自由基的清除能力迅速增加。在1 min時，濃度為0.5 mg/mL和0.8 mg/mL的EAE對ABTS·+自由基的清除率為23.3%和29.9%，濃度為1.0 mg/mL和1.2 mg/mL的EAE清除率為34.3%和38.5%。當濃度增加為1.5 mg/mL和1.8 mg/mL時，EAE對ABTS·+自由基的清除率上升為45.9%和50.0%，在2.0 mg/mL時清除率達到60%。同時，隨著作用時間的增長，藥液對ABTS·+自由基的清除能力明顯加強。對于濃度為1.5 mg/mL的EAE藥液，作用時間為1 min時對ABTS·+自由基的清除率為45.9%，作用時間增長為3 min和5 min時對ABTS·+自由基的清除率為51.0%和53.6%，作用時間為10 min時清除率達到57.6%。對于濃度為2.0 mg/mL的EAE藥液，其對ABTS·+自由基的清除率由1 min時的60.0%迅速增加到10 min時的71.0%。

由圖2可知，AE對ABTS·+自由基的清除規律與EAE類似，其清除能力隨作用時間和藥液濃度增加而增大。如作用時間為5 min時，濃度為0.5 mg/mL的AE對ABTS·+自由基的清除率為22.3%，1.0 mg/mL時清除率升高為34.0%，而2.0 mg/mL時清除率達到66.5%。而對于濃度為1.8 mg/mL的AE藥液，1 min時清除率為40.5%， 3 min時清除率為45.3%，10 min時清除率達到52.7%。

2.2 不同溶劑提取物對ABTS·+自由基清除率的比較

由圖3可知，EAE表現出最強的ABTS·+自由基清除能力，在最低濃度0.5 mg/mL時清除率為28.8%，1.0 mg/mL和1.5 mg/mL清除率為41.8%和57.6%，在2.0 mg/mL清除率達到71.0%。其次為AE，其在0.5 mg/mL時對ABTS·+自由基清除能力比EAE略低，清除率為25.2%，在2.0 mg/mL清除率為71.6%，略高于EAE。EE對ABTS·+自由基清除能力在2.0 mg/mL濃度達到了66.0%。結果表明，地膚子3種溶劑提取物都具有很強的自由基清除能力。

2.3 不同溶劑提取物的EC50

地膚子提取物在10 min對ABTS·+自由基的EC50如表1所示。EC50表示抗氧化劑對ABTS·+自由基清除率達到50%時的質量濃度。因此，EC50越低，則表示抗氧化劑清除自由基的能力越強。EAE、AE和EE的EC50順序為：EAEEE>AE。

2.4 不同溶劑提取物總酚含量測定結果

地膚子提取物中，EAE的總酚含量最高，為29.3 mg/g。AE和EE的總酚含量分別為18.5 mg/g和25.9 mg/g。因此，3種提取物的總酚含量順序為EAE>EE>AE，該順序與它們對ABTS·+自由基清除能力的順序一致，表明3種提取物優良的自由基清除效果與其含有的酚類成分有關。

3 小結與討論

在本研究中，采用冷浸法得到地膚子3種不同溶劑（乙醇、丙酮和乙酸乙酯）提取物，并采用ABTS體系評估其自由基清除能力，進一步研究其總酚含量與自由基清除能力之間的關系。結果表明，地膚子3種溶劑提取物都表現出良好的自由基清除能力，其清除效果的順序為EAE>EE>AE。此外，地膚子3種溶劑提取物的自由基清除率與作用時間和藥液濃度有關，隨著作用時間增長和藥液濃度增加，其自由基清除效果增強。而通過對其總酚含量的測定發現，3種提取物的總酚含量順序為EAE>EE>AE，該順序與它們對自由基清除能力的順序一致，3種提取物優良的自由基清除效果與其含有的酚類成分有關。

參考文獻：

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[2] TABART J，KEVERS C，PINCEMAIL J，et al. Antioxidant capacity of black currant varies with organ，season，and cultivar[J]. Journal Agricultural Food Chemistry，2006，54（17）：6271-6276.

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[4] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志[M].北京：科學出版社，1979.