FOXP1與Livin基因表達對淋巴瘤病理特征及臨床預后評價價值

夏靖媛，徐 薪

FOXP1與Livin基因表達對淋巴瘤病理特征及臨床預后評價價值

夏靖媛，徐 薪

目的 探討叉頭框蛋白P1(FOXP1)與Livin基因表達對淋巴瘤臨床病理特征及預后的評價價值。方法 選擇2013-08至2015-08間在我院腫瘤科住院治療的彌漫性大B細胞淋巴瘤患者80例為觀察組，40例反應性淋巴結增生患者為對照組，觀察并分析兩組FOXP1與Livin表達情況。分析淋巴瘤患者FOXP1、Livin表達與臨床病理特征的關系。結果 觀察組FOXP1及Livin高表達的比例分別為77.5%、60.0%，均顯著高于對照組比例20.0%、5.0%，差異具有統計學意義(P<0.05)。淋巴瘤患者中，高中危+高危IPI、原發部位(節內)、Non-GCB者FOXP1高表達比例分別為92.3%、86.2%、86.7%，比例更高，差異具有統計學意義(P<0.05)，存在B癥狀、高中危+高危IPI、Non-GCB者Livin高表達的比例分別為81.2%、80.8%、73.3%，比例更高，差異具有統計學意義(P<0.05)。結論 彌漫性大B細胞淋巴瘤內FOXP1及Livin表達水平與其臨床特征、病理類型存在密切關系。

淋巴瘤；B細胞；預后；腫瘤標記物

彌漫性大B細胞淋巴瘤是最常見的非霍奇金淋巴瘤，約占所有非霍奇金淋巴瘤的30%～40%，它具有明顯的侵襲性，生物學行為活躍，常存在周圍浸潤及遠處播散，預后差[1,2]。由于彌漫性大B細胞淋巴瘤具有特定的臨床特征、組織病理學特征及遺傳免疫特征，對放療及化療敏感，經合理治療后可以提高生活質量，延長生存時間[3]。但由于該腫瘤存在明顯的異質性，對治療反應性不同，目前臨床研究發現一些新的生物學指標可以評判其預后。FOXP1是一種翼型螺旋轉錄因子，屬于FOXP亞家族，它在B細胞發育過程中起關鍵作用，在健康人體細胞中表達，在多種腫瘤組織中也廣泛表達，關于FOXP1在彌漫性大B細胞淋巴瘤表達及與臨床病理的關系已有研究，但存在爭議。Livin表達于人胚胎組織及腫瘤細胞，屬于凋亡蛋白，是目前免疫組化研究的熱點[4]。本研究中，筆者通過對照研究，探討彌漫性大B細胞淋巴瘤中FOXP1及Livin表達情況。

1 對象與方法

1.1 對象 選擇2013-08至2015-08間在我院腫瘤科住院治療的彌漫性大B細胞淋巴瘤患者80例為觀察組，包括男45例，女35例，年齡18～72歲，平均(51.8±3.6)歲。臨床分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期23例，Ⅲ期27例，Ⅳ期15例；國際預后指數評分：0～2分46例，3～4分34例。另選擇40例反應性淋巴結增生患者為對照組，包括男23例，女17例，年齡18～71歲，平均(50.2±3.1)歲。兩組在年齡、性別等方面無統計學差異，具有可比性(P>0.05)。本研究經院倫理委員會批準，向患者介紹研究目的及方法，并均簽署知情同意書。納入標準：(1)根據臨床表現、實驗室檢查、影像學檢查及病理學檢查，符合彌漫性大B細胞淋巴瘤診斷標準[5]；(2)年齡≥18歲，初次確診并于我院住院治療，采用同一化療方案；(3)無其他部位惡性腫瘤，無急性感染性疾病；(4)無嚴重心臟、肝臟或腎臟功能障礙；(5)自愿接受免疫組化檢查；(6)化療方案包括利妥昔單抗、環磷酰胺、阿霉素、長春新堿及強的松；(7)臨床資料完整。

1.2 方法 取得檢測標本后，經中性甲醛溶液(10%)固定，石蠟包埋切片，厚度3～4 μm。于烤片機烘烤2 h后置于60 ℃恒溫箱處理24 h，應用二甲苯脫蠟、梯度乙醇浸泡脫水后應用枸櫞酸修復液高壓修復2 min，將3% H2O2滴于組織上以阻斷內源性過氧化氫酶，磷酸緩沖鹽溶液(PBS)處理后加封閉用羊血清，應用FOXP1單克隆抗體及Livin抗體(兩者均購自北京中杉金橋生物技術有限公司)進行一抗孵育，置于4 ℃冰箱過夜，而后置于37 ℃恒溫箱中復溫，PBS沖洗5 min，共3次。應用50 μl生物素進行二抗孵育處理，置于37 ℃恒溫箱中孵育10 min，PBS沖洗5 min，共3次。再應用50 μl鏈霉素抗生物素-過氧化物酶溶液，置于37 ℃恒溫箱中孵育20 min，PBS沖洗5 min，共3次。在切片中添加2滴DAB溶液，顯微鏡下觀察3～10 min控制顯色時間，其中陽性顯色為棕褐色或棕黃色，以自來水沖洗至終止發色，應用蘇木素襯染，1%鹽酸乙醇液分化，0.5%氫氧化氨液反藍10 min，再次脫水透明，置于恒溫箱上方，干燥后應用中性樹膠封片。FOXP1及Livin均呈棕黃色或棕褐色，前者定位于細胞核中，后者定位于細胞質中，少量混合存在。低倍鏡觀察定位后采用高倍鏡觀察，選擇10個視野，共計數100個腫瘤細胞，對FOXP1及Livin表達進行記錄。染色強度包括0～3分四個等級[6]，其中0分為無染色，1分為淺黃色，2分為黃色，3分為棕黃色、棕褐色。

陽性細胞百分率包括0～3分四個等級[7]：其中0分為陽性細胞≤5%，1分為陽性細胞>5%，≤25%，2分為陽性細胞>25%，≤50%，3分為陽性細胞>50%。表達情況評價采用兩者乘積，其中0分為(-)，1～4分(+)，5～8(++)，9～12(+++)，低表達為0分(-)，1～4分(+)；高表達為5～8(++)，9～12(+++)。

1.3 觀察指標 分析觀察組與對照組FOXP1及Livin表達情況。分析淋巴瘤患者FOXP1、Livin表達與臨床病理特征[年齡、性別、IPI(國際預后指數)分型、原發部位、病理類型]的關系。

2 結 果

2.1 兩組FOXP1及Livin表達情況的比較 觀察組FOXP1及Livin以高表達為主，對照組FOXP1及Livin以低表達為主，觀察組FOXP1及Livin高表達的比例均顯著高于對照組，差異具有統計學意義(P<0.05，表1)。

表1 兩組淋巴瘤患者FOXP1及Livin表達情況的比較 (n;%)

2.2 淋巴瘤患者FOXP1、Livin表達與臨床病理特征的關系 淋巴瘤患者中，高中危+高危IPI、原發部位(節內)、Non-GCB(非生發中心)者FOXP1高表達比例更高，差異具有統計學意義(P<0.05)，存在B癥狀、高中危+高危IPI、Non-GCB者Livin高表達的比例更高，差異具有統計學意義(P<0.05)。FOXP1表達在不同年齡、性別及B癥狀存在與否方面均無統計學差異，Livin表達在不同年齡、性別及原發部位間差異均無統計學意義(表2)。

表2 淋巴瘤患者FOXP1、Livin表達與病理特征的關系 (n;%)

3 討 論

彌漫性大B細胞淋巴瘤好發于老年人，男性多見，其特征性臨床表現為進展迅速的無痛性腫塊，其他常見癥狀包括發熱、體重減輕等，影像學檢查有助于病變的定位和定性診斷[8]。其具體的發病機制尚不明確，可能與分子遺傳學及免疫機制有關。由于彌漫性大B細胞淋巴瘤侵襲性明顯，若得不到及時合理的治療，預后較差，化療及放療是其有效且常用的方法[9]。

彌漫性大B細胞淋巴瘤臨床特征、分子遺傳學特征存在很強的異質性，因此臨床治療及預后的個體化差異很大。雖然IPI評分可以指導臨床治療和評估預后，但存在一定的誤判和差異[10]，因此采用一種易獲得且準確的生物學標記是目前臨床研究的重點和熱點。本研究通過觀察FOXP1及Livin表達與彌漫性大B細胞淋巴瘤臨床病理特征及預后的關系發現，與反應性淋巴結增生患者比較，彌漫性大B細胞淋巴瘤的FOXP1及Livin高表達的比例均顯著增高，差異具有統計學意義，提示淋巴瘤中FOXP1及Livin表達更高，與以往研究結果相似。且淋巴瘤患者中，高中危+高危IPI、原發部位(節內)、Non-GCB者FOXP1高表達比例更高，差異具有統計學意義，存在B癥狀、高中危+高危IPI、Non-GCB者Livin高表達的比例更高，差異具有統計學意義，提示FOXP1及Livin表達與彌漫性大B細胞淋巴瘤的臨床特征及病理特征存在明顯的關系。FOXP1屬于FOX家族，參與人體多個正常的生理過程，其表達異常與惡性腫瘤、代謝異常及畸形病變有關。有研究發現，健康人體中存在FOXP1表達，在惡性腫瘤組織中，FOXP1表達升高，且不同的腫瘤中其表達存在差異[11]。也有學者通過臨床病理分析發現，FOXP1表達與腫瘤患者臨床特征及預后存在密切關系[12]。Livin屬于凋亡抑制蛋白家族，包括兩個亞型，其作用為通過抑制信號轉導、蛋白酶等途徑抗細胞凋亡。Livin可以存在于人體胚胎組織中，但在健康人體不表達或低表達。在多數腫瘤患者中，Livin呈明顯高表達[13]。這與Livin正常凋亡機制受損而導致惡性潛能積累導致腫瘤發生有關。本研究結果說明通過對FOXP1和Livin的檢測可以對彌漫性大B細胞淋巴瘤的臨床特征及病理特征進行推測和評判，但兩者存在一定差異，FOXP1表達在原發部位(節內)間存在差異，而Livin表達在B癥狀存在與否間存在差異。彌漫性大B細胞淋巴瘤內FOXP1高表達說明腫瘤細胞存在免疫逃逸現象，主要FOX家族蛋白表達密切相關。而彌漫性大B細胞淋巴瘤內Livin高表達則提示細胞凋亡機制存在障礙而反應性導致Livin表達升高[14]。腫瘤微環境中的腫瘤細胞、細胞間質及周圍組織間存在復雜而密切的關系，通過檢測FOXP1及Livin的表達，可以對腫瘤預后進行評估[15]。

總之，彌漫性大B細胞淋巴瘤內FOXP1及Livin表達升高，且FOXP1及Livin表達水平與其臨床特征、病理類型存在密切關系。

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(2016-05-23收稿 2016-08-25修回)

(責任編輯 岳建華)

Value of FOXP1 and Livin in evaluation of prognosis of lymphoma

XIA Jingyuan and XU Xin.Department of Pathology, General Hospital of Chinese People’s Armed Police Force, Beijing 100039,China

Objective To explore the significance of FOXP1 and Livin expressions in the evaluation of clinicopathological characteristics and prognosis of lymphoma.Methods Eighty patients with diffuse large B cell lymphoma treated at our hospital between August 2013 and August 2015 were selected as observation group, with 40 cases of reactive lymph node hyperplasia patients as control group. The expressions of FOXP1 and Livin in the two groups were observed and analyzed. The relationships between the expressions of FOXP1 and Livin in patients with lymphoma and the clinicopathological features were analyzed.Results The percentage of high expressions of FOXP1 and Livin in the observation group was 77.5% and 60% respectively, which was significantly higher than that in the control group (20%, 5%), and the difference was statistically significant (P<0.05). Among the high-risk IPI and non-GCB patients of lymphoma or those with primary lymphoma, high expression rates of FOXP1 were 92.3%, 86.2%, 86.7% respectively, the proportion was higher, and the difference was statistically significant (P<0.05). In the presence of B-symptom, the expression rates of Livin were 81.2%, 80.8%, 73.3% respectively, the proportion was higher, and the difference was of statistic significance (P<0.05).Conclusions The expression level of FOXP1 and Livin in patients with diffuse large B cell lymphoma is closely related to its clinical features and pathological types.

lymphoma; B cell; prognosis; tumor marker

夏靖媛，碩士研究生。

100039 北京，武警總醫院病理科

徐 薪，E-mail:xxblueflower@163.com

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