復方鹽酸苯海拉明糖漿質量控制研究

植國繁，巫玲玲，藍 彬，藍獻麗，蔣敏捷，蔣偉哲

（廣西醫科大學藥學院，廣西 南寧 530021）

復方鹽酸苯海拉明糖漿質量控制研究

植國繁，巫玲玲，藍 彬，藍獻麗，蔣敏捷，蔣偉哲

（廣西醫科大學藥學院，廣西 南寧 530021）

目的 建立復方鹽酸苯海拉明糖漿的質量控制方法。方法 采用理化鑒別與薄層色譜（TLC）法對復方鹽酸苯海拉明糖漿進行定性鑒別，用高效液相色譜（HPLC）法對鹽酸苯海拉明進行含量測定。結果 理化鑒別結果現象顯著，薄層色譜斑點清晰、集中。鹽酸苯海拉明進樣量在4．032～14．112 g范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系（r＝0．999 6），平均加樣回收率為98．80%，RSD＝1．18%（n＝9）。結論 TLC法和HPLC法準確、可靠，可用于復方鹽酸苯海拉明糖漿的質量控制。

復方鹽酸苯海拉明糖漿；鹽酸苯海拉明；高效液相色譜法；質量控制

復方鹽酸苯海拉明糖漿是由單糖漿、防腐劑、鹽酸苯海拉明、葡萄糖酸鈣配制而成，為抗組胺藥，適用于治療過敏性疾病。鹽酸苯海拉明可與H1受體結合產生拮抗作用，從而抑制過敏反應，但嗜睡和抗膽堿能作用明顯，故其應用受到一定限制[1]。葡萄糖酸鈣能改善細胞膜的通透性，與促進神經末梢釋放乙酰膽堿產生抗過敏效應，兩者在不加大劑量的情況下聯用具有協同抗過敏作用[2]。該制劑味甜、口感好，小兒用藥依從性高，且效果好，療效確切。為提高復方鹽酸苯海拉明糖漿的質量標準，筆者對其含量測定方法和鑒別方法進行了研究，現報道如下。

1 儀器與試藥

EL204型電子天平（梅特勒－托利多儀器上海有限公司）；KF10002型電子天平（凱豐集團有限公司）；XS205DU型十萬分之一電子天平（梅特勒－托利多儀器上海有限公司）；KQ－500DB型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）；LC－20A型高效液相色譜儀、SIL－20A型自動進樣器、SPD－20A型紫外檢測器、色譜化學工作站（日本島津公司）；Luna 5μm CN 100A色譜柱（250 mm×4．6mm，4μm，廣州菲羅門科學儀器有限公司）。乙腈為色譜純（Fisher Scientific）、超純水（自制）、其他試劑均為分析純；鹽酸苯海拉明對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為100066－200807）；復方鹽酸苯海拉明糖漿（廣西醫科大學第一附屬醫院，批號為20150109，20150127，20150318）。

2 方法與結果

2．1 性狀

本品為淡黃色液體，味甜，微有麻感。

2．2 鑒別

2．2．1 理化鑒別[3]

取本品50 m L，置分液漏斗中，用三氯甲烷萃取3次，合并萃取液，于水浴上加熱蒸干，提取物在80℃干燥后，按下述方法試驗。

1）取上述提取物少量，加硫酸1滴，開始出現黃色，隨即變成橙紅色，滴加蒸餾水，即成白色乳濁液。

2）取上述提取物少量，加蒸餾水溶解后，滴加硝酸銀試液，即成白色凝乳狀濁液。

2．2．2 薄層色譜鑒別

取本品15．0 mL，置60 m L分液漏斗中，用三氯甲烷萃取3次，每次5mL，取有機層，合并萃取液，作為供試品溶液；取鹽酸苯海拉明對照品，加三氯甲烷制成每1m L含1mg的溶液，作為對照品溶液；取空白輔料（缺鹽酸苯海拉明）15．0mL，同法制備陰性對照品溶液。照薄層色譜法[2015年版《中國藥典（四部）》通則0502][4]試驗，吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，展開劑為二氯甲烷－甲醇（9∶1）[5]，展開，取出，晾干，噴稀碘化鉍鉀試液，日光下檢視，結果見圖1。

圖1 鹽酸苯海拉明薄層色譜圖

2．3 有關物質檢查

2．3．1 檢查標準

應符合糖漿劑項下有關規定[2015年版《中國藥典（四部）》通則0116][6]。

2．3．2 有關物質[3]

取本品5.0m L，加流動相溶解并稀釋成每1mL約含0.5mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取1.0m L，置100m L容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。照含量測定項下的色譜條件，精密量取對照溶液與供試品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，單個雜質峰面積不得大于對照溶液主峰面積的0.5倍（0.5%），各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積（1.0%）。色譜圖見圖2。

圖2 鹽酸苯海拉明有關物質檢查高效液相色譜圖

2．4 鹽酸苯海拉明含量測定

2．4．1 溶液制備

稱取鹽酸苯海拉明對照品125 mg，精密稱定，置25mL棕色容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成5 g／L的對照品貯備液，避光，置4℃冰箱貯存備用；精密量取對照品貯備液1mL置10mL容量瓶中，加流動相定容至刻度，搖勻，制成1mL含0.5mg的對照品溶液；精密量取裝量差異項下的本品5.0mL，置10m L容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液；取輔料5.0m L，置10m L容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得陰性對照品溶液。

2．4．2 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Luna 5μm CN 100A柱（250mm×4.6mm，4μm）；流動相：乙腈－水－三乙胺（50∶50∶0.5，冰醋酸調節pH至6.5）[3]；流速：1.0mL／min；柱溫：30℃；檢測波長：258 nm；進樣量：20μL。

取二苯酮5mg，置100mL容量瓶中，加乙腈5mL使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻；另精密量取鹽酸苯海拉明標準品貯備液1mL，置10m L容量瓶中，加入上述二苯酮溶液 1 mL，加流動相稀釋至刻度，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續濾液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。理論板數按苯海拉明峰計算不低于5 000，鹽酸苯海拉明峰與二苯酮色譜峰的分離度應大于2.0。取2.4.1項下方法制備的陰性對照品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定。結果，陰性對照品溶液在鹽酸苯海拉明出峰處無色譜峰出現，表明陰性對照無干擾，見圖3。

2．4．3 方法學考察

線性關系考察：精密吸取對照品貯備液0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4mL，分別置10mL棕色容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成質量濃度分別為0.201 6，0.302 4，0.403 2，0.504 0，0.604 8，0.705 6 g／L的對照品溶液，按2.4.2項下色譜條件分別進樣20μL。以對照品進樣量（X，mg）為橫坐標、峰面積積分值（Y）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y＝0.081 4X+ 0.030 8，r＝0.999 6(n＝6)。結果表明，鹽酸苯海拉明進樣量在4.032～14.112μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取同一對照品溶液，按2.4.2項下色譜條件分別連續進樣測定6次。結果，鹽酸苯海拉明峰面積積分值的 RSD＝0.08%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一批樣品（批號為20150318）制備的供試品溶液，在室溫下避光放置，分別于0，2，4，8，16，24 h時各進樣 20μL測定。結果的 RSD＝0.26%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內穩定。

圖3 鹽酸苯海拉明含量測定高效液相色譜圖

重復性試驗：取同一批樣品（批號為20150318），按2．4．2項下方法制備供試品溶液，按擬訂方法平行測定6次。結果的 RSD＝0．49%（n＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：按處方比例稱取除鹽酸苯海拉明外的其他輔料，配成100m L空白糖漿液，另精密量取鹽酸苯海拉明對照品貯備液0．8，1．0，1．2m L各3份，用空白糖漿液溶解并定容至刻度，搖勻，按擬訂色譜條件各進樣20μL測定，計算回收率，結果見表1。

表1 鹽酸苯海拉明加樣回收試驗結果（n＝9）

2．4．4 樣品含量測定

分別取3批供試品各2份，按2．4．1項下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件各進樣20μL測定，計算鹽酸苯海拉明的含量。結果見表2。

表2 3批樣品中鹽酸苯海拉明含量測定結果

3 討論

復方苯海拉明糖漿含有鹽酸苯海拉明和葡萄糖酸鈣2種抗過敏藥物，前者含量雖少，但其含量是否達標影響臨床療效。現行質量標準采用硝酸銀滴定法測定其含量，此方法雖不需要特殊儀器，但由于終點判斷要通過肉眼來完成等因素，會影響含量測定的準確性，含量低的成分影響更大。本研究中用高效液相色譜法測定其含量，樣品無需復雜的預處理，其他成分不干擾測定，操作簡便快速，而且穩定性、精密度均良好，結果準確可靠，可用于控制其質量。

相關研究指出，鹽酸苯海拉明的主要降解產物之一是二苯酮[7]，本研究中同時建立了有關物質的檢查方法，確定了有關物質限量，有利于本品質量控制。

本制劑處方中防腐劑羥苯乙酯也有紫外吸收，故測定鹽酸苯海拉明含量時須設法排除其干擾。本研究中用高效液相色譜法成功地將兩者分離，提高了方法的專屬性和準確度。

[1]張 羅，韓德民．H1抗組胺藥[J]．臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2013，27（2）：104－109．

[2]廖蕓蕓，楊 斌，王柳萍，等．鹽酸苯海拉明與葡萄糖酸鈣聯用抗過敏的實驗研究[J]．廣西醫科大學學報，2005，22（1）：41－43．

[3]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（二部）[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2015：1 001．

[4]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（四部）[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2015：57－59．

[5]馮婉姍，羅雙輝．麝香拔濕膏定性定量方法研究[J]．藥物分析雜志，2010，30（1）：120－122．

[6]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（四部）[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2015：20．

[7]吳愛琴，鄧 紅，葉俊鵬．HPLC法測定鹽酸苯海拉明軟膠囊中的二苯酮[J]．廣東藥學院學報，2003，19（4）：314－315．

Quality Control of Com pound Diphenhyd ram ine Hyd roch loride Syrups

Zhi Guofan，Wu Lingling，Lan Bin，Lan Xianli，Jiang M injie，Jiang Weizhe（Pharmaceutical College，Guangxi Medical University，Nanning，Guangxi，China 530021）

Objective To establish a quality control method for Compound Diphenhydramine Hydrochloride Syrups．M ethods Physical Chemical Identity and TLC were adopted for conducting the qualitative identification of Compound Diphenhydramine Hydrochloride Syrups，HPLC was used to determine the content of Diphenhydramine Hydrochloride in this preparation．Results The results of Physical and Chemical Identification was significant．TLC spots were clear．A good linearity relationship with the peak areas was exhibited（r＝0．999 6）when the sample size of Diphenhydramine Hydrochloride was in the range of 4．032－14．112μg．The average recovery rate of diphenhydramine hydrochloride was 98．80%，RSD＝1．18%（n＝9）．Conclusion The method of TLC and HPLC is accurate and specific with good reproducibility．It can be used for the quality control of Compound Diphenhydramine Hydrochloride Syrups．

Compound Diphenhydramine Hydrochloride Syrups；diphenhydramine hydrochloride；HPLC；quality control

R927．2；R976

A

1006－4931(2016)06－0059－03

植國繁，男，碩士研究生，研究方向為新藥研究與開發，（電子信箱）726750095＠qq．com；蔣偉哲，男，教授，博士研究生導師，研究方向為新藥研究與開發，本文通訊作者，（電話）0771－5358272（電子信箱）jiangweizhe6812＠163．com。

2015－09－16)

廣西高校重點學科和重點實驗室建設項目，項目編號：桂教科研[2013]8號－3。