硝苯地平緩釋片含量測定及體外釋藥機理研究

劉壬通，陳惠文，潘雪刁，楊智承

（1．廣東省惠東縣婦幼保健院，廣東 惠州 516300； 2．廣東藥學院，廣東 廣州 510006）

硝苯地平緩釋片含量測定及體外釋藥機理研究

劉壬通1，陳惠文1，潘雪刁2，楊智承2

（1．廣東省惠東縣婦幼保健院，廣東 惠州 516300； 2．廣東藥學院，廣東 廣州 510006）

目的 建立測定硝苯地平緩釋片中硝苯地平含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱為Diamonsil C18柱（250 mm×4．6mm，5 m），流動相為甲醇－水（60∶40），檢測波長為237 nm，流速為 1 m L／min，柱溫為 30℃。結果 硝苯地平對照品溶液質量濃度在4．83～43．55 g／m L（r＝0．999 9）范圍內與峰面積呈良好線性關系，精密度、重復性試驗結果的 RSD分別為0．91%和1．46%(n＝6)，平均回收率為99．94%，RSD為0．74%(n＝9)。結論 該方法簡便、快速、靈敏、重復性好，可用于硝苯地平緩釋片的質量控制。

硝苯地平；緩釋片；高效液相色譜法；含量測定；釋放度

硝苯地平是第1代鈣拮抗劑，是目前公認的安全有效的一線降壓藥物[1]。但治療高血壓的藥物必須作用持久、效果穩定，而硝苯地平的持續作用時間較短，半衰期為4～5 h，一般常用量為每日2～3次[2－3]，且血藥濃度波動大，會產生峰谷現象，引起較多不良反應。為減少用藥次數，使用藥更安全，可通過改變工藝，采用親水凝膠骨架材料，根據水分透過骨架微孔進而緩慢釋放藥物的原理[4]，研制出硝苯地平緩釋劑型，使藥物平緩釋放，達到理想效果。但2010年版《中國藥典（二部）》并未對該緩釋劑型含量的檢測進行規定。為更好地控制和評價該劑型的質量，本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法測定硝苯地平緩釋片中硝苯地平的含量，并考察其體外釋放行為，方法準確、靈敏度高、快速簡便，現報道如下。

1 儀器與試藥

儀器：Agilent1100 Series型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；UV－2450型紫外可見分光光度計（日本島津公司）；80－2型離心沉淀機（上海手術器械廠）；AB265－S型分析天平（梅特勒托利多公司）。

試藥：硝苯地平對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為100338－200502）；硝苯地平緩釋片（廣東環球制藥有限公司，批號為 111003－2，120815－2，121010－1，規格為每片5mg）；甲醇（廣州化學試劑廠，色譜純），水為超純水（美國Milipore公司），其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 含量測定

2．1．1 色譜條件[5]

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇－水（60∶40）；檢測波長：237 nm；流速：1m L／min；柱溫：30℃；進樣量：20μL。

2．1．2 溶液制備

對照品溶液：避光操作。精密稱取硝苯地平對照品適量，置50m L棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度制成每1mL含20μg的溶液，搖勻，即得。

供試品溶液：避光操作，取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于硝苯地平10mg），置50mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使硝苯地平溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液5m L，置50m L容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

陰性對照品溶液：按硝苯地平緩釋片處方取處方中除硝苯地平外的其他輔料，按制備工藝制成陰性供試品，并依法制得。

2．1．3 方法學考察

檢測波長選擇：精密稱取硝苯地平對照品適量，加適量甲醇溶解配制成20μg／mL的溶液，在210～400 nm波長范圍內掃描，紫外掃描圖譜見圖1。結果在237 nm和233 nm波長處均有吸收峰，為提高檢測靈敏度，最終選擇 237 nm為檢測波長。

圖1 硝苯地平紫外吸收光譜圖

專屬性試驗：分別取2.1.2項下硝苯地平對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液適量，按擬訂色譜條件進樣20μL，記錄色譜圖，見圖2。結果，在供試品溶液相同色譜峰處，陰性對照品溶液無吸收峰，表明硝苯地平對測定結果無干擾，方法專屬性強。

圖2 高效液相色譜圖

標準曲線制備：避光操作。精密稱取硝苯地平對照品7mg，置25mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取0.4，0.9，1.8，2.7，3.6mL置25m L棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配制成每1mL含硝苯地平4.83，10.89，21.77，32.66，43.55μg的系列溶液。精密量取上述系列溶液各20μL注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件分別進樣測定，記錄色譜圖。以硝苯地平質量濃度（C，μg／mL）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 A＝57.522C+22.987，r＝0.999 9(n＝5）。結果表明，硝苯地平對照品溶液質量濃度在4．83～43．55μg／m L范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液20μL，重復進樣6次，測定峰面積。結果的 RSD為0．91%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，1，2，6，12，24 h時進樣 20μL，測定峰面積。結果的 RSD為1．02%(n＝6)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

重復性試驗：取同一批樣品，按2．1．2項下方法平行制備供試品溶液6份，分別進樣20μL。結果的 RSD為1．46%（n＝6），表明方法重復性良好。

回收率試驗：稱取已知硝苯地平含量的供試品適量（約相當于硝苯地平7mg）9份，精密稱定，置25m L棕色容量瓶中，分別加入硝苯地平對照品的量為80%，100%，120%各3份，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，精密吸取2mL置25mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過。按擬訂色譜條件，進樣20μL測定，計算回收率。結果見表1。

表1 硝苯地平回收率試驗結果（n＝9）

2．1．4 樣品含量測定

分別取3批硝苯地平緩釋片，按2．1．2項下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，計算樣品含量。結果批號為111003－2，120815－2，121010－1的樣品中硝苯地平平均含量分別為101．91%，100．26%，100．06%（n＝3）。

2．2 體外釋藥機理研究

取本品，照2010年版《中國藥典（二部）》附錄ⅩD第二法的釋放度測定法，采用第二法裝置，以水（含1%的十二烷基硫酸鈉）為釋放介質，體積為900mL，轉速為100 r／min，依法操作，分別于4，8，12，16，24 h時各取溶液5mL，并及時補充相同溫度、相同體積的水，用0．45μm的濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣檢測，計算不同時間的累積釋放率。結果見圖3。

圖3 硝苯地平緩釋片釋放曲線（n＝6）

為更直觀地描述硝苯地平緩釋片的體外釋藥機理，根據上述釋放度測定結果，分別用不同釋放模型（零級方程、一級方程、Higuchi方程、Ritger－Peppas方程、Weibull方程）進行線性擬合。結果見表2。可見，硝苯地平緩釋片的體外釋藥符合Weibull釋放模型，呈兩相釋藥，前期快速釋藥，后期緩慢釋藥。

3 討論

硝苯地平遇光不穩定，易分解成硝基苯吡啶衍生物和亞硝基吡啶衍生物，為避免影響測定結果，在整個操作過程中需注意避光。

本方法采用甲醇－水（60∶40）為流動相，有效地使硝苯地平與上述2種分解產物得到分離，保證了結果的準確性。另外，本試驗中曾試用不同的柱溫進行測定，主峰保留時間和與分解產物的分離度基本無變化，但柱壓變動較大，最后發現柱溫為30℃時最佳。試驗結果顯示，用HPLC法檢測硝苯地平緩釋片中硝苯地平的含量，方法回收率高、精密度好、簡便、穩定可靠，可有效控制本品的質量，為該劑型確立質量標準提供了可靠依據。

本研究的另一目的在于探索硝苯地平緩釋片的體外釋藥規律，為其體內釋藥行為提供一定的理論依據。由表2可見，Weibull分布擬合的相關系數最大，說明該方程能很好地描述硝苯地平緩釋片的體外釋藥特征。另外，Ritger－Peppas方程擬合的相關系數也較大，Ritger－Peppas方程變換前的形式為 Q＝ktn，其中 n為釋放參數，是該方程中表征釋放機制的特征參數。當n＜0.45時，藥物釋放機制為Fick′s擴散；當 n＞0.89時為骨架溶蝕；當0.45＜n＜0.89時，則為擴散和溶蝕的協同作用。比較上述擬合結果可知，溶出參數 n＝1.199 5，表明主藥以骨架溶蝕方式釋藥。

表2 不同釋藥模型的擬合方程和相關度

[1]陳光亮，王濱燕，戴小華，等．控釋硝苯地平對不同證型高血壓病的降壓療效的研究[J]．時珍國醫國藥，2012，23（2）：421－423．

[2]段官平，李 霞，楊成之．硝苯地平對人體平滑肌的作用研究進展[J]．中國現代醫生，2010，48（1）：12－13．

[3]凌 俐，王 東．緩釋與控釋硝苯地平對高血壓患者的降壓作用比較[J]．中國藥房，2012，23（12）：1 116－1 117．

[4]唐東霞，陳洪軒，和 平．硝苯地平緩釋片的研究[J]．中國現代藥物應用，2007，1（4）：21－22．

[5]王志強，吳繼禹，夏錦泉．RP－HPLC法測定硝苯地平緩釋片中硝苯地平的含量及分解產物[J]．安徽醫藥，2007，11（2）：132－133．

Content Determ ination and Release M echanism of Nifedipine Sustained Release Tab lets

Liu Rentong1，Chen Huiwen1，Pan Xuediao2，Yang Zhicheng2
（1．Huidong Women and Children Hospital，Huizhouo，Guangdong，China 516300； 2．Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou，Guangdong，China 510006）

Objective To establish a method for the content determination of nifedipine in Nifedipine Sustained Release Tablets by HPLC．M ethods The chromatographic separation condition of determination was as follows：Diamonsil C18column（250 mm×4．6 mm，5μm）．The mobile phase consisted of methanol－water（60∶40）with the flow rate of 1．0 mL／min．The wave length of detection was 237 nm and the column temperature was maintained at 30℃．Resu lts The standard curve of nifedipine was linear within range of 4．83－43．55μg／mL（r＝0．999 9）．RSD of precision and reproducibility were 0．91% and 1．46%(n＝6)，respectively．Average of recovery was 99．94% with RSD of 0．74%（n＝9）．Conclusion The determination method of content by HPLC is simple，quick，sensitive，fine reproducibility，which could be used to control the quality of nifedipine sustained release tablets．

nifedipine；Sustained Release Tablets；HPLC；content determination；dissolution

R969.1；R972+.4

A

1006-4931(2016)06-0055-04

2015－08－13)