烏腺金絲桃中總黃酮超聲法提取工藝研究

薛穎+高峰+張克勤+肖鳳艷

摘要：本試驗以總黃酮的提取率為評價指標，通過正交試驗法篩選烏腺金絲桃總黃酮超聲提取最佳工藝。結果表明：超聲提取總黃酮的影響因素順序為乙醇濃度>溫度>超聲功率>提取時間>料液比，最佳工藝條件是用樣品22倍量的體積分數為60%乙醇，采用超聲功率120W在超聲溫度60℃條件下提取50分鐘，在此條件下總黃酮提取率是8.15%。

關鍵詞：烏腺金絲桃;總黃酮;超聲提取;正交設計

基金項目：吉林農業科技學院大學生創新項目（2015008）

中圖分類號： S567 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼： ?A ? ? ? ? ? ? ? ? DOI編號： ? 10.14025/j.cnki.jlny.2016.24.043

烏腺金絲桃是藤黃科草本植物，功效為鎮痛、止血、通乳，主要應用于吐血、子宮出血、風濕關節痛、神經痛、跌打損傷、乳腺炎[1]。研究表明，其具有治療心臟病、抗腫瘤等作用，主要藥效物質為黃酮類化合物[2，3]。黃酮類化合物因其具有抗菌、抗炎、免疫調節、抗腫瘤、鎮痛、保肝、利尿、調節血管滲透性、延緩衰老、防護紫外線損傷等廣譜的藥理作用引人矚目[4]。鑒于烏腺金絲桃總黃酮提取工藝的研究少見報道[5]，且用超聲法從烏腺金絲桃中提取總黃酮的研究未見文獻報道，筆者在本試驗中采用正交試驗設計，對影響其提取率的多個因素進行了考察，以期優選出超聲法提取烏腺金絲總黃酮的最佳工藝。

1 材料

1.1 試劑與材料

本試驗材料為烏腺金絲桃葉，于2015年9月采自吉林農業科技學院左家校區烏腺金絲桃試驗田，鼓風烘干（50℃）備用。金絲桃苷標準品;無水乙醇、甲醇、亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉。

1.2 儀器

電熱鼓風干燥箱、 電子分析天平、循環水式真空泵、旋轉蒸發儀、超聲波清洗器、紫外可見分光光度計。

2方法

2.1試驗流程

樣品稱重超聲提取抽濾濾液濃縮定容離心測定含量計算提取率。

2.2標準品溶液的配制

精密稱取金絲桃苷標準品3.8毫克，溶解于甲醇中，制成濃度為380微克/毫升的標準品母液。

2.3 空白溶液的配制

取甲醇0.5毫升，加入5% NaNO2溶液0.3毫升，搖勻，放置6分鐘，加入10% Al（NO3）3溶液0.3毫升，搖勻，放置6分鐘，再加入4% NaOH溶液3毫升，搖勻，放置15分鐘，即為空白對照液[3]。

2.4測定波長的選擇

對2份樣品和金絲桃苷對照品經顯色后，在350～700nm范圍內掃描。金絲桃苷對照品的λmax=530nm處，樣品提取液的λmax=525～527nm，故選擇顯色后在527nm處測定吸光度。

2.5標準曲線的繪制

取母液稀釋得系列濃度標準品溶液。分別取各濃度標準品溶液0.5毫升，按2.3項操作，離心，在527nm處測定吸光度。以吸光度為縱坐標，金絲桃苷濃度為橫坐標做標準曲線，得線性方程y=0.0006x+0.00765（R2=0.99905），線性范圍是5.93～380微克 /毫升。

2.6樣品溶液的制備和總黃酮提取率的計算

取藥材粗粉2.0克，精密稱取，用乙醇溶液超聲提取。提取液抽濾濃縮，用甲醇定容并依據試驗情況適當稀釋，精密量取溶液0.5毫升，按按2.5項操作，測定吸光度（A），計算總黃酮的含量及總黃酮的提取率，提取率=樣品中總黃酮的量/藥材重量×100%。

2.7單因素考察

平行條件分別考察乙醇濃度、溫度、提取時間、料液比、超聲功率在不同水平下對烏腺金絲桃中總黃酮提取效果的影響。

2.8正交試驗

采用L9（34）正交試驗安排表進行試驗，以考察多因素對提取過程的交互影響，從而篩選出超聲提取最佳工藝。因素及水平設置見表1。

3 結果與分析

表1超聲提取法的L9（34）正交因素水平表

表2單因素考察結果

3.1單因素考察結果

單因素考察結果見表2，結果表明，乙醇濃度、溫度、提取時間、超聲功率對總黃酮提取效果有影響，料液比對提取效果影響不大，確定提取時料液比為1∶22。依據結果確定正交試驗各因素的合理水平。

3.2 正交試驗結果

表3 ?超聲法提取的正交試驗結果

極差分析結果的R值大小表明，四種因素對烏腺金絲桃中總黃酮提取影響程度A>B>D>C，即乙醇濃度>溫度>超聲功率>提取時間，說明因素A為影響烏腺金絲桃中總黃酮提取率的主要因素;四種因素的K值表明各因素水平的影響程度是A1>A2>A3，B2>B3>B1，C3> C1>C2，D2>D3>D1，綜上所述，理論最佳的工藝條件是A1B2C3D2，即樣品用60%乙醇采用超聲功率為120W在超聲溫度60℃條件下提取50分鐘，見表3。

3.3 驗證性試驗結果

按照上述確定的最佳條件，取5份樣品做了5次平行試驗，總黃酮平均提取率8.15%，算得相對標準偏差RSD=2.77%<3%，進一步說明正交試驗所得的最佳條件為提取烏腺金絲桃總黃酮較為理想的工藝。

4 結語

以總黃酮提取率為評價指標的正交試驗結果表明，乙醇濃度對烏腺金絲桃中總黃酮的提取影響程度顯著，提取溫度與超聲功率影響次之、提取時間與料液比影響程度較小;正交試驗分析及驗證性試驗結果表明，烏腺金絲桃中總黃酮超聲提取最佳工藝條件是樣品用22倍量的體積分數為60%乙醇采用超聲功率為120W在超聲溫度60℃條件下提取50分鐘，在此條件下總黃酮提取率是8.15%。

參考文獻

[1]周繇.中國長白山植物資源志[M].北京：中國林業出版社，2010：304.

[2]馬育軒，王艷麗，周海純，等.烏腺金絲桃的化學成分及藥理作用研究進展[J].中醫藥學報，2012，40（06）：125-126.

[3]高彥宇.烏腺金絲桃對缺血性心臟病模型動物的藥效物質基礎及作用機理的研究[D].黑龍江中醫藥大學，2008.

[4]曹緯國，劉志勤，邵云，等.黃酮類化合物藥理作用的研究進展[J].西北植物學報，2003，23（12）：2241-2247.

[5]王秀麗，宋志堅，王小東，等.正交試驗優化穩心草總黃酮提取工藝[J].科技創新導報，2012，（22）：192，194.

作者簡介：薛穎，吉林農業科技學院，在讀本科生，研究方向：中藥學。

通訊作者：肖鳳艷，碩士，吉林農業科技學院/長白山動植物資源利用與保護吉林省高校重點實驗室，副教授，研究方向：中藥資源開發。