黃芪四君子湯聯合不同營養方式對肝硬化肝癌大鼠肝部分切除術后營養狀態與免疫功能的影響

劉詩泆 劉素蘭 尹秋林

(江西衛生職業學院，江西 南昌 330006)

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黃芪四君子湯聯合不同營養方式對肝硬化肝癌大鼠肝部分切除術后營養狀態與免疫功能的影響

劉詩泆 劉素蘭 尹秋林1

(江西衛生職業學院，江西 南昌 330006)

目的 探討黃芪四君子湯聯合不同營養方式對肝硬化肝癌大鼠肝部分切除術后營養狀態與免疫功能的影響。方法 將成功建立肝硬化肝癌大鼠模型并采用Higgins法成功行肝部分切除術的150只大鼠，按隨機數字表分為Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組，每組50例，Ⅰ組給予常規經口飲食處理，Ⅱ組給予黃芪四君子湯聯合腸外營養，Ⅲ組給予黃芪四君子湯聯合腸內營養，術前及術后7 d進行營養狀態指標〔血紅蛋白(Hb)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)〕、免疫功能指標(細胞免疫功能指標、體液免疫功能指標)、免疫細胞因子〔白細胞介素(IL)-2、IL-6、干擾素(INF)-γ〕檢測，對三組檢測結果進行比較。結果 Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組術后Hb、TC、TG、LDL均較術前明顯降低，但Ⅱ組、Ⅲ組營養狀態指標高于Ⅰ組，Ⅲ組營養狀態指標高于Ⅱ組。Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組術后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明顯低術前，CD8+明顯高于術前，Ⅱ組、Ⅲ組術后細胞免疫功能指標明顯優于Ⅰ組，Ⅲ組術后細胞免疫功能指標明顯優于Ⅱ組。Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組術后IgG、IgM、IgA 水平均明顯低于術前，Ⅱ組、Ⅲ組術后體液免疫功能指標明顯優于Ⅰ組，Ⅲ組術后體液免疫功能指標明顯優于Ⅱ組。Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組術后IL-2、INF-γ均較術前明顯升高，Ⅱ組、Ⅲ組術后IL-2、INF-γ明顯高于Ⅰ組，Ⅲ組術后IL-2、INF-γ明顯高于Ⅱ組，Ⅰ組術后IL-6高于術前，Ⅱ組、Ⅲ組術后IL-6低于術前，Ⅲ組術后IL-6低于Ⅱ組。結論 肝硬化肝癌大鼠肝部分切除術后應用黃芪四君子湯聯合腸內營養既能改善術后的營養狀況，又可提高機體的免疫功能。

肝硬化;肝癌切除術;黃芪四君子湯;免疫功能;營養狀況

肝硬化、肝癌患者因肝代謝功能障礙，致使營養不良與免疫力低下發生率極高，而肝硬化與肝癌合并存在的患者尤為明顯〔1〕。手術切除是治療肝硬化后肝癌最有效的手段，但術后出現肝衰竭和腫瘤復發的概率較高，與機體存在營養不良及免疫功能低下相關〔2，3〕。圍術期營養支持對改善營養不良具有積極意義，但營養支持對免疫功能影響的研究相對較少。四君子湯出自《太平惠民和劑局方》，是益氣健脾的經典方劑，具有健脾和胃、益氣養血之功效，能有效增強肝癌患者免疫功能、改善營養狀態〔4〕。黃芪四君子湯是在四君子湯的基礎上加入黃芪配伍而成，有助益氣健脾之功，使提升正氣的作用進一步加強，改善肝細胞代謝功能受損的作用優于四君子湯〔5〕。本研究探討黃芪四君子湯聯合不同營養方式對肝硬化肝癌大鼠肝部分切除術后營養狀態與免疫功能的影響差異。

1 材料與方法

1.1 藥品試劑、動物 150只Wistar大鼠(3～4個月齡、體質量230～250 g)，雌雄不限，南昌大學醫學部實驗動物中心提供(合格證：合格證號:021-9815)；黃芪四君子湯：黃芪30 g、黨參15 g、白術15 g、茯苓15 g、炙甘草15 g，飲片均購自江西益豐大藥房，均經鑒定為合格藥材，按照常規方法煎煮、過濾、濃縮為200 ml。中長鏈脂肪乳(20%，卡路，廣州僑光制藥有限公司生產)，復方氨基酸注射液(安平，德國貝朗)，非蛋白質熱量171.5 kCal·kg-1·d-1，氮1.22 g·kg-1·d-1，按熱氮比140∶1配制營養液；四氯化碳(CCl4)(美國Sigma公司)；Walker-256 腫瘤細胞混懸液購自上海信裕生物技術有限公司。甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)試劑盒(上?？迫A東菱診斷用品有限公司)，血紅蛋白(Hb)試劑盒(上海西唐生物科技有限公司)，淋巴細胞分離液(TBD生物技術發展中心)；日立7080全自動生化分析儀(日本日立公司)，流式細胞儀FACScan(BD公司)，AXSYM全自動免疫化學發光分析儀(美國雅培公司)。

1.2 方法

1.2.1 肝硬化肝癌大鼠模型的建立 大鼠皮下注射60% CCl4，0.13 ml/100 g，1次/d，連續給藥5 d，以5%乙醇作唯一飲用水，連續服用40 d，停藥7 d，B超引導下向大鼠肝中葉注入Walker-256瘤細胞混懸液，篩選植瘤直徑0.5～0.8 cm的肝硬化肝癌大鼠模型作為研究對象，顆粒飼料喂養，自由飲水取食，9 d后進行研究。

1.2.2 分組 將造模成功的肝硬化肝癌大鼠按隨機數字表分為Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組，每組50例，按照Higgins 法切除帶瘤的大鼠肝中葉，定期換藥，Ⅰ組給予常規經口飲食處理，普通飼料喂養，自由飲水；Ⅱ組給予黃芪四君子湯聯合腸外營養(PN)，術后黃芪四君子湯灌，5 ml/d，分2次灌胃，連續灌胃7 d，采用恒流微泵持續輸注靜脈營養液，連續給藥7 d。Ⅲ組術后6 h給予營養乳劑與黃芪四君子湯灌胃，每日均為5 ml，分2次灌胃，連續灌胃7 d。Ⅱ組與Ⅲ組營養液的熱量及含氮量相同。

1.3 觀察指標 術前及術后7 d禁食水10 h后取大鼠尾緣靜脈血5 ml，高速離心取上清液，采用8120全自動生物化學分析儀檢測TC、TG、LDL，采用氰化高鐵法測定Hb，流式細胞術細胞計數儀測定CD3+、CD4+、CD8+，采用免疫散射比濁法測定IgG、IgM、IgA，采用ELISA法檢測白細胞介素(IL)-2、IL-6、干擾素(INF)-γ。

1.4 統計學方法 應用SPSS19.0軟件進行單因素方差分析。

2 結 果

2.1 三組大鼠手術前后營養指標比較 Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組術后Hb、TC、TG、LDL均較術前明顯降低，但Ⅱ組、Ⅲ組上述指標高于Ⅰ組，Ⅲ組營養狀態指標高于Ⅱ組。見表1。

2.2 三組大鼠手術前后免疫功能指標比較 Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組術后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明顯低術前，CD8+明顯高于術前，Ⅱ組、Ⅲ組術后細胞免疫功能指標明顯優于Ⅰ組，Ⅲ組術后細胞免疫功能指標明顯優于Ⅱ組。Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組術后IgG、IgM、IgA 水平均明顯低于術前，Ⅱ組、Ⅲ組術后體液免疫功能指標明顯優于Ⅰ組，Ⅲ組術后體液免疫功能指標明顯優于Ⅱ組。見表2，表3。

組別Hb(g/L)術前術后TC(mmol/L)術前術后TG(mmol/L)術前術后LDL(mmol/L)術前術后Ⅰ組99.3±5.585.1±6.73.43±0.222.02±0.251.15±0.060.63±0.041.18±0.080.65±0.03Ⅱ組99.2±8.390.3±6.43.40±0.342.36±0.261.13±0.080.78±0.031.16±0.040.80±0.04Ⅲ組99.5±6.495.2±7.23.35±0.402.64±0.241.12±0.100.96±0.051.18±0.050.98±0.05F/P值0.402/>0.056.054/<0.010.315/>0.054.246/<0.010.417/>0.054.115/<0.010.422/>0.054.226/<0.01

組別CD3+(%)術前術后CD4+(%)術前術后CD8+(%)術前術后CD4+/CD8+術前術后Ⅰ組69.65±7.5460.45±5.5842.65±5.5036.30±3.4029.43±3.2136.45±3.301.45±0.201.00±0.06Ⅱ組69.42±6.6462.48±5.3642.54±4.5637.53±3.4629.32±2.4634.48±3.371.45±0.181.09±0.05Ⅲ組69.50±6.5964.54±5.2941.60±4.8239.54±3.5329.40±2.8632.54±3.321.42±0.221.22±0.08F/P值0.255/>0.054.042/<0.050.354/>0.053.961/<0.050.411/>0.053.866/<0.050.312/>0.053.916/<0.05

組別IgG術前術后IgM術前術后IgA術前術后Ⅰ組13.64±1.3510.32±1.201.78±0.151.30±0.102.67±0.142.03±0.16Ⅱ組13.56±1.2711.34±1.151.74±0.151.43±0.132.59±0.162.14±0.22Ⅲ組13.60±1.3312.36±1.081.75±0.161.55±0.202.62±0.162.25±0.30F/P值0.156/>0.054.421/<0.050.542/>0.053.618/<0.050.313/>0.053.412/<0.05

2.3 三組大鼠手術前后免疫細胞因子比較 Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組術后IL-2、INF-γ均較術前明顯升高，Ⅱ組、Ⅲ組術后IL-2、INF-γ明顯高于Ⅰ組，Ⅲ組術后IL-2、INF-γ明顯高于Ⅱ組，Ⅰ組術后IL-6高于術前，Ⅱ組、Ⅲ組術后IL-6低于術前，Ⅲ組術后IL-6低于Ⅱ組。見表4。

組別IL-2術前術后INF-γ術前術后IL-6術前術后Ⅰ組13.1±1.124.5±1.227.8±2.181.8±4.521.8±1.728.4±1.4Ⅱ組13.2±0.931.4±1.328.2±2.0110.4±5.322.4±2.019.9±1.2Ⅲ組13.1±1.139.4±1.528.1±2.0139.5±6.222.1±1.816.6±1.3F/P值0.164/>0.054.413/<0.050.525/>0.053.682/<0.050.332/>0.053.423/<0.05

3 討 論

肝癌、肝硬化患者多合并營養不良與免疫功能低下，早期營養支持治療能夠有效改善患者的營養狀況和免疫功能，其方式包括完全PN、腸內營養(EN)。四君子湯是益氣健脾的經典方法，聯合腸內營養乳劑可有助于改善肝癌合并肝硬化圍手術期營養狀態與免疫功能〔6〕，作用優于單純腸內營養乳劑，對于四君子湯聯合PN或EM何種效果更好，有待進一步研究。黃芪四君子湯是在四君子湯的基礎上再配伍黃芪，宋雅芳等〔5〕研究顯示，與四君子湯比較，黃芪四君子湯在促進線粒體氧化磷酸化過程中的能量轉化作用更好，促使ATP合成更多，維持細胞代謝與能量代謝，起到更好的扶正補虛的效果。曾益宏等〔7〕研究表明，黃芪四君子湯改善脾主運化的功能優于四君子湯，其機制可能與其能升高血清胃泌素含量、促進胃腸道吸收有關。徐旭東等〔8〕研究顯示，黃芪四君子湯聯合早期EN能夠改善食管癌術后的營養、免疫狀態，促進患者康復。

T和B淋巴細胞是免疫系統的重要組成部分，二者相互作用功能調控機體免疫，T淋巴細胞在參與機體細胞免疫調節及免疫效應的過程中發揮了重要的作用，T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+是反映機體細胞免疫功能的常用指標，CD4+細胞能夠有效地促進機體免疫系統起到抗腫瘤作用，CD8+發揮免疫抑制作用，CD4+/CD8+可作為術后免疫抑制程度的重要指標；B淋巴細胞主要參與體液免疫，IgA、IgM、IgG是反映機體體液免疫功能的常用指標。本文研究結果顯示，肝硬化肝癌大鼠肝部分切除術后免疫功能明顯下降，但黃芪四君子湯聯合不同營養方式能夠抑制免疫功能下降，其中黃芪四君子湯聯合EN對免疫功能的改善效果更好。

肝硬化肝癌大鼠肝部分切除術后營養狀態下降，黃芪四君子湯聯合不同營養方式能夠促進營養狀況改善，以黃芪四君子湯聯合EN的效果更好，可能與其能更好促進營養物質吸收有關。

免疫細胞因子是免疫調控的主要執行者，IL-2、INF-γ發揮促進免疫功能的作用，抑制腫瘤細胞生長；IL-6啟動急性期炎性反應，同時部分抑制機體免疫功能。本文研究結果顯示，肝硬化肝癌大鼠肝部分切除術后啟動了免疫調控功能，出現急性期炎性反應，黃芪四君子湯聯合不同營養方式能夠促進免疫功能，減輕機體的免疫抑制狀態，以黃芪四君子湯聯合EN的效果更好。

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〔2015-12-11修回〕

(編輯 袁左鳴)

1 江西省人民醫院

劉詩泆(1965-)，男，副教授，主要從事天然藥物化學研究。

R285.5

A

1005-9202(2016)23-5807-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.23.015