遍山紅總黃酮的含量測定

潘立衛 羅澤萍 韋志巧 何燕

(1.河池學院 化學與生物工程學院， 廣西 宜州 546300； 2.廣西大學 農學院， 廣西 南寧 530000)

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遍山紅總黃酮的含量測定

潘立衛1羅澤萍1韋志巧2何燕1

(1.河池學院 化學與生物工程學院， 廣西 宜州 546300； 2.廣西大學 農學院， 廣西 南寧 530000)

目的：建立遍山紅中總黃酮含量的測定方法，為其研究開發提供科學依據。方法：總黃酮的含量采用紫外分光光度法進行測定，以楊梅苷為對照品，在最大吸收波長500 nm處測定吸光度。結果：遍山紅總黃酮的線性范圍為20～120 μg (r=0.999 7)，加樣回收率為100.96%，RSD為2.29%；葉子的總黃酮含量略高于莖的總黃酮含量。結論：該方法簡便、準確、靈敏度高，可用于遍山紅藥材的質量控制參考。

遍山紅；總黃酮；楊梅苷；紫外分光光度法

遍山紅(Oxysporapaniculata(Don) DC.)為野牡丹科植物尖子木的根或全株，又名大葉朝天罐，分布于廣西、貴州、云南、西藏等地[1]。民間常用于治療濕熱瀉痢，風濕痛，吐血，尿血，月經過多，產后血崩，帶下，外傷出血，跌打腫痛，瘡腫，腹瀉和痢疾等癥[2-4]，現代藥理研究報道遍山紅具有可抑制結核桿菌的作用[5]。此外，遍山紅可做為一種蔬菜食用[6]，其主要化學成分含有β-谷甾醇、胡蘿卜苷、齊墩果酸、熊果酸、沒食子酸、楊梅苷、山奈酚、槲皮素等[5]。目前，國內外對遍山紅的研究主要集中在植物分類學、園林景觀學和資源學等領域[7-9]，但對其化學成分和藥理作用的研究甚少，質量標準控制方面也未見報道。本文首次建立了紫外分光光度法測定遍山紅中總黃酮含量的測定方法，該方法簡單、快捷，為進一步研究遍山紅的質量標準控制和藥用植物資源深度開發利用提供科學依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 8453型紫外可見分光光度計；AR224CN電子分析天平；Millipore D-Q3超純水器；KQ250DE型超聲波清洗器。

1.2 材料

楊梅苷對照品由河池學院化學與生物工程學院制藥工程實驗室提供，經HPLC檢測，楊梅苷含量>98%；超純水；其他試劑均為分析純。遍山紅藥材于2015年7-8月份在廣西河池市5個縣市采集，經河池學院化學與生物工程學院植物學鄧晰朝副教授鑒定為野牡丹科尖子木Oxysporapaniculata(Don) DC.的干燥莖葉。

2 總黃酮含量測定

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的楊梅苷對照品10.0 mg，置于50 mL量瓶中；加入70%乙醇使其溶解，定容，得對照品溶液(每1 mL含楊梅苷0.20 mg)。

2.2 供試品溶液的制備

遍山紅藥材地上莖，用鍘刀切成3-5 mm薄片后，自然干燥，對角線法取樣，粉碎，過2號篩。精密稱取藥材粉末1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，密塞，稱定質量，設定溫度30 ℃，超聲提取(功率: 250 W，頻率: 40 kHz) 40 min，冷卻至室溫稱質量，補足損失的溶劑質量，搖勻，濾過，取續濾液10 mL，定容至100 mL，即得。

2.3 標準曲線的繪制

圖1 楊梅苷線性關系圖

精密吸取對照品溶液1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0和0 mL(空白)，分別置于10 mL容量瓶中，加入70%乙醇至7 mL，加5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，混勻，放置10 min，加10%三氯化鋁溶液0.3 mL，混勻，放置10 min，加1 mol/L氫氧化鈉溶液2 mL，加70%乙醇至刻度，搖勻，靜置10 min，在最大吸收波長500 nm處測定吸收度。以吸收度(A)為縱坐標，濃度(C)為橫坐標做標準曲線，得回歸方程為A=0.434 2C-0.000 2(r=0.999 7，n=6)。結果表明，楊梅苷在20～120 μg范圍內與吸收度呈良好的線性關系(見圖1)。

2.4 精密度試驗

精密移取對照品溶液1 mL，按“2.3”項的方法，自“加入70%乙醇至7 mL”起，依次顯色，測定6次，結果對照品平均吸光度值為0.047 6，RSD為1.44%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩定性試驗

精密移取供試品溶液1 mL，按“2.3”項的方法，自“加入70%乙醇至7 mL”起，依次顯色，每隔20 min測其吸收度，連測12次，每次平行測定3次取平均值，結果供試品平均吸光度值為0.154 6，RSD為2.61%，表明樣品在3 h內穩定，滿足測定要求。

2.6 重復性試驗

精密稱取同一批(BHS-1)遍山紅藥材粉末共6份，每份1 g，按“2.2”項的方法制備樣品溶液，按“2.3”項的方法測定，自“加入70%乙醇至7 mL”起，依次顯色，測定吸光值，結果平均吸光度值為0.155 8，RSD為1.06%，表明方法重復性良好。

2.7 加樣回收率試驗

取已知遍山紅藥材粉末共6份，每份0.5 g，精密稱定，再分別精密加入5.3 mg/mL楊梅苷對照液1 mL，按“2.2”項的方法操作，得到供試品溶液后，照“2.3”項的方法，自“加入70 %乙醇至7 mL”起，依次顯色，測定吸光度，結果見表1。

表1 加樣回收率實驗(n=6)

編號樣品重/g樣品含量/mg加入量/g測得量/mg回收率/%平均值/%RSD/%105022563460005310894499242050235635800053112238105433050285641400053109522100204050245636900053109453100155050235635800053110069101346050515667200053109348993810096229

2.8 樣品測定

精密稱取5批遍山紅莖和葉的藥材粉末各5份，每份1 g，按“2.2”項的方法制備樣品溶液，按“2.3”項的方法測定，自“加入70 %乙醇至7 mL”起，依次顯色，測定吸光值，同一批次藥材平行測定3份，取平均值計算總黃酮含量，結果5批不同產地遍山紅藥材的測定結果見表2。

表2 5批不同產地遍山紅藥材及其楊梅苷含量測定結果

編號產地批號葉含量/mg·g-1莖含量/mg·g-11保 安BSH-1108710722大 興BSH-210499973地 蘇BSH-39809374大 化BSH-48618185七百弄BSH-510801056

3 討論

楊梅苷是具有多酚羥基的黃酮苷類物質，多存在于楊梅、藤茶、龍眼葉和蛇葡萄屬等植物中[9-11]，具有多種藥理活性，表現出抗氧化、抗擴張血管、抗炎鎮痛的作用[12]，還具有降壓、降血糖、抑菌作用[13-15]。本實驗研究表明楊梅苷做為主要的黃酮類成分存在于遍山紅中，含量達到1%左右。目前，2015版藥典尚未收錄有關遍山紅的質量控制標準，本研究首次采用紫外分光光度法對遍山紅中的莖葉總黃酮含量進行測定，發現其葉子含量略高于莖的含量，為合理選擇藥用部位、深度開發利用藥材提供實驗基礎。

目前，總黃酮的含量測定方法有：紫外區直接測定法、可見區絡合法、液相色譜法等，其中前兩種方法較為常見，且方法成熟快速，而液相色譜主要應用于單一黃酮化合物的測定；另外，紫外區直接測定總黃酮的方法易受測液的基底(苯類，共軛烯烴等)影響產生誤差。絡合法與直接測定法不同，其原理為：金屬離子與酮羰基、鄰位羥基形成配位化合物，使吸收帶發生位移，從而克服了被測液基底的影響，故本文選擇使用紫外可見區絡合法測定藥材總黃酮含量。

4 結論

本文建立了紫外分光光度法檢測遍山紅中總黃酮的方法，該法快速，簡單，準確，可為該藥材的質量控制和定量分析提供一定科學依據。

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[責任編輯 劉景平]

Determination of Total Flavones ofOxysporaPaniculata(Don) DC.

PAN Liwei1, LUO Zeping1, WEI Zhiqiao2, HE Yan1

(1.School of Chemistry and Biological Engineering, Hechi University, Yizhou, Guangxi 546300; 2.Agriculture College, Guangxi Unicersity, Nangning, Guangxi 530000， China)

Objective: To establish the method for determining the content of total flavonoids ofOxysporapaniculataand provide scientific basis for the development and utilization of this plant. Method: The total flavonoids are analyzed by spectrophotometry at the maximum absorption wavelength 500 nm with myricitrin as reference substance. Result: The linear range of total flavonoids is 20～120 μg (r=0.999 7), and its average recovery is 100.96%, RSD = 2.29%. The content of total flavonoids in the extract from the lea-ves is higher than that of the aerial parts. Conclusion: The method is simple, sensitive and accurate, and can be used for the quality control of Oxyspora paniculata.

Oxysporapaniculata(Don) DC.; total flavonoids; myricitrin; UV

R284.1

A

1672-9021(2016)05-0019-04

潘立衛(1987-)，男，廣西都安人，河池學院化學與生物工程學院實驗師，主要研究方向：中草藥有效成分。

廣西教育廳高校科學技術研究基金資助項目(KY2015LX367)；河池學院青年科研基金資助課題(XJ2015QN010)；“廣西高等教育創優計劃”本科教學項目(桂教高教〔2015〕93號)。

2016-06-21