MIR-499在急性冠脈綜合征患者血清中的表達(dá)及與QT離散度的相關(guān)性研究

呂晉琳吳新華尹雪艷李利華楊 瑛羅文娟張 雷

（1、大理大學(xué)，云南大理671000；2、大理大學(xué)附屬醫(yī)院，云南大理671000）

論著／冠心病

MIR-499在急性冠脈綜合征患者血清中的表達(dá)及與QT離散度的相關(guān)性研究

呂晉琳1吳新華2尹雪艷1李利華1楊 瑛2羅文娟2張 雷2

（1、大理大學(xué)，云南大理671000；2、大理大學(xué)附屬醫(yī)院，云南大理671000）

目的 探討急性冠脈綜合征患者外周血微小RNA-499（miR-499）的表達(dá)及其與QT離散度(QTd)的關(guān)系。方法 2014年5月至2015年4月大理大學(xué)附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科收治的128例ACS患者血清并收集臨床資料，以48例健康體檢者為對(duì)照組。分析miR-499在ACS患者血清中的表達(dá)及其與QT離散度的關(guān)系。結(jié)果 ACS患者miR-499和QTd及校正的QTd（QTcd）值均高于正常對(duì)照組，并且miR-499表達(dá)的升高和QTd值呈正相關(guān)。結(jié)論 MiR-499表達(dá)在ACS患者血清中上調(diào)，并與QTd相關(guān)，其可能成為ACS新的潛在診療靶點(diǎn)并為預(yù)后評(píng)估提供重要的臨床參考價(jià)值。

急性冠脈綜合征；microRNA-499；QT離散度

動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，As)引起的心腦血管疾病發(fā)病率漸呈上升趨勢(shì)，已成為危害人類健康的主要?dú)⑹諿1]。在動(dòng)脈粥樣硬化性疾病中，急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）是一組由急性心肌缺血引起的綜合征，可能引起惡性心律失常甚至心臟停搏，是臨床常見的急危重癥[2]。QT離散度（QTd）是體表心電圖不同導(dǎo)聯(lián)間最長(zhǎng)與最短QT間期的差值，反映了心室肌復(fù)極的不均一性和電不穩(wěn)定性。研究發(fā)現(xiàn)QTd與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)，并在預(yù)測(cè)惡性室性心律失常及猝死中有重要參考價(jià)值[3]。MiRNAs是一類內(nèi)源性、非編碼小RNA序列，miRNA基因先在細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄出初始miRNA，再經(jīng)Drosha-DGCR8復(fù)合物剪切為60-80堿基長(zhǎng)度帶有莖-環(huán)結(jié)構(gòu)的miRNA，它們主要通過與蛋白編碼基因外顯子區(qū)或基因信使RNA（mRNA）的種子序列互補(bǔ)結(jié)合，致靶基因降解和/或翻譯抑制[4]。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)及高通量技術(shù)的發(fā)展，miRNA在As中的作用逐漸引起人們重視，并發(fā)現(xiàn)miR-499在急性心肌梗死患者血漿中表達(dá)水平明顯升高[5]。本文旨在進(jìn)一步研究ACS患者血清miR-499表達(dá)水平，探討其與QTd的相互關(guān)系，以期為ACS診療提供新的靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

2014年5月至2015年4月大理大學(xué)附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科收治的128例ACS患者，其中急性心肌梗死(AMI)37例，不穩(wěn)定型心絞痛(UA)91例，所有患者均行冠狀動(dòng)脈造影檢查，以48例健康體檢者為對(duì)照組。排除其他心臟疾病，合并嚴(yán)重的肝腎功能不全，其他慢性炎癥，卒中，惡性腫瘤，風(fēng)濕性疾病，近期應(yīng)用抑炎癥藥物，所有合并心房顫動(dòng)、束支傳導(dǎo)阻滯、嚴(yán)重電解質(zhì)紊亂、應(yīng)用影響心肌復(fù)極的藥物以及先天性長(zhǎng)QT綜合征的患者。

1.2 研究方法

1.2.1 血樣采集和qRT-PCR ACS患者在發(fā)病24h內(nèi)從前臂靜脈采取空腹血標(biāo)本，對(duì)照組于空腹體檢時(shí)采血3ml，肝素鈉抗凝。用EastepTM試劑盒提取血清總RNA。按Hairpin-itTMmiRNA qRT-PCR試劑盒說明書步驟進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)。ABI7500實(shí)時(shí)定量PCR儀測(cè)定并用2-ΔΔCt計(jì)算其相對(duì)表達(dá)量。

1.2.2 QTd測(cè)算 GEMAC1200心電圖儀記錄患者入院1h內(nèi)的12導(dǎo)聯(lián)心電圖供分析。由同一人測(cè)量同期同步12導(dǎo)聯(lián)心電圖QT間期，以各導(dǎo)聯(lián)QRS波離開等電位線為Q波起點(diǎn)，T波終點(diǎn)判斷：①T波與等電線交點(diǎn)；②T波降支切跡與等電線的交點(diǎn)；③有U波存在時(shí)取T波與U波交界的最低點(diǎn)。除外T波、U波分界不清的導(dǎo)聯(lián)，各導(dǎo)聯(lián)連續(xù)測(cè)量3個(gè)心動(dòng)周期取其均值，計(jì)算公式：QTd=QT（max）-QT（min），為校正心率影響，用Bazett's公式：QTc= QT/(R-R）1/2計(jì)算，QTcd=QTc（max）-QTc（min）[6]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，均數(shù)比較用t檢驗(yàn)或單因素方差分析，用線性相關(guān)分析QTd與miR-499的關(guān)系。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床特征

本研究共納入37例AMI患者，其中男性21例，女性16例。91例UA患者，其中男性62例，女性29例。48例健康體檢者作為對(duì)照組，其中男性29例，女性19例。見表1，各組患者性別、年齡及甘油三酯（TG）水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。與對(duì)照組相比，AMI組血糖、收縮壓、舒張壓、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白（HDL-C）及低密度脂蛋白（LDL-C），UA組收縮壓、HDL-C及LDL-C水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 外周血miR-499的表達(dá)水平分析

如圖1所示，AMI及UA患者外周血miR-499水平均較健康對(duì)照組(CTL)升高（見圖1）。

圖1

2.3 miR-499與QTd的相關(guān)分析

與對(duì)照組相比，ACS組QTd及QTcd值均明顯高于升高（詳見表2）。ACS患者M(jìn)iR-499與QTd值呈顯著正相關(guān)（r=0.321，P=0.0046）。

表1 臨床資料分析（±s）

表1 臨床資料分析（±s）

注：與對(duì)照組相比*P＜0.05，#P＜0.01。

組別 年齡（歲） 空腹血糖 收縮壓 舒張壓TCTGHDL-CLDL-C（mmol/L） （mm/Hg） （mm/Hg） （mmol/L） （mmol/L） （mmol/L） （mmol/L）研究組AMI69.2±7.97.3±1.4#152±18#93±8*4.72±0.99*1.69±0.721.11±0.27*3.69±0.96*UA67.4±5.84.7±1.1131±13*87±94.06±1.111.80±1.191.32±0.36*2.77±1.1*對(duì)照組68.1±5.14.6±0.4122±1478±103.72±0.891.74±0.781.83±0.412.07±0.81

表2 QTd值比較（±s）

表2 QTd值比較（±s）

注：與對(duì)照組相比*P＜0.05。

組別ACS組CTL組例數(shù)（n）128 48 QTd 58.67±14.31*37.44±9.42 QTcd 61.37±15.17*41.09±8.73

3 討論

ACS是由于動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂或糜爛，伴有不同程度血栓形成、血管痙攣及栓塞引起心肌急性缺血所導(dǎo)致的一組綜合征。諸多研究證明缺血、缺氧可引起心肌細(xì)胞損傷，導(dǎo)致細(xì)胞膜去極化及膜泵能量缺乏，使局部復(fù)極不均一性加重，為折返創(chuàng)造了條件，心肌細(xì)胞電活動(dòng)紊亂，容易誘發(fā)惡性心律失常，QTd是心肌最早復(fù)極與最晚復(fù)極的時(shí)間差值，是一種簡(jiǎn)便、無(wú)創(chuàng)地反映心肌復(fù)極不均一性和電活動(dòng)不穩(wěn)定性的方法。近年的研究發(fā)現(xiàn)QTd延長(zhǎng)的程度與心血管事件的發(fā)生及預(yù)后相關(guān)[7]。目前關(guān)于QTd正常參考值尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，一般認(rèn)為QTd參考范圍為30-50ms[8]。本文中ACS患者QTd及QTcd較對(duì)照組明顯延長(zhǎng)，并且與miR-499呈正相關(guān)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，miRNAs在調(diào)控心血管系統(tǒng)發(fā)育和功能上起重要作用，As患者血管中有44中miRNAs上調(diào)57種miRNAs下調(diào)[9]，并且miRNAs水平的改變與心律失常存在密切關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)miR-499可能參與了動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程。MiR-499是心肌特異的微小RNA，參與了心肌肥厚、重構(gòu)等進(jìn)程的調(diào)節(jié)。Corsten等研究發(fā)現(xiàn)AMI患者血漿miR-499水平超過不典型胸痛患者約100倍[10]。對(duì)小鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎模擬AMI，結(jié)扎后4h和24h miR-499分別增高到103倍和95倍[11]。

本研究表明，與對(duì)照組相比miR-499在ACS患者血清中表達(dá)增加超過30倍，以其對(duì)心肌缺血損傷反應(yīng)的敏感性及特異性可能成為利于早期及時(shí)診斷ACS的生物學(xué)標(biāo)志物及新的治療靶點(diǎn)。同時(shí)miR-499與QTd呈正相關(guān)，而QTd增加是患者發(fā)生惡性心律失常事件的一個(gè)危險(xiǎn)信號(hào)。我們認(rèn)為可將二者聯(lián)合起來(lái)，作為一種對(duì)ACS患者快捷、安全、簡(jiǎn)單、有效的病情及近期預(yù)后評(píng)估方法。因此，血漿miR-499水平及QTd對(duì)臨床醫(yī)生識(shí)別和篩選高危患者，進(jìn)行積極的治療和監(jiān)護(hù)，具有重要的臨床實(shí)用價(jià)值。

［1］ Mathers CD,Loncar D.Projections of global mortality and burden of disease from2002 to2030.PLoSMed.2006.3(11):e442.

［2］ Van Camp G,Pasquet A,Sinnaeve P,et al.Summary 2015 ESC guidelines [J]. Acta Cardiol, 2016,71 (1):7-13. DOI: 10.2143/AC.71.1.3132092.

［3］ Gleser MG,Kiseleva AE,Astashkin EI.Effect of L-Carnitine on QT Dispersion in PatientsWith AcuteCoronary Syndrome[J]. Kardiologiia,2015,55(3):4-9.

［4］ MianoJM,LongX.The short and longofnoncodingsequences in the control of vascular cell phenotypes.Cell Mol Life Sci,2015,72: 3457-88.

［5］ Chen X,Zhang L,Su T,et al.Kinetics of plasma microRNA-499 expression in acute myocardial infarction[J].J Thorac Dis,2015,7 (5):890-896.

［6］ Jordaens LJ.The clinical value of QT dispersion:newperspectives on the assessment of cardiac repolarization more than 75 years after Bazett's formula[J].Europace,1999,1(2):73-76.

［7］ Ornek E,Duran M,Ornek D,et al.The effect ofthrombolytic therapy on QT dispersion in acute myocardial infarction and its role in the prediction ofreperfusion arrhythmias[J].Niger J Clin Pract,2014,17 (2):183-187.

［8］ Lee KW,Kligfield P,Okin PM,et al.Determinants of precordial QT dispersion in normal subjects[J].J Electrocardiol,1998,31 Suppl: 128-133.

［9］ Wang R,Dong LD,Meng XB,et al.Unique MicroRNA signatures associated with early coronary atherosclerotic plaques.Biochem Biophys Res Commun,2015,464:574-9.

［10］ CorstenMF,DennertR,JochemsS,etal.CirculatingMicroRNA-208b and MicroRNA-499 reflect myocardial damage in cardiovascular disease[J].CircCardiovascGenet,2010,3(6):499-506.

［11］ ZhangLL,Liu JJ,LiuF,etal.MiR-499 induces cardiac differentiation of rat mesenchymal stem cells through wnt/β-catenin signaling pathway[J].Biochem BiophysResCommun,2012,420(4):875-881.

Expression of microRNA-499 in serum of patients with acute coronary syndrome and its correlation with QT dispersion

LYU Jin-lin1,WU Xin-hua2,YIN Xue-yan1,LI Li-hua1,YANG Ying2,LUO Wen-juan2,ZHANG Lei2
(1.Dali University,Dali 671000,China; 2.The Affiliated Hospital of Dali University,Dali 671000,China)

Objective To investigate the expression of microRNA-499(miR-499)in peripheral blood in patients with acute coronary syndrome (ACS)and its correlation with QT dispersion.Methods A total of 128 patients with ACS who were admitted to Department of Cardiology in The Affiliated Hospital of Dali University from May 2014 to April 2015 were enrolled,and serum samples and clinical data were collected.A total of 48 healthy persons who underwent physical examination were enrolled as control group.The expression of miR-499 in serum and its correlation with QT dispersion were analyzed.Results The ACS group had significantly higher serum miR-499 level,QT dispersion,and corrected QT dispersion than the control group,and the expression of miR-499 was positively correlated with QT dispersion.Conclusion The expression of miR-499 is upregulated in serum of patients with ACS and is positively correlated with QT dispersion.Therefore,it may become a new potential target for the diagnosis and treatment of ACS and provide an important reference for prognostic evaluation.

Acute coronary syndrome;microRNA-499;QT dispersion

云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：2012FD037)

呂晉琳，1982年生，女，云南大理人，博士研究生在讀，主治醫(yī)師，主要研究方向?yàn)楣谛牟』A(chǔ)與臨床方面。