鹽酸環苯扎林緩釋微丸的制備及體外釋放度考察

于 佳（大連醫科大學附屬第二醫院藥學部，遼寧大連 116027）

鹽酸環苯扎林緩釋微丸的制備及體外釋放度考察

于 佳＊（大連醫科大學附屬第二醫院藥學部，遼寧大連 116027）

目的：制備鹽酸環苯扎林緩釋微丸，并考察其體外釋放度。方法：采用流化床底噴上藥技術制備鹽酸環苯扎林載藥微丸，再以Surelease?水分散體作為緩釋包衣劑制成鹽酸環苯扎林緩釋微丸。以包衣時間、包衣效率和微丸粘連率為因變量，通過Box-Behnken響應面法優化包衣工藝中的進風溫度、霧化壓力、供液速度。利用f2相似因子法對自制制劑和市售制劑（AMRIX?）在不同介質（水、pH 1.2鹽酸水溶液和pH 4.5醋酸鹽緩沖液、6.8磷酸鹽緩沖液）中的體外釋放度進行比較。結果：緩釋包衣工藝中包衣增質量為7%，進風溫度為55℃，霧化壓力為0.36 MPa，供液速度為12.5 ml/min；包衣時間為（47.1±2.1）min，包衣效率為（88.4±1.6）%，微丸粘連率為（2.7±0.3）%，與其相應預測值（44.5 min、90.0%、2.9%）的相對誤差分別為5.8%、1.8%、6.9%；在4種介質中自制制劑與市售制劑的f2分別為77.7、85.9、83.5、84.6。結論：制得體外釋放較好的鹽酸環苯扎林緩釋微丸。

鹽酸環苯扎林；緩釋微丸；體外釋放度；Box-Behnken響應面法；包衣工藝；優化

鹽酸環苯扎林最早是由默克公司研制開發的一種三環類肌肉松弛劑，于20世紀80年代在美國等十多個國家批準上市銷售，臨床上主要用于治療伴有疼痛癥狀的骨骼肌肉系統不適或者肌肉痙攣，能夠明顯緩解肌肉痙攣并緩解相關的癥狀（包括疼痛、觸痛、運動限制、日常活動限制等）[1-3]。然而，由于鹽酸環苯扎林在生物體內半衰期較短，其普通劑型每日需服藥3次，用藥較為頻繁，影響了患者用藥的順應性[4]。

鹽酸環苯扎林緩釋微丸膠囊是由美國Anesta制藥公司首先研制成功的緩釋制劑，并于2007年2月在美國獲準上市，商品名為AMRIX?。鹽酸環苯扎林緩釋微丸膠囊每日僅需服藥1次，顯著提高了患者用藥的順應性。仿制開發鹽酸環苯扎林緩釋微丸膠囊將具有很好的市場前景，因此本研究將以上市銷售的鹽酸環苯扎林緩釋微丸膠囊作為參比制劑進行仿制開發。

1 材料

1.1 儀器

LC-6A型高效液相色譜系統（日本島津公司）；Mini-DPL型流化床包衣設備（重慶精工制藥機械公司）；RDB-8A型蠕動泵（天津大學無線電廠）；RC806型溶出儀（天津天大天發科技有限公司）。

1.2 藥品與試劑

鹽酸環苯扎林原料藥和鹽酸環苯扎林對照品（山東新時代藥業有限公司，批號：CBZ150411、CBZ-S150615，純度：＞99.0%、＞99.5%）；鹽酸環苯扎林緩釋微丸膠囊（商品名：AMRIX?，美國Anesta制藥公司，批號：M29817302，規格：每粒15 mg）；藥用丸芯（蔗糖型，杭州高成生物營養技術有限公司，批號：140218，規格：20～30目）；羥丙甲基纖維素E5（HPMC E5，陶氏化學公司惠贈，批號：3897286N004）；Surelease?水分散體（上海卡樂康包衣技術有限公司惠贈，批號：2861837911）；乙腈（默克化學試劑有限公司）；氫氧化鈉、磷酸二氫鉀均由國藥集團化學試劑有限公司提供；水為蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 鹽酸環苯扎林含量的測定

2.1.1 色譜條件和專屬性試驗 色譜柱：Hypersil C18（250mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.05 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液（pH 7.0）-乙腈（70∶30），流速：1.0 ml/min；檢測波長：290 nm；柱溫：20℃；進樣量：20 μl。該色譜條件下，空白輔料不干擾鹽酸環苯扎林的測定，分離良好。空白輔料溶液、對照品溶液和供試品溶液的色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.1.2 方法學考察 用流動相制備含鹽酸環苯扎林質量濃度分別為0.4、1.0、2.0、4.0、10.0、20.0 μg/ml的系列對照品溶液，進樣測定，記錄峰面積。以峰面積（A）對質量濃度（c）進行線性回歸，得方程為A＝23 683c－3 526.8（r＝0.999 9），鹽酸環苯扎林質量濃度的線性范圍為0.4～20.0 μg/ml。儀器精密度RSD＝0.77%（n＝6）；方法精密度RSD＝1.01%（n＝6）；平均方法回收率為99.6%（RSD＝1.21%，n＝9）。

2.2 鹽酸環苯扎林緩釋微丸的制備

2.2.1 載藥微丸的制備 采用空白蔗糖丸芯上藥法制備鹽酸環苯扎林緩釋微丸[5-8]。稱取處方量的鹽酸環苯扎林原料藥，溶解于含有5.0%HPMC E5的水溶液中，攪拌均勻，備用；稱取空白蔗糖丸芯置于Mini-DPL型流化床內，采用底噴裝置包載藥層。包載藥層的工藝參數：進風溫度為55℃，霧化壓力為0.30 MPa，供液速度為10 ml/min。在載藥過程中隨時調整進風溫度和供液速度直至載藥結束，將載藥微丸置于40℃烘箱中干燥20 min，控制水分＜2.0%，備用。

2.2.2 緩釋微丸的制備 將乙基纖維素濃度為25%的Surelease?水分散體加水稀釋成固含量為10%的包衣液，攪拌分散均勻。將載藥微丸置于Mini-DPL型流化床內進行包衣。包衣工藝參數：進風溫度為45～60℃，霧化壓力為0.1～0.5 MPa，供液速度為5～15 ml/min。在包衣過程中隨時調整進風溫度和供液速度直至緩釋層包衣結束，將緩釋微丸置于40℃烘箱中過夜熟化。

2.3 釋放度測定方法

參照美國FDA溶出度數據庫公布的鹽酸環苯扎林緩釋微丸釋放度測定方法進行體外釋放試驗。采用槳法，轉速為50 r/min，釋放介質為0.1 mol/L鹽酸溶液，體積為900 ml，溫度為（37±0.5）℃。分別在1、2、4、6、8、12、16 h取樣5 ml（同時補加等溫釋放介質5 ml），過0.45 μm微孔濾膜過濾，采用高效液相色譜法測定鹽酸環苯扎林的含量，計算累積釋放度。

2.4 鹽酸環苯扎林緩釋微丸包衣處方考察

以Surelease?水分散體為緩釋包衣液[9]，按“2.2”項下鹽酸環苯扎林緩釋微丸的制備方法進行操作。緩釋衣層包衣增質量分別控制在3%、5%、7%、10%，按“2.3”項下方法考察緩釋微丸的體外釋放度。結果顯示，隨著包衣增質量的增大，鹽酸環苯扎林釋放速率逐漸減慢；當包衣增質量為7%時，釋放曲線比較合理且釋藥完全，故選擇包衣增質量為7%。不同包衣增質量對藥物釋放的影響見圖2。

圖2 不同包衣增質量對藥物釋放的影響（n＝6）Fig 2 Effects of different coating weight on the drug release（n＝6）

2.5 鹽酸環苯扎林緩釋微丸包衣工藝優化

2.5.1 自變量、因變量與試驗設計 在鹽酸環苯扎林緩釋微丸包衣過程中發現，進風溫度、霧化壓力和供液速度3個參數對微丸的包衣時間、包衣效率和微丸粘連率影響較大。因此，本研究以進風溫度（X1，℃）、霧化壓力（X2，MPa）、供液速度（X3，ml/min）為自變量，以包衣時間（Y1，min）、包衣效率[Y2，包衣效率（%）＝（包衣后微丸質量－包衣前微丸質量）/噴入包衣材料質量×100%]和微丸粘連率[Y3，微丸粘連率（%）＝在16～24目篩范圍外的微丸質量/微丸總質量×100%]為因變量，采用Box-Behnken響應面法優化鹽酸環苯扎林緩釋微丸包衣工藝參數。自變量與水平見表1，Box-Behnken試驗設計與結果見表2。

表1 自變量與水平Tab 1 Independent variables and levels

表2 Box-Behnken試驗設計與結果Tab 2 Box-Behnken experimental design and results

2.5.2 數據處理與方差分析 采用Design Expert 8.0.1軟件對表2中的數據進行處理，以評價指標（因變量）分別對各因素（自變量）進行多元線性回歸和二次多元方程擬合，對二次多元方程中的各項系數進行F檢驗；繪制各因素（自變量）與評價指標（因變量）的等高線圖。二次多元方程的方差分析見表3，等高線圖見圖3、圖4、圖5。

表3 二次多元方程的方差分析結果Tab 3 Analysis results of variance for two multivariate

圖3 X1、X2、X3與Y1的等高線圖Fig 3 Contour plot of X1，X2，X3on Y1

圖4 X1、X2、X3與Y2的等高線圖Fig 4 Contour plot of X1，X2，X3on Y2

圖5 X1、X2、X3與Y3的等高線圖

Fig 5 Contour plot of X1，X2，X3on Y3

由方差分析結果與等高線圖可知，在設定的參數范圍內，霧化壓力和供液速度對包衣時間、包衣效率影響較大；進風溫度、霧化壓力和供液速度對微丸粘連率影響均較大；而進風溫度對包衣時間、包衣效率影響相對較小，甚至幾乎沒有影響。隨著霧化壓力的提高，包衣時間、包衣效率顯著降低；隨著供液速度的提高，包衣時間顯著降低，包衣效率呈先增加、后降低趨勢；隨著進風溫度、霧化壓力和供液速度的提高，微丸粘連率顯著降低。

2.5.3 優化工藝參數驗證 根據包衣時間最短、包衣效率最高、微丸粘連率最小為標準，由Design Expert 8.0.1軟件分析得出最優包衣工藝：進風溫度為55℃，霧化壓力為0.36 MPa，供液速度為12.5 ml/min。根據該工藝參數軟件給出了各評價指標的預測值：包衣時間為44.5 min，包衣效率為90.0%，微丸粘連率為2.9%。按最優包衣工藝參數重復包衣3批樣品進行驗證，實測值與預測值的測定結果見表4[表中相對誤差（%）＝（觀測值－預測值）/預測值×100%]。

表4 實測值與預測值的測定結果Tab 4 Predicted values and measured values

由表4可知，觀測值與預測值比較接近，相對誤差均小于10%，說明模型預測性良好。

2.6 與市售制劑的體外釋放度進行比較

參照《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》[10]規定，需對鹽酸環苯扎林緩釋微丸進行多介質釋放度對比研究，以評價自制的鹽酸環苯扎林緩釋微丸與市售制劑的差異。采用“2.3”項下體外釋放度測定方法，分別考察在4種釋放介質（pH 1.2鹽酸水溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液、水）中自制鹽酸環苯扎林緩釋微丸與市售制劑（AMRIX?）的釋放曲線，采用f2相似因子法[11-12]比較其相似性。自制制劑與市售制劑在不同介質中的釋放曲線相似性比較見表5。

表5 自制制劑與市售制劑在不同介質中的釋放曲線相似性比較Tab 5 The similarity comparison of release curves between prepared pellets and commercially available pellets in different mediums

由表5可見，在4種釋放介質中自制鹽酸環苯扎林緩釋微丸與市售制劑的f2均大于50，說明自制制劑與市售制劑在4種釋放介質中藥物釋放行為相似。

3 討論

Surelease?水分散體是卡樂康包衣技術有限公司開發的一個由乙基纖維素、增塑劑和穩定劑構成的完全配方的緩釋型水性包衣系統，藥物的釋放速率可以通過增加或者減少包衣增質量（衣膜厚度）來調節。Surelease?水分散體釋藥性能不受外界pH的影響，且能夠保證藥物釋放的可重現性。本研究參照原研制劑的處方采用Surelease?水分散體作為鹽酸環苯扎林緩釋微丸的緩釋包衣材料，并通過Box-Behnken響應面法優化鹽酸環苯扎林緩釋微丸包衣工藝中參數，最終制備的鹽酸環苯扎林緩釋微丸膠囊與參比制劑體外釋放一致性良好，有望應用于工業化生產。

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（編輯：鄒麗娟）

Preparation and in vitro Release Rate Study of Cyclobenzaprine Hydrochloride Sustained-release Pellets

YU Jia（Dept.of Pharmacy，the Second Hospital Affiliated to Dalian Medical University，Liaoning Dalian 116027，China）

OBJECTIVE：To prepare cyclobenzaprine hydrochloride extended-release pellets，and to investigate its release rate in vitro.METHODS：The core pellets were prepared by fluid bed coating technology，and sustained-release pellets were prepared using Surelease?aqueous dispersion as sustained-release coating film material.Box-Behnken response surface methodology was used to optimize inlet air temperature，atomization pressure and liquid feed rate using coating time，coating efficiency and pellets adhesion rate as dependent variables.The release rate of prepared pellets and commercially available pellets（AMRIX?）in different mediums（water，pH 1.2 hydrochloric acid solution，pH 4.5 acetate buffer solution，6.8 phosphate buffer solution）were compared by f2similarity factor.RESULTS：The weight gain of coating material was 7%；inlet air temperature was 55℃；atomization pressure was 0.36 MPa；liquid feed rate was 12.5 ml/min.The relative error of coating time[（47.1±2.1）min]，coating efficiency [（88.4±1.6）%]and pellets adhesion rate[（2.7±0.3）%]to corresponding predicted value（44.5 min，90.0%，2.9%）were 5.8%，1.8%，6.9%，respectively.The f2for prepared pellets and commercially available pellets in 4 kinds of medium were 77.7，85.9，83.5，84.6，respectively.CONCLUSIONS：Cyclobenzaprine hydrochloride sustained-release pellets have been prepared，and have good drug release in vitro.

Cyclobenzaprine hydrochloride；Sustained-release pellets；Release rate in vitro；Box-Behnken response surface methodology；Coating technology；Optimization

R943

A

1001-0408（2016）34-4855-04

2016-05-09

2016-06-13）

＊主管藥師。研究方向：醫院制劑。電話：0411-84671291-5338。E-mail：songlidr@163.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.34.32