益氣活血風(fēng)靜膠囊對(duì)麻醉犬腦血流量和腦血管阻力的影響Δ

張軍霞，林紅軍，張婷婷，陳 煒，李振國(guó)，周繼春（河南省食品藥品檢驗(yàn)所，鄭州 450000）

益氣活血風(fēng)靜膠囊對(duì)麻醉犬腦血流量和腦血管阻力的影響Δ

張軍霞＊，林紅軍，張婷婷，陳 煒，李振國(guó)，周繼春（河南省食品藥品檢驗(yàn)所，鄭州 450000）

目的：研究益氣活血風(fēng)靜膠囊對(duì)麻醉犬腦血流量（CBF）及腦血管阻力（CVR）的影響，為其臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)依據(jù)。方法：將18只Beagle犬隨機(jī)分為假手術(shù)組（純化水）、陽性對(duì)照中藥組[腦心通膠囊，0.3 g（生藥）/kg]、陽性對(duì)照化學(xué)藥組（尼莫地平，7×10－3g/kg）和益氣活血風(fēng)靜膠囊高、中、低劑量組[2.52、1.26、0.63 g（生藥）/kg）]，每組3只。犬麻醉后十二指腸給藥，分別于給藥前和給藥30、60、120 min后測(cè)定血壓、心率和CBF、CVR的變化。結(jié)果：給藥30、60、120 min后，陽性對(duì)照中藥組、陽性對(duì)照化學(xué)藥組和益氣活血風(fēng)靜膠囊高劑量組犬CBF明顯增加，陽性對(duì)照化學(xué)藥組和益氣活血風(fēng)靜膠囊高劑量組犬CVR明顯減小，陽性對(duì)照化學(xué)藥組犬血壓和心率降低，與假手術(shù)組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論：益氣活血風(fēng)靜膠囊可減小麻醉犬CVR、增加CBF，對(duì)血壓及心率無影響。

益氣活血風(fēng)靜膠囊；腦血流量；腦血管阻力；Beagle犬

益氣活血風(fēng)靜膠囊是根據(jù)益氣活血法中醫(yī)理論，分別提取人參和牡丹皮中具有抗腦缺血活性的人參總皂苷、丹皮酚和牡丹皮總苷，混合制備而成的自主研發(fā)的中藥五類新藥[1]。人參中富含多種不同極性的皂苷類成分，是人參抗腦缺血損傷的主要有效成分，能減少短暫性腦缺血神經(jīng)元死亡、促進(jìn)脊髓神經(jīng)元存活和生長(zhǎng)，起到保護(hù)再灌注損傷的作用[2-4]；丹皮酚具有抗炎、抗心肌細(xì)胞及腦細(xì)胞缺血缺氧損傷及缺血再灌注損傷等作用[5-6]；芍藥苷具有抗血栓、抗心肌或腦組織損傷、保護(hù)神經(jīng)元等作用[7-8]。前期研究表明，益氣活血風(fēng)靜膠囊具有抗腦水腫、縮小腦梗死面積、抗血栓和改善血流變等抗腦缺血活性，且其作用強(qiáng)度優(yōu)于人參總皂苷、丹皮酚和牡丹皮總苷單獨(dú)使用。本研究通過考察益氣活血風(fēng)靜膠囊對(duì)麻醉Beagle犬腦血流量（Cerebral blood flow，CBF）及腦血管阻力（Cerebral vascular resistance，CVR）的影響，探究其對(duì)缺血性腦血管病方面的作用，為其臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

CP225D電子天平（德國(guó)Sartorius公司）；PowerLab/8SP多導(dǎo)生理儀（澳大利亞埃德公司）。

1.2 藥品與試劑

益氣活血風(fēng)靜膠囊（河南中醫(yī)學(xué)院一附院制劑室自制，批號(hào)：101022，規(guī)格：每克內(nèi)容物相當(dāng)于4.2 g生藥）；腦心通膠囊（陜西步長(zhǎng)制藥有限公司，批號(hào)：1112121，規(guī)格：0.4 g/粒）；尼莫地平片（山東新華制藥股份有限公司，批號(hào)：1111142，規(guī)格：20 mg/片）；戊巴比妥鈉（上海化學(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站試劑廠，Serva進(jìn)口分裝，批號(hào)：80-06-03）；苯巴比妥鈉（凡科維化學(xué)公司，批號(hào)：20120210）；肝素鈉注射液（天津藥業(yè)焦作有限公司，批號(hào)：12020741，規(guī)格：2 ml∶12 500 u）；0.9%氯化鈉注射液（河南科倫藥業(yè)有限公司）；水為自制純化水。

1.3 動(dòng)物

健康成年Beagle犬18只，♂，普通級(jí)，體質(zhì)量8.4～9.5 kg，購(gòu)自上海新岡實(shí)驗(yàn)動(dòng)物場(chǎng)[生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滬）2007-0009，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：2007000900030]。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

將18只犬隨機(jī)分為6組，每組3只，分別為假手術(shù)組（給予純化水）、陽性對(duì)照中藥組[腦心通膠囊，0.3 g（生藥）/kg，為臨床等效劑量的2.2倍]、陽性對(duì)照化學(xué)藥組（尼莫地平片，7 mg/kg，為臨床等效劑量的2.0倍）和益氣活血風(fēng)靜膠囊高、中、低劑量組[2.52、1.26、0.63 g（生藥）/kg，為臨床擬用等效劑量的4.9、2.4、1.2倍]。

犬禁食不禁水14 h后，ip 3%戊巴比妥鈉溶液15 mg/kg（0.5 ml/kg）和10%苯巴比妥巴鈉溶液100 mg/kg（1 ml/kg）聯(lián)合麻醉，仰位固定。將犬頸部、劍突下3 cm沿腹中線、右側(cè)腹股溝處剪毛，沿頸部正中線切口，分離出左側(cè)頸總動(dòng)脈，并結(jié)扎其同側(cè)椎動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈。將血流探頭掛在頸總動(dòng)脈上，測(cè)定的頸總動(dòng)脈流量便代表了CBF。自腹中線切口，打開腹腔，找到胃幽門下端的十二指腸，選一腸系膜無血管區(qū)以止血鉗穿過固定一段十二指腸，以針進(jìn)行一荷包縫線，在荷包縫線中心部以眼科剪刀剪一小口，將清洗干凈的導(dǎo)尿管插入十二指腸，收緊荷包縫線，將導(dǎo)尿管固定，引出導(dǎo)尿管。周圍組織徹底止血，逐層縫合腹壁，以動(dòng)脈夾夾住導(dǎo)尿管游離端。分離股動(dòng)脈，連接血壓探頭觀察股動(dòng)脈平均壓。四肢皮下插入針狀電極記錄標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)碾妶D[9-11]。動(dòng)物手術(shù)完畢后穩(wěn)定30 min，待頸總動(dòng)脈流量、血壓、心率穩(wěn)定后，記錄給藥前血壓和心率指標(biāo)作為給藥前對(duì)照。各組犬進(jìn)行十二指腸給藥，給藥容積均為5.0 ml/kg。

2.2 指標(biāo)檢測(cè)

實(shí)時(shí)記錄各組犬給藥后30、60、120 min的血壓、心率。然后將犬處死，開顱取出全腦稱質(zhì)量，將全腦質(zhì)量除以2，得一側(cè)腦質(zhì)量，按公式分別計(jì)算給藥30、60、120 min后CBF和CVR：CBF[ml（/100 g·min）]＝頸總動(dòng)脈血流（ml/min）×100 g/一側(cè)腦質(zhì)量（g）；CVR[mm Hg·100 g·min/ml]＝血壓（mm Hg）/CBF [ml（/100 g·min）]（1 mm Hg＝0.133 3 kPa）。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 益氣活血風(fēng)靜膠囊對(duì)麻醉犬血壓和心率的影響

與給藥前比較，僅陽性對(duì)照化學(xué)藥組犬血壓和心率顯著降低（P＜0.05）；給藥后，僅陽性對(duì)照化學(xué)藥組犬血壓和心率較假手術(shù)組明顯降低（P＜0.05），結(jié)果見表1、表2。

3.2 益氣活血風(fēng)靜膠囊對(duì)麻醉犬CBF的影響

與給藥前比較，假手術(shù)組、陽性對(duì)照中藥組和益氣活血風(fēng)靜膠囊中、低劑量組犬在給藥后30～120 min內(nèi)CBF略有波動(dòng)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；陽性對(duì)照化學(xué)藥組和益氣活血風(fēng)靜膠囊高劑量組犬給藥30、60、120 min后CBF均顯著增加（P＜0.05或P＜0.01）。與假手術(shù)組比較，陽性對(duì)照中藥組、陽性對(duì)照化學(xué)藥組和益氣活血風(fēng)靜膠囊高劑量組犬在給藥后30～120 min內(nèi)CBF明顯增加（P＜0.05或P＜0.01）。CBF測(cè)定結(jié)果見表3。

表1 各組麻醉犬血壓的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3，mm Hg）Tab 1 Results of blood pressure determination of anesthetized dogs in each grou（p±s，n＝3，mm Hg）

表1 各組麻醉犬血壓的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3，mm Hg）Tab 1 Results of blood pressure determination of anesthetized dogs in each grou（p±s，n＝3，mm Hg）

注：與給藥前比較，＊P＜0.05；與假手術(shù)組比較，#P＜0.05Note：vs.before medication，＊P＜0.05；vs.sham operation group，#P＜0.05

組別假手術(shù)組陽性對(duì)照中藥組陽性對(duì)照化學(xué)藥組益氣活血風(fēng)靜膠囊高劑量組益氣活血風(fēng)靜膠囊中劑量組益氣活血風(fēng)靜膠囊低劑量組劑量0.3 g（生藥）/kg 7×10－3g/kg 2.52 g（生藥）/kg 1.26 g（生藥）/kg 0.63 g（生藥）/kg給藥前122.60±1.00 126.56±21.83 104.81±16.10 106.50±21.78 137.47±30.35 130.22±8.27給藥后30 min 124.90±2.33 112.42±26.96 77.59±25.37＊#110.16±20.38 134.96±28.60 126.27±6.03 60 min 118.93±4.54 118.98±25.61 82.89±34.94＊#112.82±23.44 132.53±22.18 126.36±9.90 120 min 120.19±4.24 116.64±19.16 72.35±16.77＊#114.83±15.66 133.48±15.76 120.71±8.32

表2 各組麻醉犬心率的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3，次/min）Tab 2 Results of heart rate determination of anesthetized dogs in each grou（p±s，n＝3，times/min）

表2 各組麻醉犬心率的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3，次/min）Tab 2 Results of heart rate determination of anesthetized dogs in each grou（p±s，n＝3，times/min）

注：與給藥前比較，＊P＜0.05；與假手術(shù)組比較，#P＜0.05Note：vs.before medication，＊P＜0.05；vs.sham operation group，#P＜0.05

組別假手術(shù)組陽性對(duì)照中藥組陽性對(duì)照化學(xué)藥組益氣活血風(fēng)靜膠囊高劑量組益氣活血風(fēng)靜膠囊中劑量組益氣活血風(fēng)靜膠囊低劑量組劑量0.3 g（生藥）/kg 7×10－3g/kg 2.52 g（生藥）/kg 1.26 g（生藥）/kg 0.63 g（生藥）/kg給藥前160±9 166±31 158±14 143±10 160±25 174±16給藥后30 min 159±29 169±24 140±21＊#140±7 156±24 178±10 60 min 159±29 170±24 140±21＊#144±12 156±24 177±8 120 min 154±30 178±12 144±18＊#144±12 156±24 178±9

表3 各組麻醉犬CBF的測(cè)定結(jié)果[±s，n＝3，m（l/100 g·min）]Tab 3 Results of CBF determination of anesthetized dogs in each group[±s，n＝3，m（l/100 g·min）]

表3 各組麻醉犬CBF的測(cè)定結(jié)果[±s，n＝3，m（l/100 g·min）]Tab 3 Results of CBF determination of anesthetized dogs in each group[±s，n＝3，m（l/100 g·min）]

注：與給藥前比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與假手術(shù)組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.before medication，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.sham operation group，#P＜0.05，##P＜0.01

組別假手術(shù)組陽性對(duì)照中藥組陽性對(duì)照化學(xué)藥組益氣活血風(fēng)靜膠囊高劑量組益氣活血風(fēng)靜膠囊中劑量組益氣活血風(fēng)靜膠囊低劑量組劑量0.3 g（生藥）/kg 7×10－3g/kg 2.52 g（生藥）/kg 1.26 g（生藥）/kg 0.63 g（生藥）/kg給藥前166.00±22.32 157.67±30.29 167.88±41.83 154.13±40.18 159.17±22.36 161.71±38.30給藥后30 min 168.25±18.00 182.93±40.14#324.16±46.47＊＊##199.39±23.79＊##165.42±25.58 173.08±30.85 60 min 172.55±12.05 178.58±37.33#331.58±51.00＊＊##194.52±25.43＊＊##163.93±28.69 170.93±33.34 120 min 162.92±6.17 166.52±25.42#328.61±56.97＊＊##192.70±11.64＊＊##158.74±24.96 166.99±11.74

3.3 益氣活血風(fēng)靜膠囊對(duì)麻醉犬CVR的影響

與給藥前比較，假手術(shù)組、陽性對(duì)照中藥組和腦心通膠囊中、低劑量組犬在給藥后30～120 min內(nèi)CVR略有波動(dòng)，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與假手術(shù)組比較，陽性對(duì)照化學(xué)藥組和益氣活血風(fēng)靜膠囊高劑量組犬在給藥后30～120 min內(nèi)CVR明顯減小（P＜0.01）。CVR測(cè)定結(jié)果見表4。

表4 各組麻醉犬CVR的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3，mm Hg·100 g·min/ml）Tab 4 Results of CVR determination of anesthetized dogs in each grou（p±s，n＝3，mm Hg·100 g·min/ml）

表4 各組麻醉犬CVR的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3，mm Hg·100 g·min/ml）Tab 4 Results of CVR determination of anesthetized dogs in each grou（p±s，n＝3，mm Hg·100 g·min/ml）

注：與給藥前比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與假手術(shù)組比較，##P＜0.01Note：vs.before medication，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.sham operation group，##P＜0.01

組別假手術(shù)組陽性對(duì)照中藥組陽性對(duì)照化學(xué)藥組益氣活血風(fēng)靜膠囊高劑量組益氣活血風(fēng)靜膠囊中劑量組益氣活血風(fēng)靜膠囊低劑量組劑量0.3 g（生藥）/kg 7×10－3g/kg 2.52 g（生藥）/kg 1.26 g（生藥）/kg 0.63 g（生藥）/kg給藥前0.67±0.07 0.89±0.29 0.68±0.39 0.97±0.20 0.93±0.24 0.78±0.19給藥后30 min 0.70±0.05 0.83±0.37 0.26±0.12＊##0.49±0.04＊##0.86±0.21 0.81±0.17 60 min 0.69±0.02 0.91±0.39 0.27±0.14＊##0.38±0.07＊＊##0.85±0.16 0.75±0.12 120 min 0.74±0.05 1.04±0.48 0.26±0.17＊##0.42±0.08＊##0.87±0.16 0.72±0.03

4 討論

腦缺血性疾病對(duì)人類健康和生命造成很大威脅，但到目前為止，對(duì)該病的防治仍未取得重大突破，尋找防治該病的藥物受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的極大重視。腦缺血后病理生理的改變有諸多因素參與，如能量代謝耗竭、興奮性氨基酸毒性、細(xì)胞內(nèi)鈣（Ca）超載、毒性氧自由基產(chǎn)生、酸中毒、花生四烯酸產(chǎn)生等[12-13]。尼莫地平是一種Ca2+通道阻滯藥，能通過有效地阻止Ca2+進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，抑制平滑肌收縮，以解除血管痙攣。其對(duì)腦動(dòng)脈的作用最強(qiáng)，能夠擴(kuò)張腦血管，增加CBF，顯著減少血管痙攣引起的缺血性腦損傷，故在本研究中以其為陽性對(duì)照化學(xué)藥。腦心通膠囊主要通過改善“血瘀”，降低血漿黏度、還原黏度、血小板黏附率而抑制血栓形成、延長(zhǎng)凝血時(shí)間，以增加CBF并減小CVR，同時(shí)對(duì)心臟功能也有明顯改善，且無明確的不良反應(yīng)，故在本研究中以其為陽性對(duì)照中藥。本研究選用腦心康膠囊和尼莫地平片兩個(gè)陽性對(duì)照藥物，旨在進(jìn)行益氣活血風(fēng)靜膠囊與相同藥理作用、相同劑型和相同給藥途徑的已上市的藥品進(jìn)行比較，明確受試制劑的藥效及劑量。

本研究結(jié)果表明，益氣活血風(fēng)靜膠囊在增加CBF和減小CVR方面優(yōu)于腦心通膠囊，其在2.52 g（生藥）/kg的劑量下能顯著增加犬CBF和減小犬CVR，起效時(shí)間為給藥后30 min，并對(duì)血壓和心率均無顯著影響。結(jié)合前期研究結(jié)果可知，益氣活血風(fēng)靜膠囊能通過清除自由基以及抑制病理狀態(tài)下一氧化氮過度生成來改善大鼠腦組織內(nèi)神經(jīng)元變性、壞死，減輕腦組織因缺血而造成的損傷，這提示該制劑可以用于缺血性腦血管疾病的治療。但為了獲得最佳臨床藥效，益氣活血靜風(fēng)膠囊中人參皂苷及牡丹皮最佳配伍比例尚需進(jìn)行進(jìn)一步藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)篩選，各有效成分產(chǎn)生藥效的作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究。

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Effects of Yiqi Huoxue Fengjing Capsules on Cerebral Blood Flow and Cerebral Vascular Resistance in Anesthetized Dogs

ZHANG Junxia，LIN Hongjun，ZHANG Tingting，CHEN Wei，LI Zhenguo，ZHOU Jichun（Henan Provincial Institute of Food and Drug Control，Zhengzhou 450000，China）

OBJECTIVE：To observe the effects of Yiqi huoxue fengjing capsules on the cerebral blood flow（CBF）and cerebral vascular resistance（CVR）in anesthetized dogs.METHODS：18 Beagle dogs were randomly divided into sham operation group（purified water），positive control TCM group[Naoxintong capsules，0.3 g（crude drug）/kg]，positive control pharmaceutical chemicals group（nimodipine，7×10－3g/kg）and Yiqi huoxue fengjing capsules low-dose，medium-dose and high-dose groups [0.63，1.26，2.52 g（crude drug）/kg）]，with 3 dogs in each group.They were given relevant medicine via duodenum.CBF，CVR，blood pressure and heart rate of the dogs were measured before medication and 30，60，120 min after medication.RESULTS：30，60，120 min after medication，CBF increased in positive control TCM group，positive control pharmaceutical chemicals group and Yiqi huoxue fengjing capsule high-dose group，while CVR decreased significantly in positive control pharmaceutical chemicals group and Yiqi huoxue fengjing capsules high-dose group，blood pressure and heart rate of positive control pharmaceutical chemicals group decreased，with statistical significance compared to sham operation group（P＜0.05 or P＜0.01）.CONCLUSIONS：Yiqi huoxue fengjing capsules can increase CBF and decrease CVR，and they have no effect on blood pressure and heart rate in anesthetized dogs.

Yiqi huoxue fengjing capsules；Cerebral blood flow；Cerebral vascular resistance；Beagle dog

R285

A

1001-0408（2016）34-4774-03

2016-05-11

2016-08-06）

（編輯：林 靜）

河南省科技創(chuàng)新人才計(jì)劃項(xiàng)目（No.144200510028）

＊副主任藥師，碩士。研究方向：創(chuàng)新藥藥理、藥效、毒理評(píng)價(jià)。電話：0371-63388238。E-mail：zjx312@163.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.34.07