優化鴨病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)的生產工藝參數

李淑紅,葛俊偉

(東北農業大學動物醫學學院，黑龍江 哈爾濱 150030)

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優化鴨病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)的生產工藝參數

李淑紅,葛俊偉

(東北農業大學動物醫學學院，黑龍江 哈爾濱 150030)

鴨肝炎病毒屬于小核糖核酸病毒，分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3個血清型。目前，我國只發現鴨病毒性肝炎病毒I型。鴨病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)可用于預防I型鴨肝炎。根據制苗用毒液的制備工藝環節中，不同的雞胚接種日齡、毒種不同的稀釋倍數對雞胚死亡的高峰時間、每胚的平均收獲單產結果都不同。目前存在雞胚的死亡時間靠前，收率低等問題，為了得到更穩定的產品質量，還需要進一步優化疫苗的生產工藝參數。

鴨；病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)；雞胚接種日齡；毒種稀釋倍數

1 材料

毒種：鴨病毒性肝炎雞胚化弱毒株(CH60株)，由哈藥集團生物疫苗有限公司提供，符合毒種標準要求。雞胚：選用哈藥集團生物疫苗有限公司SPF雞場提供的SPF種蛋，分別孵化成9日齡、10日齡和11日齡的雞胚。0.85%生理鹽水：由哈藥集團生物疫苗有限公司配制、滅菌。

2 方法

分組:將雞胚接種日齡和毒種稀釋倍數交叉做試驗。雞胚按孵化日齡分為9日齡、10日齡、11日齡。每個日齡的SPF雞胚450枚。9日齡、10日齡、11日齡雞胚均來源于同一批次SPF種蛋。毒種稀釋倍數分別為50倍、100倍、5000倍。

接種:將鴨病毒性肝炎雞胚化弱毒株(CH60株)用0.85%滅菌生理鹽水分別做50倍、100倍、5000倍稀釋，分別接種9日齡、10日齡、11日齡SPF雞胚，經絨毛尿囊腔接種0.2mL/胚。先用75%的消毒酒精噴灑于蛋殼氣室部位進行消毒，作用30s，然后用蛋錐在氣室正上方中間部位打孔，接種后封蠟，放37℃繼續孵育，不必翻蛋。

孵育和觀察：接種24h后，每6h照蛋1次，直到96h。記錄每一時間段的死胚數，取24～96h死亡的雞胚，置2～8℃冷卻。

收獲：將冷卻4～24h的雞胚，用無菌手術分別收取絨毛尿囊液及羊水、胎兒、絨毛尿囊膜，每若干個混為一組，置于滅菌瓶中。每組分別取樣進行無菌檢驗，并測定收獲雞胚的病毒含量。

通過觀察不同雞胚接種日齡和毒種稀釋倍數對雞胚死亡高峰時段的影響以及每胚收獲單產的影響，來選擇最適合的雞胚接種日齡和毒種稀釋倍數。

3 結果與分析

表1 不同日齡和不同稀釋倍數對雞胚影響的測定結果

續表：

試驗次數組別日齡稀釋倍數接種數量(枚)死亡高峰時段(h)胚收獲單產(mL)病毒含量(雞胚)395015030～424.037.0A105015030～484.117.17115015036～544.186.5910015030～483.986.83B1010015042～544.397.01110015048～544.556.839500015036～484.227.0C10500015048～665.327.011500015054～785.657.17

由表1可以看出將鴨病毒性肝炎雞胚化弱毒株(CH60株)做50倍稀釋分別接種9日齡、10日齡、11日齡SPF雞胚時，對雞胚死亡高峰時段、胚收獲單產的影響差異不大。

將鴨病毒性肝炎雞胚化弱毒株(CH60株)做100倍稀釋分別接種9日齡、10日齡、11日齡SPF雞胚時，10日齡、11日齡較9日齡在雞胚死亡高峰時段上推后6～12h，10日齡接種較9日齡接種平均單產提高9.64%；11日齡接種較9日齡接種平均單產提高13.45%。

將鴨病毒性肝炎雞胚化弱毒株(CH60株)做5000倍稀釋分別接種9日齡、10日齡、11日齡SPF雞胚時，10日齡、11日齡較9日齡在雞胚死亡高峰時段上推后12～18h，10日齡接種較9日齡接種平均單產提高24.27%；10日齡接種較9日齡接種平均單產提高35.68%。

4 討論

本次優化鴨病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)生產工藝參數試驗，意在尋找鴨病毒性肝炎病毒在雞胚繁殖過程中，在確保半成品病毒含量達到規程標準要求的前提下提高收獲率，通過選擇不同雞胚接種日齡與毒種稀釋倍數的交叉試驗比較，將鴨病毒性肝炎雞胚化弱毒株(CH60株)進行5000倍稀釋接種11日齡雞胚，雞胚死亡高峰向后推遲，收獲單產提高。毒種稀釋倍數較小時，無論雞胚日齡大小，因為單位體積內的病毒含量大，對雞胚致死的差異度大，放大毒種稀釋倍數，接種不同日齡雞胚，結果差異顯著。

2016-10-28

李淑紅(1979-),女,遼寧康平人,本科,獸醫師，主要從事獸用生物制品的生產工作。 通訊作者：葛俊偉(1977-),男,河南新鄉人,博士,副教授,碩士生導師，研究領域：預防獸醫學。

10.19369/j.cnki.2095-9737.2016.12.006

S858.32

B

2095-9737(2016)12-0011-02