高效液相色譜法測定對乙酰氨基酚口服溶液中苯甲酸鈉含量

李 玲，陳乃江，姜 燕

(江蘇省連云港市藥品檢驗所，江蘇 連云港 222006)

高效液相色譜法測定對乙酰氨基酚口服溶液中苯甲酸鈉含量

李 玲，陳乃江，姜 燕

(江蘇省連云港市藥品檢驗所，江蘇 連云港 222006)

目的 建立測定對乙酰氨基酚口服溶液中防腐劑苯甲酸鈉含量的高效液相色譜法。方法 色譜柱為Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流動相為乙腈－0.05 mol／L乙酸銨（15∶85），流速為1.0 mL／min，檢測波長為230 nm，柱溫為30℃，進樣量為20 L。結果 苯甲酸鈉質量濃度在10.04～100.4 g／mL范圍內與峰面積線性關系良好(r＝0.999 9)，平均回收率為99.83%，RSD為0.99%（n＝9），苯甲酸鈉檢測限為1.3 ng。結論該方法適用于對乙酰氨基酚口服溶液中苯甲酸鈉的質量控制，可為該品種標準的提升提供參考。

高效液相色譜法；對乙酰氨基酚口服溶液；苯甲酸鈉；防腐劑；含量測定

對乙酰氨基酚是臨床使用極其廣泛的解熱鎮痛藥[1]，屬于乙酰苯胺類藥物。對乙酰氨基酚口服溶液為液體制劑，在液體制劑的制備過程中很難完全避免微生物污染，為確保產品的安全性，會添加一定量的防腐劑，以達到有效的防腐目的[2]。苯甲酸及其鈉鹽由于價格低廉及抑菌范圍廣，目前在國內仍作為主要防腐劑添加到口服液類藥品、食品中，但過量攝入防腐劑對人體有一定毒性。苯甲酸及其鈉鹽的使用頗受爭議，在有些國家已經限制或禁止使用[3]。我國尚未對口服液類藥品中防腐劑的含量測定方法作出規定，本研究參考有關防腐劑檢驗標準及文獻[4－6]，采用高效液相色譜法對對乙酰氨基酚口服溶液中的苯甲酸鈉含量進行測定，以便控制防腐劑使用量，保證用藥的安全性，為提高產品質量標準提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters 2695型高效液相色譜儀（Waters 2996 DAD檢測器，Empower色譜工作站，Waters公司）；Sartorius BP211D型電子分析天平(十萬分之一)。

1.2 試藥

苯甲酸鈉對照品（批號為 100433－200301，含量100%），購自中國食品藥品檢定研究院；對乙酰氨基酚口服溶液和滴劑（市售）；乙腈為色譜純，乙酸銨為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：PhenomenexGeminiC18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流動相：乙腈－0.05 mol／L乙酸銨（15∶85）；流速：1.0 mL／min；檢測波長：230 nm；柱溫：30℃；進樣量：20 μL。理論板數按苯甲酸鈉峰計算應不低于4 000。

2.2 溶液制備

精密稱取苯甲酸鈉對照品50.21 mg，置100 mL容量瓶中，加水超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液5 mL置50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，即得對照品溶液。

精密量取本品2 mL置100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：分別取2.2項下對照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果苯甲酸鈉與對乙酰氨基酚及其他雜質均能完全分開，苯甲酸鈉的保留時間約為5.5 min，表明該方法專屬性良好。色譜圖見圖1。

線性關系考察：精密量取上述對照品貯備液1.0，2.0，4.0，5.0，6.0，8.0，10.0 mL，分別置50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，各精密吸取20 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標、對照品質量濃度（X，μg／mL）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程 Y＝56 533 X＋14 515，r＝0.999 9(n＝7)。結果表明，苯甲酸鈉質量濃度在10.04～100.4 μg／mL范圍內與峰面積線性關系良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液（批號為AAF4519），分別于0，2，4，6，8，12 h時進樣，記錄峰面積。結果的 RSD為 0.8%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內穩定。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗：取同一對照品溶液，連續進樣6次，測定苯甲酸鈉峰的面積。結果的 RSD＝0.4%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一批樣品（批號為 AAF4519），依法平行制備供試品溶液6份，分別進樣測定。結果苯甲酸鈉含量平均值為0.197%，RSD為0.5%（n＝6），表明方法的重復性良好。

加樣回收試驗：取9份已測知含量的樣品（批號為AAG0388），精密量取1 mL，分別置100 mL容量瓶中，平均分成3組，分別精密加入對照品貯備液3，4，5 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。精密吸取20 μL，注入液相色譜儀，計算回收率。結果見表1。

表1 苯甲酸鈉加樣回收試驗結果（n＝9）

檢測限和定量限確定：精密量取苯甲酸鈉對照品溶液適量，加水逐步稀釋進樣，根據信噪比 S／N＝3和S／N＝10分別確定檢測限和定量限。結果苯甲酸鈉的檢測限和定量限分別為1.3 ng和4.0 ng。

2.4 樣品含量測定

取對乙酰氨基酚口服溶液和滴劑，依法制備供試品溶液，在擬訂色譜條件下，精密吸取20 μL注入高效液相色譜儀，測定，記錄峰面積，按外標法計算含量。結果見表2。

表2 苯甲酸鈉含量測定結果（n＝5）

3 討論

3.1 流動相選擇

考察了不同的流動相體系對柱效和不同成分及雜質分離度的影響，結果表明，乙酸銨優于純水相、乙腈－乙酸銨系統優于甲醇－乙酸銨系統；同時考察了流動相中不同濃度的乙酸銨對柱效的影響，結果在乙腈－0.05 mol／L乙酸銨（15∶85）條件下，各色譜峰之間的分離度較好，且基線平穩，峰形良好。

3.2 提取溶劑選擇

考察了水和流動相作為提取溶劑，結果2種溶劑均能達到充分提取的效果。考慮到操作簡便，因此選擇水作為提取溶劑。

3.3 應用價值

在同一生產企業內，防腐劑苯甲酸鈉添加的量基本一致，但不同企業間添加的量有較大差異性。苯甲酸鈉廣泛應用于口服液體制劑中，但對人體有一定毒性[3]，本試驗建立的苯甲酸鈉含量檢測方法可對口服液體制劑的質量標準提高提供參考。

[1]劉文英.藥物分析[M].北京：人民衛生出版社，2004：153.

[2]崔福德.藥劑學[M].北京：人民衛生出版社，2003：19.

[3]蘭金蘋，寧麗峰，張益文，等.高效液相色譜法測定口服液類藥品中苯甲酸的含量[J].中國衛生檢驗雜志，2009，19(1)：4－6.

[4]黎艷剛，段 峰，郭麗蓉，等.HPLC測定布洛芬口服溶液中苯甲酸鈉、安賽蜜含量[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19(8)：69－71.

[5]楊武軍，劉雪峰.布洛芬混懸液中苯甲酸測定方法的建立[J].中國藥師，2016，19(2)：382－384.

[6]李小安，吳少平，劉海靜，等.鹽酸氨溴索口服溶液中苯甲酸鈉的含量測定方法學研究[J].安徽醫藥，2011，15(1)：40－42.

Content Determination of Sodium Benzoate in Acetaminophen Oral Solution by HPLC

Li Ling,Chen Naijiang,Jiang Yan
(Lianyungang Institute for Drug Control,Lianyungang,Jiangsu,China 222006)

Objective To determine the content of sodium benzoate in acetaminophen oral solution by HPLC.Methods The Phenomenex Gemini C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm)was used,and the mobile phase was acetonitrile－0.05 mol／L ammonium acetate(15∶85).The flow rate was 1.0 mL／min and the detection wavelength was set at 230 nm.The column temperature was 30℃ and the injection volume was 20 μL.Results The linear range of sodium benzoate was 10.04－100.4 μg／mL(r＝0.999 9),the average recovery was 99.83% and RSD was 0.99%(n＝9),the limit of detection was 1.3 ng.Conclusion The method is applicable to the quality control of sodium benzoate in acetaminophen oral solution,which can provide reference for the standard improvement.

HPLC;acetaminophen oral solution;sodium benzoate;content determination;preservatives assay

R927.2；R971＋.1

A

1006－4931(2016)21－0063－03

2016－06－11)