高效液相色譜法測定巴戟口服液中淫羊藿苷含量

潘 偉，趙 悅，王小柳

（重慶市永川食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 402160）

高效液相色譜法測定巴戟口服液中淫羊藿苷含量

潘 偉，趙 悅，王小柳

（重慶市永川食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 402160）

目的 建立測定巴戟口服液中淫羊藿苷含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱為 Syncronis C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流動(dòng)相為乙腈－水（30∶70），體積流量為1.0 mL／min，柱溫為30℃，檢測波長為270 nm。結(jié)果 淫羊藿苷進(jìn)樣量在0.010 2～0.101 5 g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為99.38%，RSD＝1.51%（n＝6）。結(jié)論 該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可有效控制巴戟口服液的質(zhì)量。

巴戟口服液；高效液相色譜法；淫羊藿苷；含量測定

巴戟口服液收載于《衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十四冊)》，由巴戟天、何首烏、杜仲、肉蓯蓉、續(xù)斷、仙茅、金櫻子、淫羊藿（葉）、覆盆子、當(dāng)歸、黨參、熟地黃、枸杞子、甘草、黃芪及狗脊組方，有補(bǔ)腎壯腰、固精止遺、調(diào)經(jīng)等功效[1－2]。淫羊藿為方中重要有效成分。淫羊藿在我國有悠久的藥用歷史，來源于小檗科Berberidaceae淫羊藿屬 Epimedium L.植物，具有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的功效[3]。現(xiàn)代藥理研究表明，淫羊藿提取物具有廣泛的生理活性[4]，淫羊藿苷就是其中一種重要有效成分。目前，李麗娜等[5]研究了該制劑中二苯乙烯苷（何首烏有效成分）的含量。采用高效液相色譜法測定巴戟口服液中淫羊藿苷的含量，為進(jìn)一步提高巴戟口服液的質(zhì)量控制水平提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀及其化學(xué)工作站（美國Agilent公司，包括四元梯度泵、DAD檢測器、自動(dòng)進(jìn)樣器）；XP205型、AL204型電子天平（Mettler Toledo公司）；SB－5200DTDN型超聲清洗器；UP超純水機(jī)。

1.2 試藥

甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純。淫羊藿苷對照品（批號為110737－200415）購自中國食品藥品檢定研究院。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Syncronis C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈－水（30∶70）；檢測波長：270 nm；流速：1.0 mL／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。在此條件下，淫羊藿苷理論板數(shù)為12 394，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

稱取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并制成100.00 μg／mL的對照品貯備液，稀釋10倍，即得對照品溶液。精密量取供試品（重慶希爾安藥業(yè)有限公司，批號為160302）1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按處方工藝稱取不含淫羊藿成分，依法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取對照品溶液1，2，3，4，5，10 μL，注入色譜儀，記錄峰面積。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)、淫羊藿苷進(jìn)樣量（C）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A＝2 247.4 C＋0.409 8，r＝1.000 0（n＝6）。結(jié)果表明，淫羊藿苷進(jìn)樣量在0.010 2～0.101 5 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取同一對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為0.60%（n＝6），表明儀器精密性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并測定含量。結(jié)果測得巴戟口服液中淫羊藿苷含量分別為20.04，20.52，20.37，19.86，20.17，19.77μg／mL，平均20.12 μg／mL，RSD為 1.43%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，室溫放置12 h，每隔2 h進(jìn)樣10 mL，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為1.00%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取已知含量的同一批樣品（批號為160302）1 mL，共6份，分別加入淫羊藿苷對照品適量，混勻，依法制備供試品溶液并測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 淫羊藿苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.4 樣品含量均勻度測定

隨機(jī)抽取同一批（批號為160302）巴戟口服液10支，每支精密量取1 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，照2.1項(xiàng)下條件進(jìn)樣測定，讀取峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表2。

2.5 樣品含量測定

取對照品溶液和各批供試品溶液，各進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號為160302，160303，160401的樣品中，淫羊藿苷含量分別為20.12，20.08，20.68 μg／mL。

表2 樣品含量均勻度測定結(jié)果

3 討論

查閱文獻(xiàn)[6－7]及結(jié)合預(yù)試驗(yàn)，最終選取乙腈－水（30∶70）作為流動(dòng)相，柱溫為 30℃洗脫。在該體系下，淫羊藿苷色譜峰峰形良好，對稱性高，背景干擾小。

由表2可見，同一批藥品的含量差異不大，表明該制劑生產(chǎn)工藝較穩(wěn)定。同時(shí)，從3批含量測定結(jié)果來看，不同批號的樣品含量差異也不大，表明該制劑藥材品質(zhì)較為穩(wěn)定。

2015年版《中國藥典(一部)》[3]淫羊藿藥材項(xiàng)下規(guī)定，淫羊藿苷的含量不得少于0.60%，按照處方折算理論值，本品含淫羊藿苷應(yīng)為60 μg／mL，結(jié)合3批樣品測定結(jié)果，實(shí)際淫羊藿苷的測得量約為20 μg／mL，這可能與提取工藝有關(guān)。故該結(jié)果可為巴戟口服液中淫羊藿苷限度的擬訂提供依據(jù)。

中醫(yī)認(rèn)為，淫羊藿具有壯腎陽和補(bǔ)腎陰的功效[8]，可廣泛應(yīng)用于臨床，但與含量相關(guān)。本試驗(yàn)所建立的方法準(zhǔn)確、快速、高效，可為該藥的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

[1]WS3－B－2668－97，衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十四冊)[S].

[2]廖婷婷，羅先欽，黃崇剛，等.巴戟口服液補(bǔ)腎壯陽作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].重慶中草藥研究，2009（2）：23－26.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：327.

[4]范曾麗，權(quán)秋梅.淫羊藿的藥理研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（17）：9 264－9 266.

[5]李麗娜，林生文，朱炳輝.HPLC測定巴戟口服液的含量[J].現(xiàn)代食品與藥品雜志，2006，16（3）：31－32.

[6]趙世翔.高相液相色譜法測定萬通筋骨片中淫羊藿苷的含量[J].中國藥業(yè)，2012，21（14）：48－49.

[7]劉寶磊，孫佳石.高相液相色譜法測定補(bǔ)腎口服液中淫羊藿苷的含量[J].中國藥業(yè)，2013，22（18）：56－57.

[8]狄凱軍，張靜波.國內(nèi)外淫羊藿苷藥理作用研究要覽[J].自然雜志，2003，25（4）：191－196.

Content Determination of Icariin in Baji Oral Liquid by HPLC

Pan Wei，Zhao Yue，Wang Xiaoliu
（Yongchuan Institute for Food and Drug Control，Chongqing，China 402160）

Objective To establish an HPLC method for the content determination of icariin in Baji Oral Liquid.Methods The Syncronis C18 column（250 mm × 4.6 mm，5 μm）was used with a mobile phase consisting of CH3CN－H2O （30∶70）at the flow rate of 1.0 mL／min；the column temperature was maintained at 30℃，and the detection wavelength was set at 270 nm.Results The standard curve for icariin was linear in the range of 0.010 2－0.101 5 μg.The average recovery was 99.38% with RSD of 1.51%（n＝6）.Conclusion The method is simple，accurate，reproducible，and can be used to the quality control of Baji Oral Liquid.

Baji Oral Liquid；HPLC；icariin；content determination

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2016)22－0067－02

潘偉（1991－），男，江西宜春人，碩士研究生，助理工程師，主要從事藥品檢測工作，（電子信箱）weipan1103＠163.com。

2016－07－11)