用酶聯免疫吸附法對豬O型口蹄疫免疫抗體監測及分析

羅 燕

(四川省遂寧市農業局，四川 遂寧 629000)

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用酶聯免疫吸附法對豬O型口蹄疫免疫抗體監測及分析

羅 燕

(四川省遂寧市農業局，四川 遂寧 629000)

為切實了解、掌握遂寧市生豬口蹄疫免疫效果，以科學有效預防該病，2015年，隨機抽取全市部分規模場、散養戶以及屠宰場豬血清3100份，用酶聯免疫吸附試驗監測O型口蹄疫免疫抗體。結果表明，豬O型口蹄疫免疫抗體整體合格率為80.98%，其中抗體最好的是規模場，四個季度的免疫抗體合格率差異不大，各規模場商品豬在不同季度，豬O型口蹄疫免疫抗體群體合格率均達到80%以上，種豬多數場免疫抗體群體合格率達到了90%以上；散養戶及屠宰場免疫抗體合格率分別為74.71%、71.96%。說明我市始終堅持“規模養殖場按程序進行免疫，散養畜禽實行春秋兩季集中免疫、每月及時補免”的工作制度，堅持“應免盡免，不留空檔”的工作標準，把口蹄疫等重大動物疫病免疫放在防疫工作的突出位置，成效顯著。

酶聯免疫吸附試驗；O型口蹄疫；抗體監測

口蹄疫(Foot and mouth disease，FMD)俗稱“口瘡”，是由口蹄疫病毒引起的一種偶蹄獸急性發熱性接觸性傳染病，對畜牧業生產和國際貿易造成巨大的經濟損失，并嚴重影響到人民的生活和健康[1]。主要表現口腔粘膜、蹄部和乳房發生特征性水泡和潰瘍,豬為易感動物。此病的危害極大，我國將其列為一類病種，是國家制定強制免疫對象之一。免疫預防是防控該疫病發生的有效措施，因此，加強豬口蹄疫免疫工作已成為養豬業日常工作的重點[2]。為此，遂寧市對豬口蹄疫全面推行強制免疫，口蹄疫應免數量免疫密度常年維持在100%，免疫抗體合格率全年應保持在70%以上。要求散養戶春秋兩季集中免疫與月月補針相結合。規模場常年按程序免疫，屠宰場加強屠宰管理、屠宰檢疫，最終達到凈化效果[3]。遂寧市要求豬為使免疫效果得到保障，2015年，遂寧市動物疫病預防控制中心隨機抽取部分規模場、散養戶以及屠宰場的生豬進行了豬O型口蹄疫的免疫抗體監測，旨在分析評估口蹄疫的疫情風險，完善各防疫措施。

1 材料與方法

1.1 疫苗與免疫程序

1.1.1 免疫疫苗 豬O型口蹄疫滅活疫苗由政府統一采購自新疆天康畜牧生物技術股份有限公司，由區縣獸醫主管部門統一下發。

1.1.2 免疫程序 規模養豬場采取仔豬28～35d首免，免疫劑量為肌注1mL/頭，首免30d后加強免疫1次，免疫劑量為肌注2mL/頭；種公豬和母豬每4個月接種1次，每次免疫劑量為肌注3mL/頭；散養豬采用春秋兩季集中免疫，定期補免措施，每次免疫劑量為2mL/頭。

1.2 采樣點選擇

每季度隨機選取市轄區規模養殖場15場(次)，屠宰場10場(次)，散養戶30戶(次)進行血液樣品采集、分離血清。

1.3 采樣要求

每季度，每個規模養殖場隨機采集血樣20份，每個散養戶采集5～10份，每個屠宰場采集20份，并記錄采集地點、豬場規模、免疫時間、免疫次數、疫苗品種、生產廠家、批號及豬群健康狀況等資料，每份樣品采血量大于1.5mL。

1.4 樣品采集數量

全年共采集豬血清3100份，其中規模豬場商品豬血樣1157份，規模豬場種豬血樣412份，屠宰場血樣723份，散養戶血樣808份。

1.5 診斷試劑與方法

豬口蹄疫抗體監測ELISA試劑：購自深圳市真瑞生物有限公司，診斷試劑在有效期內使用，批號為2015101377；試驗嚴格按照診斷試劑說明書的要求進行操作[4]。

1.6 結果判定

以空白對照調零用酶標儀于450nm(630nm作參比波長)讀取吸光度A值。PI(阻斷率)>35%則判斷為陽性；PI≤35%則判斷為陰性。

2 試驗結果

2.1 不同采集點抗體合格率

由表1可見，全年平均免疫抗體合格率，規模場商品豬合格率(85.15%)>散養戶(74.71%)>屠宰場(71.96)；在規模場中，種豬合格率(92.08%)>商品豬(85.15%)。

表1 不同場點各季度豬O型口蹄疫免疫抗體合格率

圖1 不同場點各季度豬O型口蹄疫免疫抗體合格率曲線圖

2.2 四個季度抗體合格率狀況

由表1、圖1看出，對不同季度采集的豬血清進行O型口蹄疫免疫抗體監測發現，不同養殖類型的不同場點，群體免疫抗體合格率均高于農業部規定的70%的要求。規模場商品豬及種豬各自所在群體四個季度的免疫抗體合格率差異不大，并且抗體持續處于較高水平；散養戶、屠宰場第二、四季度的抗體合格率均高于第一、三季度，其中散養戶第三季度抗體水平處于最低，屠宰場相比規模場、散養戶抗體水平較低，且第一季度抗體水平處于最低；由表2得出，規模場商品豬各養殖場在不同季度，豬O型口蹄疫免疫抗體群體合格率均達到80%以上，種豬多數場免疫抗體群體合格率達到了90%以上。

3 分析與討論

(1)我市要求豬口蹄疫應免群體免疫密度常年維持在100%，從2015年監測的結果來看,在抽取的3100份豬血清的豬O型口蹄疫免疫抗體合格率達80.98%，超過了農業部規定的要求(70%)，說明我市始終堅持“規模養殖場按程序進行免疫，散養畜禽實行春秋兩季集中免疫、每月及時補免”的工作制度，堅持“應免盡免，不留空檔”的工作標準，把口蹄疫等重大動物疫病免疫放在防疫工作的突出位置，成效顯著。

(2)全年監測數據來看規模場各季度豬O型口蹄疫免疫抗體群體合格率差異不大，一直處于較高水平；散養戶由于第一季度處于屠宰或出欄高峰期，存欄數量、抽檢數量均較少。第一季度在秋防結束后經過幾個月，抗體水平逐漸降低，雖每月進行補免，但屠宰季節多數散養戶不進行疫苗免疫，個別豬處于免疫空檔期，致使免疫抗體水平合格率相對較低。第三季度處于春、秋防過渡臨界期，抗體水平也相對處于較低水平。對部分散養戶的調查了解，畜主擔心豬接種口蹄疫疫苗后導致豬過敏反應，未按規定程序免疫豬口蹄疫疫苗[5]。調查發現，個別養殖者認為口蹄疫是寒冷季節發病率較高的疫病，所以僅注重第一、四季度的免疫預防，導致口蹄疫抗體合格率在不同季節的差異較大。但總的合格率仍高于農業部規定的70%的要求。

(3)由于國家撥付給村級防疫員的工資經費有限，加之免疫注射工作量大，有些村級動物防疫員只做春秋兩季的集中免疫，平時的月月補針不能及時到位，存在應免未免、補欄不能及時補免等現象，也是導致第一季度、第三季度散養戶豬O型口蹄疫免疫抗體水平較低的原因之一。

表2 不同規模場商品四個季度免疫抗體合格率 單位：頭、%

(4)農村散養戶的豬舍通風不良，衛生條件差，豬群長期處于應激狀態，導致豬體免疫力下降。飼料變質發霉，比如黃曲霉、褐曲霉等產生毒素抑制免疫應答。飼料中營養物質缺乏，影響免疫抗體生成速度和數量[6]。

(5)個別屠宰場的免疫抗體合格率低下，存在免疫情況不清等問題，可能與免疫期超過6個月、漏免或免疫未產生應答等原因有關[7]。

[1]王世若,王興龍,韓文瑜.現代動物免疫學[M].吉林:吉林科學技術出版社,1996:320-321.

[2]吳志明,劉蓮芝,李桂喜.動物疫病防控知識寶典[M].北京:中國農業出版社，2006:114-118.

[3]劉桂清,侯喜林.幾種豬口蹄疫疫苗免疫效果觀察[J].中國獸醫科技,1999,29(12):38-39.

[4]豬口蹄疫抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯免疫法)說明書[Z].2010年.深圳市真瑞生物有限公司.

[5]朱玉華,陳亮.生豬注射口蹄疫滅活苗引起免疫應激的防治[J].安徽農學通報,2007,13(18):223.

[6]謝翠松,羅平,龍清孟,等.仔豬O型口蹄疫疫苗首免與二免抗體水平比較[J].中國畜牧獸醫,2009,36(5):144-146.

[7]金大春,王躍川,季旭仁,等.豬口蹄疫免疫程序和抗體水平研究[J].畜禽業,2003,8:30-31.