母豬子宮內膜炎致病菌的分離鑒定及藥敏試驗

孫龍，曹玉美，伍少欽，農秀艷，岑玲，韋婧婷，肖有恩，陳澤祥

（1.廣西農墾永新畜牧集團有限公司良圻原種豬場，廣西南寧530317；2.廣西壯族自治區獸醫研究所細菌研究室，廣西南寧530001）

母豬子宮內膜炎致病菌的分離鑒定及藥敏試驗

孫龍1，曹玉美1，伍少欽1，農秀艷1，岑玲1，韋婧婷1，肖有恩1，陳澤祥2

（1.廣西農墾永新畜牧集團有限公司良圻原種豬場，廣西南寧530317；2.廣西壯族自治區獸醫研究所細菌研究室，廣西南寧530001）

為探究母豬子宮內膜炎的致病菌及其耐藥情況，無菌采集40份子宮內膜炎母豬子宮內容物進行細菌培養及分離鑒定，共分離到細菌47株，分離率為100%。經過鑒定，分離菌主要為大腸桿菌、葡萄球菌、銅綠假單胞菌等細菌。對分離到的細菌進行了藥敏試驗。結果表明，氧氟沙星、頭孢噻肟是敏感性較高的2種抗生素。通過臨床試驗證實，根據藥敏試驗結果更改子宮保健方案后能夠提高母豬的斷奶配種率。

母豬；子宮內膜炎；細菌分離；藥敏試驗

母豬子宮內膜炎是由一系列致病微生物侵入母豬子宮黏膜表層或深層，引起子宮黏膜的黏液性或膿性炎癥過程，是母豬繁殖障礙最主要的細菌性疾病之一。本病在豬場生產中十分常見。發生子宮內膜炎的母豬發情不正常，或發情正常但屢配不孕而被迫淘汰，使母豬的非生產天數增加，減少年產胎次，直接影響母豬的繁殖力，導致養豬成本增高，經濟效益下降，由此可見，子宮內膜炎控制不理想會對豬場的生產力帶來較大損失。本研究通過對子宮內膜炎母豬無菌采集子宮內容物進行細菌分離鑒定，了解引發母豬子宮內膜炎的主要致病菌種類，通過藥敏試驗了解致病菌的藥物敏感性，為母豬子宮內膜炎的預防和治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗時間與地點

試驗于2015年5—7月在廣西農墾永新畜牧集團良圻原種豬場進行。

1.2 試驗材料

血瓊脂平板、伊紅美藍（EMB）培養基、麥康凱培養基、M-H培養基、膽硫乳（DHL）培養基、SC增菌培養基、胰蛋白胨大豆瓊脂培養基（TSB）均購自北京陸橋生物試劑公司，16s rRNA引物購自Life公司，藥敏紙片購自杭州濱和微生物試劑有限公司。

1.3 樣品采集

患病豬外陰部位用0.3%新潔而滅溶液清洗消毒后，用滅菌輸精管按人工授精的方法送入子宮腔，注入滅菌生理鹽水20 mL，并立即回抽，待回液10mL左右，用封口膜封住輸精瓶口，低溫避光保存后立即送往實驗室4℃保存。

1.4 細菌的分離純化

混勻樣品，無菌操作抽取樣品200 μL加入預先準備好的營養肉湯、SC增菌液、TSB肉湯培養基中，37℃溫箱中增菌培養24 h，然后在血瓊脂平板、麥康凱平板、TSA平板進行分離培養純化，并通過伊紅美藍培養基及DHL培養基進行初步鑒定。

1.5 菌落觀察

對平板上生長的菌落大小、形狀、顏色、質地、光澤進行觀察并記錄。挑取單個菌落進行革蘭氏染色，并通過顯微鏡油鏡觀察。

1.6 引物的設計與合成

利用16s rRNA兩端的保守序列及參考文獻報道，設計引物27F/1492R序列，由Life公司合成，擴增目的片段長度為1.5 kb左右。獲得目的條帶后送廣州Invitrogen公司測序。

1.7 藥敏試驗

對分離純化后的細菌進行藥物敏感試驗。所選藥物有頭孢噻肟、頭孢拉定、慶大霉素、氧氟沙星、左旋氧氟沙星、新霉素、卡那霉素、大觀霉素、強力霉素、阿奇霉素、恩諾沙星、鏈霉素、環丙沙星、阿莫西林、青霉素、諾氟沙星、氨芐西林、復方磺胺嘧啶等18種常用藥物。藥敏效果判定：抑菌圈直徑≥20 mm為高敏，抑菌圈直徑在15～20 mm為中敏，抑菌圈直徑＜15 mm為低敏或不敏感。

1.8 動物臨床試驗

對實驗室篩選的幾種抗生素在不同母豬場進行臨床試驗，分為混飼給藥和注射給藥兩種途徑，統計試驗豬的斷奶配種率，從臨床上驗證高敏抗生素在體內的抑菌殺菌效果，從而探索出最佳的臨床子宮護理保健方案。

2 試驗結果

2.1 病原菌的分離檢測結果

從不同母豬場共40份子宮內容物樣品中共分離到細菌47株，通過培養基鑒別和16s rRNA測序結果，最終測得主要為大腸桿菌、葡萄球菌、銅綠假單胞菌、變形桿菌、沙門氏菌等5種細菌，并以大腸桿菌、葡萄球菌為主，分別占所有檢出菌株比例的59.6%、23.4%。銅綠假單胞菌、變形桿菌和沙門氏菌占比相對較低。具體分布見表1。

表140 份母豬子宮內膜炎細菌學檢查結果

2.2 藥敏試驗結果

將分離到的主要致病菌28株大腸桿菌和11株葡萄球菌應用紙片法進行藥敏試驗以篩選敏感藥物，結果如表2所示。分離的28株大腸桿菌中，對頭孢噻肟、大觀霉素、氧氟沙星、左旋氧氟沙星、頭孢拉定、阿奇霉素具有較高的敏感性，高度敏感菌株比例均能達到50%以上，而對常規使用的子宮保健藥物青霉素、鏈霉素均出現耐藥性。

分離到的11株葡萄球菌對頭孢噻肟、頭孢拉定、氧氟沙星、左旋氧氟沙星高度敏感比例最大，對喹諾酮類抗生素較為敏感。而對氨基糖苷類抗生素基本都產生耐藥，對常規使用較為頻繁的青霉素也出現了耐藥性。

表2 大腸桿菌和葡萄球菌的藥敏試驗

2.3 臨床試驗結果

實驗室分離細菌并進行藥敏試驗，篩選出兩種敏感的抗生素，在兩個2 000頭規模的母豬場內進行試驗。A場試驗主要驗證林可霉素+大觀霉素對子宮炎病菌的抑制作用，B場試驗主要驗證氧氟沙星對子宮炎病菌的抑制作用，產后8 d進行斷奶配種率的統計分析。具體試驗分組及結果見表3和表4。

表3 A場兩種產后保健方案的對比結果

表4 B場3種保健方案對比結果

A場試驗數據表明，試驗組（林可霉素+大觀霉素組）較對照組（紐弗羅+金霉素組）具有更高的斷奶配種率，試驗組和對照組斷奶配種率分別為89.1%、86.8%；但采食量試驗組（林可霉素+大觀霉素組）不及對照組（紐弗羅+金霉素組），說明林可霉素+大觀霉素在口感方面沒有紐弗羅+金霉素好，影響了母豬的采食量。

B場試驗數據表明，氧氟沙星組比阿莫西林組及青霉素+鏈霉素組具有更高的斷奶配種率，且對子宮流膿的控制情況也優于阿莫西林組和青霉素+鏈霉素組兩組。采食量方面沒有較大影響，說明氧氟沙星組可以較好地控制子宮內膜炎的發生，提高斷奶配種率，減少母豬的非生產天數。

3 討論

子宮內膜炎是影響母豬斷奶再次發情的主要疾病，主要由幾種病原體的混合感染引起，是臨床中降低豬場非生產天數和增加母豬淘汰率的主要因素，不同地區甚至不同的畜牧公司病原菌的種類差異較大。本次試驗從本公司4個母豬場中出現子宮內膜炎母豬的40份病料中分離到細菌47株，主要病原菌是大腸桿菌、葡萄球菌、銅綠假單胞菌、變形桿菌、沙門氏菌，檢出率分別為70.0%、27.5%、10.0%、5.0%和5.0%。大腸桿菌和變形桿菌是條件性致病菌，在豬抵抗力降低或環境較差時，細菌會進入子宮并大量繁殖，可單獨或與其他細菌配合引起母豬子宮內膜炎的發生。葡萄球菌是常見的革蘭氏陽性菌，往往會引起急性炎癥或化膿性感染。本次試驗分離到較多的大腸桿菌和葡萄球菌，與文獻報道的基本一致，而子宮感染分離率較高的鏈球菌在本次試驗中沒有分離到。

藥敏試驗是對分離到的致病菌在分離培養后進行的藥物敏感性試驗，能夠指導臨床用藥。本次試驗還對檢出率較高的大腸桿菌和葡萄球菌進行了藥敏試驗，結果顯示，本公司豬場使用率較低的頭孢類抗生素對大腸桿菌和葡萄球菌具有較高的敏感性，大觀霉素對大腸桿菌具有較高的抑制作用，而對革蘭氏陽性菌葡萄球菌的作用較弱。豬場實際應用過程中，大觀霉素雖能提高斷奶配種率，卻遇到采食量稍有下降的問題，可能是生產工藝不好、口感欠佳造成的。氧氟沙星屬喹諾酮類藥物，抗菌譜廣，抗菌活性高，對分離到的大腸桿菌和葡萄球菌都具有較強的抑制作用。根據藥物代謝動力學/藥物效力動力學理論，喹諾酮類藥物屬于濃度依賴性藥物，是抗菌活性在很大范圍內隨藥物濃度的增大而增加的一類藥物，跟作用時間關系不大，因此相對高劑量的給藥能夠獲得較好的效果。臨床使用氧氟沙星對產后母豬進行連續3 d的肌肉注射能夠明顯提高母豬的斷奶配種率。但由于氧氟沙星不是獸用專用藥，在食用動物上的廣泛使用可能會造成細菌的耐藥，造成在人身上用時效果減退，因此2015年6月9日農業部發布公告自2016年1月1日起停止經營、使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星等4種原料藥的各種鹽、脂及其各種制劑。以后子宮炎細菌分離及藥敏試驗要避免使用此4類抗生素進行試驗。

在我國當前的養殖條件下，母豬子宮內膜炎的情況依然嚴重，是影響母豬的產后發情率的主要因素。環境中常在的條件性致病菌是母豬子宮內膜炎主要感染菌，其中大腸桿菌是本病的主要感染菌。良好的豬舍環境和徹底的空欄消毒是控制本病的最佳解決方案。依靠藥物治療只能起到緩解的作用，很難對患病動物進行根除。同時，在使用藥物進行產后保健時還應遵循交叉用藥和輪換用藥的原則，不能長時間的依靠某一種抗生素，這樣才會盡量減少細菌耐藥性的產生。

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（致謝：本試驗得到廣西壯族自治區獸醫研究所細菌研究室陳澤祥研究員團隊的大力支持，特此表示衷心感謝。）

（編輯：富春妮）

不吃肉會導致營養缺乏

【法國《費加羅報》10月27日報道】題：不攝入動物蛋白，難以避免營養缺乏

法國雷恩農學院人類營養實驗室負責人菲利普·勒格朗接受本報記者采訪，主要內容如下：

《費加羅報》問：為什么肉類攝入問題在我們的膳食平衡中非常敏感？

菲利普·勒格朗答：肉類是蛋白質的重要和均衡的來源。蛋白質構成了對人體非常重要的氨基酸。簡而言之，沒有蛋白質就沒有生命。但我們不清楚如何靠自己來產出氨基酸，因此必須從飲食中獲取。

問：植物也含有蛋白質。我們是否可以擺脫動物蛋白？

答：植物食品和動物食品的蛋白質富含度差別非常大。動物在進食時自身也在合成蛋白質，因此它們向我們提供了無與倫比的多種氨基酸，其中一些氨基酸是我們無法自己制造的，而植物提供的不可或缺的氨基酸較少。

問：是否可以說沒有肉制品的素食飲食結構必然不均衡？

答：顯然如此!素食需要精確的計算以及大量飲食才能達到人體必需的營養。另外，貧血的風險會增加。在提供可吸收的鐵元素方面，肉類是無可比擬的來源，它在提供維生素B12方面同樣如此。總之，要成為素食者就需要時間，因為這很復雜，而復雜就意味著風險。素食者通常缺乏維生素，輕度貧血……他們還需額外補充營養食品。

問：避免營養不良的最佳食譜是什么？

答：什么都吃，但要適量。這樣就能遠離營養不良。正因如此，我們才是雜食動物！魚和雞蛋作為紅肉的替代也是動物蛋白的良好來源，而紅肉能提供更多的維生素B12和鐵。最根本的是不要排斥任何一類食品。比如，如果我們不愛喝奶或者對奶消化不良，那么我們也不能放棄所有奶制品，可以繼續吃奶酪或喝酸奶。

問：對不同的年齡段是否有特別的建議？

答：成年人可以少吃一點動物蛋白，因為成年人身體具有不可思議的適應性。但要求小孩或老人吃素食則會帶來巨大的營養不良風險。目前的社會試圖將蔬菜視為有百利而無一害的食品，這是錯誤的。為了達到健康的最佳狀態以及恪守預防在先的原則，應該選擇雜食。

但請注意，這并不意味著每天吃兩次肉。在當下這個飽食的社會，一些人確實吃肉過量。

（轉自參考消息[N]，2015-10-29）

S858.28

A

1002-1957(2016)01-0121-03

2015-12-10

孫龍（1988-），男，山東昌邑人，執業獸醫師，碩士，研究方向為規模化豬場主要疫病的控制與凈化. E-mail：461579682@qq.com