慢性缺血致血管性癡呆大鼠腦內(nèi)單核細(xì)胞趨化蛋白-1的相關(guān)變化

丁 穎 張 梅 丁文嘉 趙 騰

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院二部，吉林 長(zhǎng)春 130031)

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慢性缺血致血管性癡呆大鼠腦內(nèi)單核細(xì)胞趨化蛋白-1的相關(guān)變化

丁 穎 張 梅1丁文嘉 趙 騰

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院二部，吉林 長(zhǎng)春 130031)

目的 探討慢性缺血是否可以通過單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP)-1介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)加重大鼠認(rèn)知功能的損害。方法 選取40只健康 Wistar 大鼠，隨機(jī)分為模型1組、模型2組、假手術(shù)1組、假手術(shù)2組。模型組應(yīng)用大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久結(jié)扎法(2VO)制備慢性前腦缺血致血管性癡呆動(dòng)物模型，假手術(shù)組除頸總動(dòng)脈結(jié)扎外與模型組相同。術(shù)后30 d，假手術(shù)1組及模型1組大鼠用Morris水迷宮檢測(cè)手術(shù)前及手術(shù)后的逃避潛伏期，觀察手術(shù)前后及各組間的差異。而后將兩組大鼠取腦。將部分腦組織制成勻漿，ELISA 檢測(cè)各組MCP-1的表達(dá)量。術(shù)后60 d，按照上述同樣的方法對(duì)假手術(shù)2組及模型2組大鼠進(jìn)行處理。結(jié)果 造模后30 d，模型1組大鼠水迷宮的逃避潛伏期與假手術(shù)1組相比，差異顯著(P<0.05)；造模后60 d，模型2組大鼠水迷宮逃避潛伏期與假手術(shù)2組相比，有顯著性差異(P<0.05)。假手術(shù)1組、模型1組、假手術(shù)2組、模型2組大鼠腦內(nèi)MCP-1濃度分別為(1.58±0.21)ng/ml、(8.15±1.92)ng/ml、(1.66±0.29)ng/ml、(7.96±1.56)ng/ml。模型1組與假手術(shù)1組MCP-1表達(dá)量相比，差異顯著(P<0.05)；模型2組與假手術(shù)2組相比，差異顯著(P<0.05)。結(jié)論 MCP-1可能通過其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)參與慢性缺血致血管性癡呆大鼠的認(rèn)知功能損害。

血管性癡呆;單核細(xì)胞趨化蛋白-1

血管性癡呆(VD)是指由腦血管疾病引起的腦損害所致的嚴(yán)重認(rèn)知障礙。目前有研究顯示腦缺血后腦血流量下降所致的腦內(nèi)炎癥反應(yīng)在VD的發(fā)病中起到關(guān)鍵的作用。單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP)-1作為一種炎癥趨化因子，在腦缺血過程中可能趨化和激活T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等免疫細(xì)胞，同時(shí)可能活化神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，在此過程中可能對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)造成損傷，而認(rèn)知功能也可能因此受到損害。本研究目的在于明確MCP-1介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)是否參與了腦缺血后的神經(jīng)損傷。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物 選取雄性Wistar大鼠40只(體重250～300 g,鼠齡2～3個(gè)月)，由吉林大學(xué)新民校區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供及喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證:SCXK(吉)2014-0006，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證:SYXK(吉)2014- 0022，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在吉林大學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組以及動(dòng)物模型的制備 在分組之前對(duì)大鼠先進(jìn)行 Morris 水迷宮檢測(cè)，每天上、下午各1次，當(dāng)天取平均值，共進(jìn)行4 d。將實(shí)驗(yàn)大鼠先后從4個(gè)入水點(diǎn)放入水池中，然后記錄其在120 s內(nèi)尋找到并爬上平臺(tái)所用的時(shí)間，即為逃避潛伏期。期間死亡大鼠2只，另有4只不符合標(biāo)準(zhǔn)，隨后補(bǔ)足相應(yīng)的動(dòng)物數(shù)目。40只大鼠平均逃避潛伏期為(30.95±9.08)s。將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)1組、假手術(shù)2組、模型組1組、模型2組，每組10只。

大鼠稱重，按10%水合氯醛300 mg/kg腹腔注射麻醉，采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈持久性結(jié)扎法(2VO)制備動(dòng)物模型。假手術(shù)對(duì)照組與模型組相同，只是不結(jié)扎和剪斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈。

手術(shù)后30 d及60 d，分別對(duì)各組進(jìn)行水迷宮試驗(yàn)，再次記錄各組的逃避潛伏期，每天進(jìn)行2次，共4 d。如測(cè)試第4天，逃避潛伏期超過20 s或者有2次誤入其他盲端即為VD大鼠。

1.3 MCP-1的檢測(cè)方法 水迷宮測(cè)試后，將各組大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉。而后在冰盤上快速斷頭取腦，將取出的腦組織放于玻璃勻漿器中研磨，2 000 r/min離心 15 min,留取上清。無菌條件下過濾，-80℃保存?zhèn)溆谩８鶕?jù) ELISA 試劑盒提供的方法對(duì)MCP-1的含量進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，各組間樣本均數(shù)行方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 Morris 水迷宮結(jié)果 水迷宮測(cè)試后假手術(shù)1組第4天逃避潛伏期均<20 s，未有誤入盲端者。模型1組符合VD標(biāo)準(zhǔn)者8只。假手術(shù)2組第4天逃避潛伏期均<20 s，模型2組符合VD標(biāo)準(zhǔn)者9只。造模前模型組分別與假手術(shù)組對(duì)比，避潛伏期無顯著差異(P>0.05)。造模后，模型1組逃避潛伏期與假手術(shù)1組相比，有顯著差異(P<0.05)；模型2組逃避潛伏期與假手術(shù)2組相比，有顯著差異(P<0.05)。見表1。

2.2 MCP-1檢測(cè)結(jié)果 模型1組〔(8.15±1.92)ng/ml〕與假手術(shù)1組〔(1.58±0.21)ng/ml〕MCP-1表達(dá)量相比，差異顯著(P<0.05)；模型2組〔(7.96±1.56)ng/ml〕與假手術(shù)2組〔(1.66±0.29)ng/ml〕相比差異顯著(P<0.05)；模型1組與模型2組MCP-1表達(dá)量相比無顯著差異(P>0.05)。

表1 造模前、后水迷宮逃避潛伏期結(jié)果比較±s,s,n=10)

與假手術(shù)組比較：1)P<0.05，與假手術(shù)2組比較：2)P<0.05

3 討 論

VD主要是由各種腦血管疾病導(dǎo)致腦組織損害為基礎(chǔ)引起的，以記憶功能以及行為障礙等為主要表現(xiàn)的一組疾病〔1〕。研究顯示腦缺血后炎癥反應(yīng)參與了對(duì)神經(jīng)元的損傷，從而對(duì)認(rèn)知功能造成影響〔2〕。而炎癥介質(zhì)參與了缺血腦組織的炎癥反應(yīng)。作為炎癥介質(zhì)之一的MCP-1是具有趨化功能的細(xì)胞因子，屬于趨化因子中的CC亞族。MCP-1在正常腦組織中表達(dá)很少，但是當(dāng)腦組織缺血后，腦內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元等均可以產(chǎn)生大量MCP-1〔3〕。另一方面，在腦缺血后引起的炎癥反應(yīng)，MCP-1反過來可以介導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞及血液中的單核-巨噬細(xì)胞向病變的炎癥部位聚集，進(jìn)而可能造成局部腦組織損傷。既往研究顯示,在腦缺血急性期MCP-1多出現(xiàn)一個(gè)表達(dá)高峰〔4〕。但最近有研究顯示〔5〕,在腦缺血后MCP-1會(huì)在急性期過后出現(xiàn)第二個(gè)表達(dá)高峰，并且持續(xù)高表達(dá)較長(zhǎng)時(shí)間。本試驗(yàn)也進(jìn)一步證實(shí)了MCP-1在慢性缺血致腦損傷的炎癥反應(yīng)中可能起到關(guān)鍵作用。另外，MCP-1的持續(xù)高表達(dá)可能參與了慢性腦缺血大鼠認(rèn)知功能的持續(xù)性下降。

1 李林昕,董 強(qiáng).從血管性癡呆到血管性認(rèn)知功能損害〔J〕.中華腦血管病雜志(電子版),2009;3(3):25-9.

2 Basu A,Lazovic J,Krady JK,etal.Interleukin-1and the interleukin-1 type 1 receptor are essential for the progressive neurodegeneration that ensues subsequent to a mild hypoxic/ischemic injury 〔J〕.J Cereb Blood Flow Metab,2005;25(1):17-29.

3 Paolinelli R,Corada M,Orsenigo F,etal.The molecular basis of the blood brain barrier differentiation and maintenance〔J〕.Pharmacol Res，2011;63(3):165-71.

4 Abbott NJ,Patabendige AA,Dolman DE,etal.Structure and function of the blood-brain barrier〔J〕.Neurobiol Dis,2010;37(1):13-25.

5 王 敏,曹秉振.慢性低灌注大鼠血清及腦組織中MCP-1及IL-8的表達(dá)〔J〕.中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志,2012;29(6):506-9.

〔2015-11-19修回〕

(編輯 袁左鳴)

吉林大學(xué)第一醫(yī)院二部科研專項(xiàng)(B18)

趙 騰(1985-)，男，主治醫(yī)師，主要從事老年癡呆研究。

丁 穎(1986-)，女，醫(yī)師，主要從事神經(jīng)影像研究。

R743

A

1005-9202(2016)22-5551-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.22.025

1 山東省費(fèi)縣人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科