Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)老年癡呆大鼠模型

張培華 程 琳

(南陽(yáng)理工學(xué)院張仲景國(guó)醫(yī)學(xué)院，河南 南陽(yáng) 473004)

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Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)老年癡呆大鼠模型

張培華 程 琳

(南陽(yáng)理工學(xué)院張仲景國(guó)醫(yī)學(xué)院，河南 南陽(yáng) 473004)

目的 建立Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)老年癡呆(AD)中大鼠模型。方法 120只大鼠平均分為觀察組，實(shí)施Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)AD，不實(shí)施Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)AD為對(duì)照組，針對(duì)兩組大鼠的記憶水平等指標(biāo)進(jìn)行觀察比較。結(jié)果 兩組定位航行試驗(yàn)中，潛伏期4 d及后2 d差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。觀察組學(xué)習(xí)記憶能力中象限百分比、20%、40%區(qū)域有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。觀察組空間探索學(xué)習(xí)記憶中象限百分比、20%、40%區(qū)域、穿過(guò)原平臺(tái)的次數(shù)與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。結(jié)論 Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)AD模型，與傳統(tǒng)的模擬AD模型可以更好地AD的發(fā)病特征，可以將其作為AD治療中的新模型。

Aβ25～35；鵝膏蕈氨酸；老年癡呆

老年性癡呆(AD)是一種中樞神經(jīng)減退性病癥，主要的臨床癥狀為進(jìn)行性精神狀態(tài)衰變，利用記憶力減退，情緒的改變、行為的失常等〔1～4〕。本文研究Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)AD大鼠模型的建立。

1 資料與方法

1.1 一般資料 Wistar雄性大鼠120只均來(lái)自湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心，合格證號(hào)：0038006，15月齡。平均分為觀察組和對(duì)照組，實(shí)施Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)AD為觀察組，不實(shí)施Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)AD為對(duì)照組。

1.2 方法 使用的試劑有Aβ25～35(Sigma公司)、鵝膏蕈氨酸，主要儀器迷宮自動(dòng)實(shí)驗(yàn)記錄儀(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院)、腦立體定位儀(美國(guó)TPI公司)。將Aβ25～35 1 mg溶于100 μl滅菌生理水中，保證濃度為10 μg/μl，并將其封口，使用封口膜封好之后，放置在37℃的環(huán)境中進(jìn)行孵育，使得Aβ25～35聚集、老化。將1 mg的鵝膏蕈氨酸溶入100 μl的滅菌蒸餾水中，濃度控制在10 μg/μl。將已經(jīng)處理好的Aβ25～35、鵝膏蕈氨酸的溶液，注射給觀察組。先使用戊巴比妥鈉進(jìn)行腹腔麻醉注射，之后將大鼠固定在定位儀上，將Aβ25～35、鵝膏蕈氨酸溶液注射到大鼠大腦局部軟組織，并進(jìn)行皮膚的縫合。對(duì)照組不進(jìn)行任何的處理。兩組大鼠放在制作的迷宮中，對(duì)其學(xué)習(xí)記憶能力進(jìn)行評(píng)價(jià)。第一，定位航行試驗(yàn)。將大鼠放置四個(gè)象限的水池中，對(duì)其2 min內(nèi)其找到平臺(tái)出口的時(shí)間(對(duì)潛伏期的逃避)進(jìn)行記錄。第二，空間探索試驗(yàn)。將實(shí)驗(yàn)水池中的平臺(tái)撤除，將大鼠放入實(shí)驗(yàn)水池中，并記錄其2 min內(nèi)跨越原平臺(tái)位置的次數(shù)，并針對(duì)兩次記錄的結(jié)果進(jìn)行分析。記錄平臺(tái)象限游泳距離占總距離的百分比、池壁20%和40%區(qū)域有用距離百分比。可以圍繞著空間線(xiàn)索找到平臺(tái)位置，運(yùn)動(dòng)軌跡最多的為正常；基本上可以圍繞著池壁游泳，也會(huì)沿著4個(gè)象限平臺(tái)對(duì)其左右兩側(cè)的象限進(jìn)行尋找，偶爾可以找到平臺(tái)，或者是極少找到平臺(tái)，則為不正常。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 定位航行試驗(yàn)結(jié)果 兩組定位航行試驗(yàn)中，潛伏期4 d及訓(xùn)練末后2 d差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。觀察組學(xué)習(xí)記憶能力中象限百分比、20%、40%區(qū)域差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 空間探索試驗(yàn)結(jié)果 觀察組空間探索學(xué)習(xí)記憶中象限百分比、20%區(qū)域、40%區(qū)域、穿過(guò)原平臺(tái)的次數(shù)與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表1 兩組定位航行試驗(yàn)中大鼠的潛伏期和學(xué)習(xí)記憶結(jié)果對(duì)比±s,n=60)

表2 兩組空間探索試驗(yàn)學(xué)習(xí)記憶結(jié)果±s,n=60)

3 討 論

Aβ25～35是β淀粉樣蛋白其是神經(jīng)病學(xué)的老年斑的核心成分，其在老年癡呆大鼠模型中，可以誘導(dǎo)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能下降，尤其是工作記憶能力〔5～10〕。鵝膏蕈氨酸是一種含有異惡唑環(huán)的氨基酸，其是強(qiáng)烈的神經(jīng)毒素，可以對(duì)大腦造成嚴(yán)重的損傷。對(duì)大鼠的大腦神經(jīng)元產(chǎn)生較大的毒性作用，導(dǎo)致大腦內(nèi)老年斑的沉積，延緩動(dòng)物的行動(dòng)，降低其學(xué)習(xí)記憶能力〔11〕。

Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸對(duì)大鼠的大腦組織產(chǎn)生的影響較大，其對(duì)大鼠的學(xué)習(xí)能力、記憶能力等產(chǎn)生較大的損傷，Aβ25～35促進(jìn)大鼠衰老，鵝膏蕈氨酸影響大鼠的神經(jīng)元系統(tǒng)，降低大鼠的工作學(xué)習(xí)記憶能力，Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸可應(yīng)用于大鼠，誘導(dǎo)AD大鼠模型的建立。

為了更好地治療AD，研制更多治療藥物，需要進(jìn)行相關(guān)的模擬實(shí)驗(yàn)，而不能從人體上進(jìn)行活體實(shí)驗(yàn)，只能從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中獲取相關(guān)的數(shù)據(jù)，進(jìn)行AD治療藥物的研制〔12〕。

1 Bihel F，Quelever G，Lelouard H.Synthesis of new 3-alkoxy-7-amino-4-chloro-isocoumarin derivatives as new beta-amyloid peptide production inhibitors and their activities on various classes of protease〔J〕.Bioorganic Med Chem Lett，2011；(14)：3141-52.

2 趙 波，張新宇，付學(xué)鋒，等.阿爾茲海默病動(dòng)物模型的研究進(jìn)展〔J〕.神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2012；28(1)：102-4.

3 吳 林，王清碧，畢信亞，等.老年性癡呆動(dòng)物模型研究進(jìn)展〔J〕.廣西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012；15(4)：68-71.

4 Huang FL，Huang KP，Wu JF.Environmental enrichment enhances neurogranin expression and hippocampal learning and memory but fails to rescue the impairments of neurogranin null mutant mice〔J〕.J Neurosci，2006；(23)：6230-7.

5 Liu L，Lu Y，Kong H.Aquaporin-4 deficiency exacerbates brain oxidative damage and memory deficits induced by long-term ovarian hormone deprivation and D-galactose injection〔J〕.Ira J Neuropsychopharmacol，2011；15(1)：1-14.

6 孔明望，王 平，田代志，等.Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)老年癡呆大鼠模型的建立及評(píng)價(jià)〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2008；28(10)：945-7.

7 Wu YY,Wang X,Tan L,etal.Lithium attenuates scopolamine-induced memory deficits with inhibition of gsk-3β and preservation of postsynaptic components〔J〕.J Alzheimer Dis，2013；(3)：515-27.

8 Janelsins MC，Mastrangelo MA,Oddo S,etal.Early correlation of microglial activation with enhanced tumor necrosis factor-alpha and monocyte chemoattractant protein-1 expression specifically within the entorhinal cortex of triple transgenic Alzheimer′ s disease mice〔J〕.J Neuroinflamm，2005：23-35.

9 胡勇博，任汝靜，王 剛，等.阿爾茨海默病動(dòng)物模型構(gòu)建的現(xiàn)狀與反思〔J〕.中華神經(jīng)科雜志，2015；48(8)：725-8.

10 Prakash A,Medhi B,Chopra K.Granulocyte colony stimulating factor (GCSF)improves memory and neurobehavior in an amyloid-beta induced experimental model of Alzheimer′s diease〔J〕.Pharmacol Biochem Behav，2013；(5)：46-57.

11 黃忠仕，焦 楊，張士軍，等.龍眼參多糖對(duì)老年癡呆模型SAMP8小鼠學(xué)習(xí)記憶的改善作用〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2008；28(21)：2086-8.

12 齊 鵬，楊曉慶，杜志敏，等.阿爾茲海默癥動(dòng)物模型的研究現(xiàn)狀〔J〕.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013；30(10)：838-41.

〔2015-02-19修回〕

(編輯 苑云杰)

2015年河南省科技攻關(guān)項(xiàng)目(No.152102310025)

張培華(1978-)，女，碩士，講師，主要從事老年癡呆研究。

R332

A

1005-9202(2016)22-5525-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.22.014