天臺烏藥散對輸卵管的影響

李林潞，陳悅，趙維哲，王洋，柴玉卓，張勝

(北京中醫藥大學基礎醫學院，北京 100029)

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天臺烏藥散對輸卵管的影響

李林潞，陳悅，趙維哲，王洋，柴玉卓，張勝*

(北京中醫藥大學基礎醫學院，北京 100029)

目的：觀察天臺烏藥散對輸卵管阻塞模型SD大鼠輸卵管的影響。方法：將正常SD雌性大鼠40只按體質量均衡和隨機原則分為正常對照組、模型組、婦炎康組、天臺烏藥散組。正常對照組在大鼠輸卵管局部注射生理鹽水，模型組和兩個實驗組注射苯酚膠漿，手術9天后，正常對照組給予等量蒸餾水灌胃，婦炎康組給予7.3 g/(kg·d)婦炎康混懸液灌胃，天臺烏藥散組給予0.35 g/(kg·d)天臺烏藥散灌胃，1次/天，持續20天。第21天分離子宮，檢測輸卵管肌張力；HE染色觀察各組大鼠輸卵管和卵巢的損傷及修復情況。結果：正常對照組和婦炎康組離體輸卵管肌張力明顯高于模型組(P<0.01)， 天臺烏藥散組離體輸卵管肌張力明顯高于模型組(P<0.05)；婦炎康組及天臺烏藥散組大鼠輸卵管及卵巢病理組織形態學較模型組有顯著改變。結論：天臺烏藥散對于輸卵管阻塞有明顯的治療作用，并可改善輸卵管肌張力。

天臺烏藥散；肌張力；不孕癥

世界衛生組織規定，夫妻雙方性生活正常，1年未避孕未懷孕稱為不孕癥[1]。近年來，隨著社會壓力的增加，生活節奏的加快以及自然環境的惡化，我國不孕癥的發病率呈現出上升趨勢且逐漸呈現低齡化趨勢[2]。不孕癥已成為影響家庭和諧和社會穩定的醫學問題[3]。在女性不孕的病因中，輸卵管因素居首要地位，發生率約為43.6%，其原因與盆腔及生殖道感染、盆腔手術、流產等有關[4]。近年來中醫發揮其整體觀念，辨證論治的特點，在不孕癥的辨證分型、治療用藥等方面取得了一定的進展，對不孕癥的臨床研究有一定的指導意義[5]。天臺烏藥散作為中醫藥學的經典方劑，用于治療小腸疝氣，但目前對其現代應用及其作用機制方面的報道較少，本研究觀察了天臺烏藥散對輸卵管阻塞模型SD大鼠的作用，并探討其發揮作用的可能機制。

1 實驗資料

1.1 材料

1.1.1 動物

SD大鼠40只，雌性，體質量(210±10)g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物合格證號SCXK(京)2012-0001。實驗期間飼養在三級動物室，溫度(25±1)℃。

1.1.2 實驗用藥物

烏藥、木香、小茴香、青皮、高良姜、檳郎、川楝子、巴豆(北京同仁堂中藥店)；婦炎康丸(吉林省中研藥業有限公司，國藥準字：Z20025527，水蜜丸)，使用前研成粉末，配成0.14 g/ml(相當于成人1日用量4倍)的混懸液。

中藥材經浸泡、煎煮、濃縮等處理使藥物終質量濃度為含生藥量0.73 g/ml；所得藥液置4℃冰箱保存備用。

1.1.3 實驗用試劑

苯酚膠劑液化苯酚(Amresco)5 ml，黃芪樹膠(國藥集團化學試劑有限公司)1 g，甘油(Genebio)4 ml，加蒸餾水至20 ml，配成25%的苯酚膠漿；二甲苯(北京化學試劑工廠)；LOCKE氏液：無水氯化鈣(北京藥理精細化學品有限公司)0.266 g/L，碳酸氫鈉(北京化學試劑工廠)1.7 g/L， 氯化鈉(北京化學試劑工廠)7.103 g/L，葡萄糖(北京化學試劑工廠)1.98 g/L， 氯化鉀(中國上海試劑一廠)0.41 g/L， 磷酸二氫鉀(北京紅星化工廠)0.187 g/L， 六水合氯化鎂(滬試)0.244 g/L。

1.1.4 儀器

顯微鏡(Olympus)；電子讀數分析天平(上海民橋精密科學儀器有限公司)；手術燈；剪刀；手術剪；眼科鑷；止血鉗；持針器；手術縫合針；線；紗布；1 ml、5 ml、10 ml注射器；燒杯；量筒；灌胃針；切片機(leizt)；電熱恒溫培養箱(湖北省黃石市醫療器械廠)。

1.2 分組及造模、給藥

將動物按質量均衡和隨機的原則分為正常對照組、模型組、婦炎康組、天臺烏藥散組。40只SD大鼠適應性飼養1周，于第8天以1%戊巴比妥鈉4 ml/kg腹腔注射麻醉，減去下腹正中毛，碘酒，酒精消毒皮膚，由下腹部正中切口2.5 cm，暴露子宮。模型組、婦炎康組、天臺烏藥散組在距離卵巢1 cm處向卵巢方向進針緩緩注入25%苯酚膠劑0.04 ml，術畢，分層關腹，消毒術區，將其側臥放入鼠籠中，待其自然蘇醒。正常對照組，在同一部位注入0.04 ml生理鹽水，其余操作同前，作為假手術對照組。手術9天后，進行灌胃，正常對照組和模型組給予等量蒸餾水灌胃，婦炎康組給與7.3 g/(kg·d)婦炎康混懸液灌胃，天臺烏藥散組給予0.35 g/(kg·d)天臺烏藥散灌胃，均1次/天，持續20天。

1.3 取材

各組動物于最后給藥后第2天稱體質量，斷頸，距卵巢0.5 cm處分離、剪下1 cm長的輸卵管。

1.4 肌張力測定

實驗前先將適量的水注入恒溫浴槽中，溫度控制在39℃。麥氏浴皿中加入10 ml LOCKE氏液。另外用燒杯盛滿LOCKE氏液，放在恒溫浴槽內保溫，以便在實驗中更換浴管中的LOCKE氏液。將輸卵管兩端用4號手術線結扎，一端固定于含10 ml LODKE氏液(pH值為7.2～7.4)的麥氏浴皿底部(麥氏浴皿置于39℃恒溫水浴槽中)，將浴槽充氣連接換能器的輸卵管前負荷為5 g，平衡10 min收縮平穩后記錄90 min自發收縮。

1.5 輸卵管切片HE染色

將輸卵管肌條置于10%甲醛溶液中固定，石蠟包埋，常規HE染色，各級酒精脫水，二甲苯透明，樹脂膠封固。光鏡下觀察各組大鼠輸卵管組織形態學變化。

1.6 卵巢切片HE染色

將卵巢組織置于10%甲醛溶液中固定，石蠟包埋，常規HE染色，各級酒精脫水，二甲苯透明，樹脂膠封固。光鏡下觀察各組大鼠卵巢組織形態學變化。

1.7 統計學處理

2 結果

2.1 各組大鼠子輸卵管平滑肌張力比較

正常對照組和婦炎康組離體輸卵管肌張力明顯高于模型組(P<0.01)， 天臺烏藥散組離體輸卵管肌張力明顯高于模型組(P<0.05)。見表1。

表1 各組離體輸卵管肌張力水平比較

注：與模型組比較，1)P<0.01，2)P<0.05。

2.2 各組大鼠輸卵管切片HE染色

輸卵管形態學觀察，光鏡下觀察，可見輸卵管的肌層和漿膜層并無明顯差別，肌層與黏膜層結構分層明顯，黏膜層差異較為明顯，特別是黏膜上皮。正常對照組大鼠輸卵管上皮細胞多呈單層柱狀較為整齊排列，部分上皮細胞變性、壞死、脫落，并見有淋巴細胞浸潤、嗜酸性粒細胞(圖1-1)。模型組大鼠輸卵管黏膜層損傷較為嚴重，大量上皮細胞變性、壞死、脫落，纖毛短小、稀疏、部分脫落，上皮細胞相對疏松排列雜亂，胞核排列不規整，核仁不清晰，并見有淋巴細胞浸潤、嗜酸性粒細胞(圖1-2)。婦炎康組大鼠輸卵管黏膜上皮多呈單層柱狀整齊排列，纖毛細胞游離面纖毛長而密集，核仁清晰，胞質豐富，少量上皮細胞變性脫落，并見有淋巴細胞浸潤、嗜酸性粒細胞(圖1-3)。天臺烏藥散組大鼠輸卵管黏膜上皮多呈單層柱狀整齊排列，纖毛細胞游離面纖毛長而密集，核仁清晰，胞質豐富，部分上皮細胞變性脫落，并見有少量淋巴細胞浸潤、嗜酸性粒細胞(圖1-4)。

圖1 各組大鼠輸卵管切片HE染色圖

2.3 各組大鼠卵巢切片HE染色

卵巢形態學觀察，光鏡下觀察，正常對照組可觀察到大量黃體、成熟卵泡，少量閉鎖卵泡。卵母細胞可見清晰的細胞核，其周圍由顆粒細胞構成，顆粒細胞形態正常，分布規則，無明顯壞死脫落(圖2-1)。模型組的黃體數目較少，成熟卵泡數目較少，閉鎖卵泡數目較多。間質小血管擴張充血以及紅細胞滲出。卵母細胞核不清晰，卵泡腔顆粒層顆粒細胞大量增生，并見有大量壞死，脫落(圖2-2)。婦炎康組的黃體數目增加，成熟卵泡數目增加，閉鎖卵泡數目明顯減少。卵母細胞核不清晰，泡腔顆粒層顆粒細胞增生，并見有部分壞死，脫落(圖2-3)。天臺烏藥散組的黃體數目明顯增加，成熟卵泡數目明顯增加，閉鎖卵泡數目明顯減少。卵母細胞核不清晰，卵泡腔顆粒層顆粒細胞增生，并見有部分壞死，脫落(圖2-4)。

圖2 各組大鼠卵巢切片HE染色圖

3 討論

目前輸卵管因素已經成為造成女性不孕的主要原因，占女性不孕癥的30%～50%。西醫認為其主要原因為慢性輸卵管炎癥，輸卵管結核，盆腔、宮腔術后黏連等[6]。中醫學對于輸卵管阻塞造成成的婦科炎癥無專門稱謂，但根據其臨床特點可歸屬于“癥瘕”“婦人腹痛”“無子”等范疇[7]。西醫以抗炎、反復輸卵管通液、腹腔鏡下黏連分離等治療為主，但治療效果并不滿意，且反復輸卵管通液或腹腔鏡下黏連分離會導致一系列手術并發癥甚至發生宮外孕，一些患者對手術難以接受[8]。而近幾年的研究表明中醫藥能明顯改善輸卵管內環境，促進輸卵管功能的恢復，對盆腔慢性炎癥有很好的療效，對輸卵管性不孕有很好的治療作用，且副作用小，易被不孕癥患者接受[9-13]，同時中藥提高卵巢功能，治療卵巢早衰、多囊卵巢綜合癥等疾病效果明顯[14-21]。

天臺烏藥散最早出自《圣濟總錄》，原名烏藥散[22]。本方由天臺烏藥、木香、小茴香、青皮、高良姜、檳郎、川楝子、巴豆等組成，具有行氣疏肝，散寒止痛之功，常用于治療寒滯肝脈之小腸疝氣，少腹引控睪丸而痛，偏墜腫脹，苔白，脈弦；亦治婦女痛經，瘕聚等屬寒凝氣滯者。常用于治療腹股溝斜疝和直疝、睪丸炎、附睪炎、胃腸功能紊亂等。天臺烏藥散以辛溫之烏藥為君，疏肝行氣，散寒止痛，理脾胃元氣。又用青皮疏肝、木香行氣、高良姜暖下、茴香散寒，從而加強了烏藥行氣散寒之功。檳榔下氣導滯，直達下焦，有破堅推蕩之力。巴豆與川楝子同用且在用法上均被炒用，既增強了行氣疏肝之功用，又避免了川楝子苦寒之性。有關本方的應用報道并不多，現有的臨床報道指出天臺烏藥散加減在治療前列腺炎、慢性闌尾炎、婦科炎癥等疾病中有一定療效[23-25]。

妊娠是新個體產生的過程，包括受精與著床、妊娠的維持、胎兒的生長等，而卵巢及輸卵管功能的正常是不可缺少的要素。本實驗在成功建立輸卵管阻塞的基礎上發現，天臺烏藥散湯劑的灌服可改善大鼠輸卵管黏膜層損傷，并改善卵巢功能，增加黃體及成熟卵泡數量。同時現代研究證實卵子需在輸卵管的運動和纖毛的作用下逐漸移動，其中輸卵管平滑肌收縮活動是卵子在輸卵管內轉運的主要推動力，故輸卵管的肌張力在很大程度上影響排卵和受孕。本實驗采用臨床上常用的婦炎康作為治療效果的參考，實驗結果顯示天臺烏藥散組輸卵管阻塞程度、輸卵管肌張力及卵巢功能的改善情況均略低于婦炎康組，但本方完全按照記載使用，不排除對本方進行加減后可以治療婦科炎癥的可行性。綜上所述，天臺烏藥散在治療婦科炎癥方面具有一定的應用價值，在對其進行加減后的治療效果令人期待，有待進一步研究。

[1] 劉燕,鄒小娟,陳家旭,等.基于內容分析法的不孕癥中醫證候文獻研究[J].中華中醫藥雜志,2015,30(7):2345-2348.

[2] 彭曉麗.不孕癥患者年輕化的高發因素及護理干預[J].世界最新醫學信息文摘,2015,15(28):209.

[3] 付澤明.女性不孕癥病因的研究進展[J].中國計劃生育學雜志,2014,22(6):430-432.

[4] 焦巖,劉云.女性不孕癥658例病因分析[J].現代醫藥衛生,2012,28(1):46.

[5] 楊業軍.不孕癥的病因分析及中醫辨證施治[J].航空航天醫學雜志,2014,25(11):1586-1587.

[6] 曠紅藝,朱莉莉.中西醫結合治療輸卵管阻塞性不孕的臨床觀察研究[J].光明中醫,2014,19(3):505-507.

[7] 賈磊,王希浩.中醫藥治療慢性盆腔炎實驗研究概述[J].中醫研究,2011,24(10):73-76.

[8] 祝燕莉,胡曉華.活血通管湯治療輸卵管阻塞性不孕癥臨床研究[J].中醫學報,2012,27(4):504-505.

[9] 張少聰,周偉生.名老中醫驗方治療輸卵管阻塞性不孕癥概況[J].中華中醫藥學刊,2010,28(3):489-491.

[10] 康開彪,潘文.中醫藥治療輸卵管阻塞性不孕癥的現狀[J].甘肅中醫,2010,23(12):73-74.

[11] 劉麗,白椿宇,李世大,等.膈下逐瘀沖劑對輸卵管炎性不孕大鼠模型Bcl-2和ICAM-1蛋白表達的影響[J].中醫藥信息,2015,32(3):43-45.

[12] 楊璇,李元琪,李偉莉,等.徐志華治療輸卵管阻塞性不孕癥60例總結[J].安徽中醫藥大學學報,2014,33(3):25-27.

[13] 魯琳,許麗綿,嚴英,等.中醫標本同治法治療不同證型輸卵管阻塞性不孕癥的療效分析[J].遼寧中醫雜志,2012,39(6):1009-1013.

[14] 羅慧慧,李大劍.卵巢早衰的中醫藥治療近況[J].云南中醫中藥雜志,2014,35(10):86-88.

[15] 高金金,侯麗輝,李妍.應用補腎化痰法治療多囊卵巢綜合征的研究進展[J].中醫藥信息,2016,33(2):112-114.

[16] 賈翠敏.中藥加艾灸治療脾腎陽虛型多囊卵巢綜合癥不孕60例臨床觀察[J].中醫臨床研究,2012,4(16):47-48.

[17] 李蘭,左冬冬.自擬理坤湯聯合克齡蒙對腎虛型卵巢早衰患者性激素水平的影響[J].中醫藥信息,2015,32(4):90-92.

[18] 李艷秋，苑程鯤，侯麗輝.侯麗輝教授診療多囊卵巢綜合征的臨證經驗總結[J].中醫藥學報，2016,44(1):115-117.

[19] 匡洪影，馮文婷，徐芳,等.中醫藥治療多囊卵巢綜合征不孕癥治療的進展及優勢[J].中醫藥學報，2015,43(5):112-114.

[20] 魯彩霞，苑程鯤，侯麗輝.補腎化痰方治療胰島素抵抗PCOS的臨床研究[J].中醫藥學報，2015,43(6):58-61.

[21] 李慕白，劉暢，匡洪影，等.小檗堿對多囊卵巢綜合征患者子宮內膜胰島素信號分子的調節作用[J].中醫藥學報，2016,44(2):30-32.

[22] 聶晶.天臺烏藥散考源[J].江西中醫學院學報,2001,13(2):65.

[23] 程可佳.天臺烏藥散治療Ⅲ型前列腺炎臨床觀察[J].中國醫藥導報,2009,6(34):52-53.

[24] 徐恩歧,王乃峰,謝永俠.天臺烏藥散治療慢性闌尾炎40例[J].齊魯護理雜志,2004,10(9):721.

[25] 孫蓮,蘇靜芝.天臺烏藥散加減治療婦科炎癥100例體會[J].中國社區醫師(醫學專業),2010,12(7):101.

Effect of Tiantai Wuyao San on Fallopian Tube

LI Lin-lu,CHEN Yue,ZHAO Wei-zhe,WANG Yang,CHAI Yu-zhuo,ZHANG Sheng*

(BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China)

Objective:To observe the effect of Tiantai Wuyao San on fallopian tubes in SD rat models. Methods:Forty female SD rats were randomly divided into four groups: normal group, model group, Fuyankang group and Tiantai Wuyao San group. Rats in normal group received the injection of saline into both sides of their tubes. Rats in other three groups were injected with phenolatabrine paste. Nine days after operation,normal group and model group were given the same volume of distilled water by intragastric administration;Fuyankang group was treated by Fuyankang suspension at the dosage of 7.3 g/(kg·d);Tiantai Wuyao San group was treated by Tiantai Wuyao San at the dosage of 0.35 g/(kg·d) respectively,with once a day and for 20 days. On the 21stday, animals were sacrificed and tubes were separated solely and their smooth muscle contraction force was measured. After tubes were removed, paraffin section and HE staining were made. Results:There was a significant difference between normal group and Fuyankang group according to fallopian tube smooth muscle contraction (P<0.01),and there was a significant difference between Tiantai Wuyao San group and model group (P<0.05). Compared with those in model group,the fallopian tube and ovary pathological histology in Tiantai Wuyao San group and Fuyankang group were significantly improved. Conclusion:Tiantai Wuyao San has an obvious effect in the treatment of fallopian tube obstruction, and can improve tubal smooth muscle contraction.

Tiantai Wuyao San; Muscle contraction;Infertility

2014年國家級大學生創新創業訓練計劃項目(No.201410026054)

李林潞(1992-)，女，北京中醫藥大學2011級中西醫結合臨床專業學生。

張勝*(1963-)，男，副教授，主要研究方向：心臟生理學。

2016-03-18

R285.3

A

1002-2406(2016)06-0031-04

修回日期：2016-04-10