“附子走而不守”性能表征的實驗研究

褚雪鐳，楊興言，甄蓉蓉，王彥芳，秦林

(山東中醫藥大學，山東 濟南 250355)

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“附子走而不守”性能表征的實驗研究

褚雪鐳，楊興言，甄蓉蓉，王彥芳*，秦林

(山東中醫藥大學，山東 濟南 250355)

目的：通過比較觀察附子以及附子配伍干姜后對正常小鼠的影響，研究“附子走而不守”的性能表征。方法：采用小鼠肛溫、抗疲勞游泳、毒性實驗、心電圖檢測以及溫度趨向性等實驗，比較觀察正常空白組、附子組、附子干姜組(2:1、1:1組)對正常小鼠上述實驗指標的影響。結果：與正常空白組比較，附子組平均體溫明顯降低，平均體能減弱，抗疲勞游泳時間縮短，心率、心電圖幅度均呈下降趨勢，LD50全部死亡。而附子配伍干姜則能明顯改善其反應。結論：附子“走而不守”之性，體現在使正常老鼠的代謝加快，出汗量增加，從而導致肛溫、體能、心率降低，甚至死亡等毒性表征。提示臨床單用本品需尤為謹慎。

附子走而不守；小鼠肛溫；抗疲勞游泳；附子致死毒性；溫度趨向性

附子為毛茛科植物烏頭(AconitumcarmichaeliDebx)的子根的加工品。味辛甘、性大熱、有毒，歸心、腎、脾經，具有回陽救逆，補火助陽，散寒止痛之功效。對于“附子走而不守”之性能，歷代醫家早有論述，如元代王好古言：“附子，入手少陽三焦、命門之劑，浮中沉，無所不至，味辛大熱，為陽中之陽，故行而不止，非若干姜止而不行也”，并曰“附子善走，過于發散。”(《湯液本草》)；朱震亨謂：“附子之性走而不守，但取其健悍走下之性，以行地黃之滯，可致遠爾。”(《丹溪心法》)；清代汪昂也有“附子辛甘有毒，大熱純陽。其性浮而不沉，其用走而不守，通行十二經，無所不至。”(《本草備要》)之言。近年來諸多學者從藥理、毒理實驗以及化學成分檢測等方面，對附子進行了研究[1-9]，但是如何認識附子“走而不守”，其臨床或實驗反應如何，仍有待于進一步明確。

本項目在前人研究的基礎上，以中醫藥理論和藥理學方法為指導，以附子與附子配伍干姜做比較，探討了“附子走而不守”的性能表征，以期為臨床提供實驗依據。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

健康昆明種系小鼠，雌雄各半，體質量(30±5)g。購于山東大學實驗動物中心。動物飼養于清潔級動物室，明暗周期12 h，自由飲食飲水，室內溫度22～26℃，濕度50%～60%。

1.2 實驗藥物

附子(Radix Aconiti Praeparata)，產地四川，購于濟南漱玉平民大藥房有限公司；干姜(rhizome zingiberis)，產地四川，購于濟南漱玉平民大藥房有限公司。經山東中醫藥大學中藥教研室周鳳琴教授鑒定，符合《中國藥典》標準。

1.3 實驗儀器

常用手術器械、MPA-2002生物信號分析系統(上海奧爾科特生物科技有限公司)；電子溫度計(東莞市黃江百綠電子廠，KD-204)；電子天平(北京賽多利斯儀器系統有統公司，BS223S型)；心電圖儀(上海奧爾科特生物有限公司生產的MPA2002生物信號分析系統)；動物溫度趨向性行為學智能檢測系統(山東中醫藥大學自制)。

1.4 實驗方法

1.4.1 中藥水煎劑的制備

附子水煎液：取附子30 g，加8倍蒸餾水煎煮，至口嘗無麻后過濾，經65℃水浴濃縮成100%的附子水煎液,即1 ml水煎液含1 g附子。

附子干姜2:1水煎液：取附子20 g、干姜10 g，制備原理同附子水煎液。

附子干姜1:1水煎液：取附子15 g、干姜15 g，制備原理同附子水煎液。

水煎液放入冰箱儲存。

1.4.2 實驗動物分組

實驗小鼠稱重、編號并按隨機數字表法分為4組：正常空白組(簡稱空白組)、附子組、附子干姜2:1組、附子干姜1:1組，10只/組。

1.4.3 小鼠體溫測定

在實驗前12 h對小鼠禁食，排凈排泄物，防止檢測體溫有誤。空白組、附子組、附子干姜2∶1組、附子干姜1∶1組小鼠分別給予生理鹽水、附子水煎液、附子干姜2∶1水煎液、附子干姜1:1水煎液灌胃，根據小鼠體質量計算給藥量。給藥劑量為0.6 ml/20 g。

給藥30 min后，用電子體溫計檢測小鼠直腸溫度。檢測前，先將膠布纏在體溫計表頭2 cm位置，以防止在檢測時因體溫表插入深淺不同而引起誤差。

1.4.4 小鼠抗疲勞游泳實驗

水煎劑灌胃30 min后，將小鼠放入水溫30℃、水深30 cm的水槽中游泳，記錄小鼠游泳時間。用木棒輕輕攪動水面保證小鼠持續游泳。小鼠放入水槽時開始計時，當小鼠沉入水中不再浮出水面超過10 s時停止計時。

1.4.5 小鼠致死毒性實驗(LD50實驗)

先進行預實驗，得出小鼠0和100%死亡率的附子劑量。

取100只小鼠，隨機分成空白對照組和9個劑量組，每組雌雄各5只。禁食12 h后一次性給予0.9%的生理鹽水和不同劑量的附子水煎液灌胃(0.3 ml/10 g)，連續觀察7 d，記錄小鼠的毒性反應癥狀、死亡數和死亡時間。

1.4.6 小鼠心電圖檢測

水煎劑灌胃小鼠，觀察小鼠的死亡時間和死亡過程中心電圖的變化。

心電圖記錄：記錄小鼠Ⅱ導聯心電圖。增益1000，濾波50，時間常數0.1 S。檢測心電圖心率、R波幅度、心電圖漏博和R波倒置狀況。

1.4.7 溫度趨向性實驗

本實驗在冷熱板示差法[10]的基礎上加以改進，采用動物溫度趨向性行為學智能檢測系統，觀察小鼠溫度趨向性行為。室溫(24±2)℃下，設置自動溫度控制系統不同溫區的底板溫度(低溫板25℃，高溫板40℃)，待冷熱板的溫度達到預設溫度，小鼠灌胃30 min后，分別將各組小鼠放入相應的冷熱板中，監測其冷熱板冷熱溫區趨向活動, 并對活動軌跡進行全程記錄。

停留比例(%)=高溫區停留時間(s)/總監測時間(s)×100%

1.5 統計學處理

2 實驗結果

2.1 各組小鼠肛溫測定結果

體溫的高低標志著機體熱量代謝的盈虧。實驗過程中肉眼觀察，給藥30 min后，附子組小鼠皮毛和墊料明顯濕潤，出汗量、飲水量、尿量明顯多于空白組和配伍組。附子組小鼠肛溫與空白組和配伍組比較均有顯著差異。提示附子降低小鼠肛溫可能與出汗量較多有關。見表1。

表1 對小鼠肛溫的影響

注：與正常空白組比較，*P<0.05，**P<0.01；與附子干姜2∶1組比較，#P<0.05；與附子干姜1∶1組比較，&&P<0.01。

2.2 小鼠抗疲勞游泳實驗結果

小鼠游泳時間的長短可以反映小鼠抗疲勞的程度[11]。給藥30 min后進行游泳。結果發現：附子組小鼠游泳時間明顯短于對照組和配伍組，與對照組和配伍組比較差異均有顯著性意義，提示附子縮短了小鼠抗疲勞游泳的時間，附子組小鼠明顯易疲勞。見表2。

表2 對小鼠抗疲勞游泳的影響

注：與正常空白組比較，*P<0.05，**P<0.01；與附子干姜2∶1組比較，#P<0.05；與附子干姜1∶1組比較，&&P<0.01。

2.3 附子急性毒性實驗

通過LD50實驗發現，附子灌胃后小鼠全部死亡，但死亡時間差異較大，最短20 min，最長10 h,大約平均6 h。其致死原因，可能與小鼠大量出汗，導致陽氣外脫有關。

2.4 附子對小鼠心電圖的影響

2.4.1 對心率的影響

實驗結果顯示隨灌胃時間的延長，附子組小鼠心率下降最明顯，與正常空白組和配伍組比較有明顯差異。結果見圖1。

圖1 灌胃后小鼠心率隨時間的變化注：與空白組比較， **P<0.01；與附子干姜2∶1組比較，##P<0.05；與附子干姜1∶1組比較，&&P<0.01。

2.4.2 對幅度的影響

圖2顯示，附子組小鼠心電圖振幅變化大，呈顯著下降趨勢，與時間成正比。差異有顯著性意義。

圖2 灌藥后小鼠心電圖幅度隨時間的變化注：與空白組比較，**P<0.01；與附子干姜2∶1組比較，##P<0.05；與附子干姜1∶1組比較，&&P<0.01。

2.5 對小鼠溫度趨向行為的影響

圖3顯示,附子組小鼠熱區停留比例與正常空白組相近。配伍組熱區停留比例明顯降低，小鼠趨寒性感知增強。而與附子干姜配伍組比較，附子組小鼠高溫區停留比例>50%，提示附子組小鼠體內熱量不及配伍組，其結果也能反應“附子無姜不熱”、附子“走而不守” 的性能特點。

圖3 附子及附子配伍干姜水煎劑對正常小鼠熱區停留比例的影響注：與空白組比較， **P<0.01；與附子干姜2∶1組比較，##P<0.05；與附子干姜1∶1組比較，&&P<0.01。

3 討論

綜上所述，附子能明顯增加正常小鼠出汗量，表現為降低體溫，減弱體能，使心電圖異常甚至死亡等毒性反應。說明對于正常小鼠，附子“走而不守”的性能，主要體現在附子對于機體的毒性反應。實驗證明附子“走而不守”之性可能因大辛大熱，驅汗外泄，導致陽氣外脫，故臨床單用本品需尤為謹慎。而配伍干姜后，小鼠體溫、體能、心電圖等呈平穩趨勢，毒性明顯減弱，小鼠耐寒性明顯增加。

附子“走而不守”，一方面體現于毒性表征，表現在體溫、體能降低，心率減慢甚至亡陽死亡。以往研究也證實，附子主要作用于中樞神經系統、心臟、肌肉組織[12]，應用不當可能導致嚴重后果，本項目研究與之相符。但是另一方面，中醫臨床通過與相關藥物配伍，附子“走而不守”之性又表現了積極意義。如附子與熟地黃配伍，可制熟地黃之滋膩，使熟地黃補而不滯；附子與干姜配伍可回陽救逆，搶救亡陽證，故有“有姜無附，難收斬將奪旗之功; 有附無姜，難取堅壁不動之效”之言(《本經疏證》)。因此，附子臨床用藥要配伍嚴謹，既要防止和制約其走散之性，又要善于利用附子“走而不守”之性，通過合理配伍以趨利避害。

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山東中醫藥大學大學生研究訓練計劃(SRT)項目(No.2015401);山東中醫藥大學實驗教學研究課題(No.2014-011)

褚雪鐳(1995-)，女，山東中醫藥大學2013級中西醫臨床醫學專業學生。

王彥芳*(1984-)，女，講師，主要研究方向：中西醫結合基礎。

2016-05-12

R285.5

A

1002-2406(2016)06-0005-03

修回日期：2016-06-10