HPLC法同時測定克敏乳膏中3種成分的含量

陳曉亮，汪旭（1.海口市人民醫院藥學部，海口 570208；2.長春八一醫院藥劑科，長春 130024）

HPLC法同時測定克敏乳膏中3種成分的含量

陳曉亮1＊，汪旭2#（1.海口市人民醫院藥學部，海口 570208；2.長春八一醫院藥劑科，長春 130024）

目的：建立同時測定克敏乳膏中鹽酸利多卡因、馬來酸氯苯那敏和氯霉素含量的方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為WondaSil C18，流動相為甲醇-乙腈-0.1%磷酸（梯度洗脫），流速為1.0 ml/min，檢測波長為254 nm，柱溫為25℃，進樣量為10 μl。結果：鹽酸利多卡因、馬來酸氯苯那敏和氯霉素的檢測進樣量線性范圍分別為0.604 5～2.871 4 μg（r＝0.999 9）、0.169 9～0.807 0 μg（r＝0.999 9）、0.326 5～1.550 9 μg（r＝0.999 9）；定量限分別為3.17、1.50、2.33 ng，檢測限分別為0.95、0.45、0.70 ng；精密度、穩定性、重復性試驗的RSD＜2%；加樣回收率分別為98.29%～100.10%（RSD＝0.64%，n＝9）、98.04%～100.70%（RSD＝0.80%，n＝9）、98.02%～99.81%（RSD＝0.70%，n＝9）。結論：該方法結果準確、精密度高，可用于同時測定克敏乳膏中鹽酸利多卡因、馬來酸氯苯那敏和氯霉素的含量。

克敏乳膏；高效液相色譜法；鹽酸利多卡因；馬來酸氯苯那敏；氯霉素；含量測定

克敏乳膏為長春八一醫院自擬處方、自主研發的院內制劑，是由鹽酸利多卡因、馬來酸氯苯那敏和氯霉素3種主要化學成分及乳膏基質制成的外用復方制劑，具有抗炎、抗過敏、鎮痛止癢等作用[1-2]，臨床上用于治療急慢性濕疹、皮膚瘙癢等疾病。現有文獻多為對其單一成分進行含量測定，不能有效控制該制劑的質量。因此，筆者參考相關文獻[3-6]采用高效液相色譜法（HPLC）建立了同時測定克敏乳膏中鹽酸利多卡因、馬來酸氯苯那敏和氯霉素含量的方法，以期為該制劑的質量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

LC-2010AHT型HPLC儀，包括自動進樣器、紫外分光光度檢測器、LC solution工作站（日本Shimadzu公司）；PB-10型萬分之一電子天平（德國Sartorius公司）；KQ-3200E型數控超聲波處理器（昆山市超聲儀器有限公司，功率：150 W，頻率：40 kHz）。

1.2 藥品與試劑

克敏乳膏（長春八一醫院制劑室自制，批號：20150401、20150402、20150403，規格：20 g/支）；鹽酸利多卡因對照品（批號：100341-201403，純度：93.4%）、馬來酸氯苯那敏對照品（批號：100047-200606，純度：99.7%）、氯霉素對照品（批號：130555-201203，純度：99.8%）均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：WondaSil C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇（A）-乙腈（B）-0.1%磷酸（C），梯度洗脫（洗脫程序見表1）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：254 nm；柱溫：25℃；進樣量：10 μl。

表1 梯度洗脫程序Tab 1 Gradient elution program

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液 精密稱取鹽酸利多卡因、馬來酸氯苯那敏、氯霉素對照品各適量，置于同一250 ml量瓶中，加95%乙醇溶解并定容，搖勻，制成每1 ml含鹽酸利多卡因0.16 mg、馬來酸氯苯那敏0.04 mg、氯霉素0.08 mg的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密稱取樣品0.40 g，置于50 ml棕色量瓶中，加95%乙醇溶解并定容，稱定質量，于80℃超聲處理40 min，冷卻至室溫，再次稱定質量，加95%乙醇補足減失的質量，搖勻，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液 按樣品的處方比例和工藝制備缺鹽酸利多卡因、馬來酸氯苯那敏和氯霉素的陰性樣品，再按“2.2.2”項下方法制備陰性對照溶液。

2.3 系統適用性試驗

精密量取“2.2”項下混合對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各成分均能達到基線分離，分離度＞1.5；理論板數以鹽酸利多卡因峰、馬來酸氯苯那敏峰和氯霉素峰計分別為3 500、7 000、8 000，保留時間分別為13.0、16.5、32.0 min。結果表明，其他成分對測定無干擾。

2.4 線性關系考察

精密量取“2.2.1”項下混合對照品溶液4、7、10、13、16、19 μl，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分進樣量（x，μg）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，回歸方程與線性范圍見表2。

2.5 定量限與檢測限考察

取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，等倍逐步稀釋，按“2.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。當信噪比為10∶1時，得定量限（LOQ）；當信噪比為3∶1時，得檢測限（LOD），結果見表3。

2.6 精密度試驗

取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，鹽酸利多卡因、馬來酸氯苯那敏和氯霉素峰面積的RSD分別為0.10%、0.08%、0.11%（n＝6），表明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖A.混合對照品；B.供試品；C.陰性對照；1.鹽酸利多卡因；2.馬來酸氯苯那敏；3.氯霉素Fig 1 HPLC chromatogramsA.mixed control；B.test sample；C.negative control；1.lidocaine hydrochloride；2.chlorpheniramine maleate；3.chloramphenicol

表2 回歸方程與線性范圍Tab 2 Regression equations and linear ranges

表3 定量限與檢測限測定結果Tab 3 Determination results of quantitation limit and detection limit

2.7 穩定性試驗

取“2.2.2”項下供試品溶液（批號：20150401）適量，分別于室溫下放置0、4、8、12、16、24 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，鹽酸利多卡因、馬來酸氯苯那敏和氯霉素峰面積的RSD分別為0.12%、0.25%、0.21%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下24 h內穩定性良好。

2.8 重復性試驗

取樣品（批號：20150401）適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品含量。結果，鹽酸利多卡因、馬來酸氯苯那敏和氯霉素的平均含量分別為18.417 7、5.166 0、10.063 1 mg/g，RSD分別為0.05%、0.09%、0.09%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.9 加樣回收率試驗

取樣品（批號：20150401）適量，共9份，分別加入低、中、高質量的鹽酸利多卡因、馬來酸氯苯那敏和氯霉素對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表4。

2.10 樣品含量測定

取3批樣品各適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品含量，結果見表5。

表4 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 4 Results of recovery tests（n＝9）

表5 樣品含量測定結果（n＝3，mg/g）Tab 5 Results of contents determination of samples（n＝3，mg/g）

3 討論

3.1 提取溶劑的選擇[7-8]

本品為復方乳膏制劑，處方較復雜。筆者在供試品溶液制備過程中分別選擇了50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇為提取溶劑。結果，95%乙醇和甲醇對樣品的提取率最高且相同，考慮提取成本及毒性因素，本試驗最終選擇95%乙醇作為提取溶劑。

3.2 流動相的選擇

本試驗曾分別以2015年版《中國藥典》（二部）[9]中鹽酸利多卡因、馬來酸氯苯那敏和氯霉素含量測定項下的流動相進行預試驗。結果，以鹽酸利多卡因含量測定項下磷酸鹽緩沖液-乙腈（50∶50，V/V）為流動相時，馬來酸氯苯那敏與氯霉素色譜峰均延遲，且氯霉素峰拖尾；以馬來酸氯苯那敏含量測定項下磷酸鹽緩沖液-乙腈（80∶20，V/V）為流動相時，氯霉素峰拖尾；以氯霉素含量測定項下0.01 mol/l庚烷磺酸鈉緩沖溶液-甲醇（68∶32，V/V）為流動相時，鹽酸利多卡因峰與乳膏基質峰分離度不佳，且鹽酸利多卡因與馬來酸氯苯那敏色譜峰理論板數及對稱因子均較差。最后，筆者參考相關文獻[7]的流動相，并在此基礎上添加了極性相對較大的乙腈溶液調整流動相的比例，以甲醇-乙腈-0.1%磷酸為流動相（梯度洗脫）進行預試驗，結果鹽酸利多卡因、馬來酸氯苯那敏和氯霉素的分離度均較好且峰型對稱。因此，本試驗選擇甲醇-乙腈-0.1%磷酸為流動相進行梯度洗脫。

3.3 檢測波長的選擇

經查閱相關文獻[9]，鹽酸利多卡因、馬來酸氯苯那敏和氯霉素的紫外吸收波長分別為254、262、277 nm。預試驗時，以262和277 nm為檢測波長，馬來酸氯苯那敏和氯霉素的峰面積及峰形均較好，而鹽酸利多卡因峰面積卻較小；以254 nm為檢測波長時，鹽酸利多卡因有最大紫外吸收，其峰面積、峰形及分離度均達到要求，且馬來酸氯苯那敏和氯霉素峰形也較好，故本試驗選擇254 nm作為檢測波長。

綜上所述，本方法結果準確、精密度高，可用于同時測定克敏乳膏中鹽酸利多卡因、馬來酸氯苯那敏和氯霉素的含量。

[1] 盛國榮.復方利多卡因乳膏的抗炎鎮痛和抗過敏止癢的實驗觀察[J].中國醫院藥學雜志，2010，30（3）：217.

[2] 何淵民，楊艷，廖勇梅，等.復方利多卡因乳膏治療慢性局限型濕疹37例隨機、雙盲對照的臨床觀察[J].中國皮膚性病學雜志，2015，29（10）：1 026.

[3] 李宏，盛國榮.HPLC測定復方利多卡因乳膏中的利多卡因和馬來酸氯苯那敏[J].華西藥學雜志，2015，30（4）：490.

[4] 任睿，陳林，李英，等.HPLC法同時測定復方地克軟膏中3組分的含量[J].中國藥房，2015，26（30）：4 277.

[5] 楊平，曾蔚欣，孫路路.HPLC法同時測定氯霉素醋酸曲安奈德乳膏中兩組分含量[J].中國藥師，2016，19（3）：591.

[6] 阿不都西克日·阿不都力米提，卡斯木·卡哈爾，滕亮，等. HPLC法測定痤瘡酊中氯霉素和水楊酸的含量[J].中國藥房，2015，26（18）：2 557.

[7] 汪旭，嚴鐵，高中華，等.HPLC法測定復方丙酸氯倍他索軟膏中丙酸氯倍他索和維A酸的含量[J].解放軍藥學學報，2015，31（6）：489.

[8] 汪旭，黃翠，嚴鐵，等.HPLC法測定皮康凈乳膏中醋酸氟輕松和丹皮酚的含量[J].解放軍藥學學報，2015，31（5）：396.

[9] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2015年版.北京：中國醫藥科技出版社，2015：62-63、978-979、1 397-1 398.

（編輯：劉柳）

Simultaneous Determination of Three Ingredients in Kemin Cream by HPLC

CHEN Xiaoliang1，WANG Xu2（1.Dept.of Pharmacy，Haikou People's Hospital，Haikou 570208，China；2.Dept. of Pharmacy，Bayi Hospital of Changchun，Changchun 130024，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the contents determination of lidocaine hydrochloride，chlorpheniramine maleate and chloramphenicol in Kemin cream.METHODS：HPLC was performed on the column of WondaSil C18with mobile phase of methanol-acetonitrile-0.1%phosphoric acid（gradient elution）at a flow rate of 1.0 ml/min，detection wavelength was 254 nm，column temperature was 25℃and injection volume was 10 μl.RESULTS：The linear range was 0.604 5-2.871 4 μg for lidocaine hydrochloride（r＝0.999 9），0.169 9-0.807 0 μg for chlorpheniramine maleate（r＝0.999 9）and 0.326 5-1.550 9 μg for chloramphenicol（r＝0.999 9）；limit of quantitation was 3.17，1.50，2.33 ng，limit of detection was 0.95，0.45，0.70 ng；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 2%；recoveries were 98.29%-100.10%（RSD＝0.64%，n＝9），98.04%-100.70%（RSD＝0.80%，n＝9）and 98.02%-99.81%（RSD＝0.70%，n＝9），respectively.CONCLUSIONS：The method is accurate with high precision，and can be used for the simultaneous determination of lidocaine hydrochloride，chlorpheniramine maleate and chloramphenicol in Kemin cream.

Kemin cream；HPLC；Lidocaine hydrochloride；Chlorpheniramine maleate；Chloramphenicol；Content determination

R917

A

1001-0408（2016）33-4725-03

2015-11-30

2016-08-10）

＊主管藥師，碩士。研究方向：醫院藥學。電話：0898-66151101。E-mail：41802931@qq.com

#通信作者：主管藥師，碩士。研究方向：藥劑學。電話：0431-86933827。E-mail：wangxujlu@foxmail.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.33.39