龐素秋,王國權,孫愛靜(.華僑大學生物醫學學院,福建泉州 360;.解放軍第80醫院臨床藥學科,福建泉州 36000)
構樹果實化學成分的分離與鑒定
龐素秋1,2*,王國權1,孫愛靜2(1.華僑大學生物醫學學院,福建泉州 362021;2.解放軍第180醫院臨床藥學科,福建泉州 362000)
目的:對構樹果實進行化學成分分離及鑒定。方法:將構樹果實的95%乙醇提取物經不同極性溶劑(石油醚、乙酸乙酯)依次萃取,萃取部位再經硅膠柱層析、薄層層析、Sephadex LH-20柱層析和重結晶等方法進行分離純化,根據化合物的理化性質和光譜數據鑒定其化學結構。結果:從各萃取部位中分離鑒定出了11個化合物,分別為化合物1(大黃素甲醚)、2(芹菜素)、3(芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷)、4(槲皮素)、5(β-胡蘿卜苷)、6(胡蘿卜苷棕櫚酸酯)、7(棕櫚酸乙酯)、8(δ-生育酚)、9(亞油酸)、10(葉綠醇)、11(棕櫚酸)。其中,化合物2~4、7~11均為首次從構樹果實中分離得到。結論:本研究進一步明確了構樹果實的化學成分,可為中藥楮實子藥理活性的物質基礎研究提供科學依據。
構樹果實;化學成分;分離;萃??;鑒定;黃酮;芹菜素
構樹Broussonetia papyrifera(L.)Vent.為桑科構屬直立落葉喬木,其果實、樹葉、枝條、莖皮部乳汁和根皮均可入藥,有補腎利尿、健胃、消炎、涼血止血之功效[1-2]。構樹的干燥成熟果實為傳統中藥楮實子(Broussonetiae Fructus),以補腎入藥應用已有幾千年的歷史,在《神農本草經》《名醫別錄》中均將其列為上品[3]。在我國中醫臨床治療史上,楮實子用于治療老年癡呆癥有較好療效;實驗也證明其水溶性粗提取物能顯著改善衰老模型小鼠的學習記憶能力[4]。前期筆者已對構樹果實的化學成分進行了系統研究,并從正丁醇部位分離鑒定了5個異喹啉類生物堿[5-6],本次試驗則對其石油醚和乙酸乙酯部位進行分離鑒定,以進一步明確構樹果實的化學成分,為中藥楮實子藥理活性的物質基礎提供科學依據。
1.1 儀器
A2003A電子分析天平(上海精天電子儀器有限公司);SP-752PC紫外-可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司);N-1200BV-WD旋轉蒸發儀(日本東京理化器械株式會社);KQ5200E超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);XT4B熔點儀(北京市科儀電光儀器廠);Hitachi275-50P紅外分析儀(日本日立公司);UV-2100紫外-可見分光光度計(上海尤尼柯公司);VG AutoSpec-3000質譜儀(英國Micromass公司);Bruker400核磁共振儀(瑞士Bruker公司)。
1.2 藥材與試劑
構樹果實樣品于2014年8月采自福建泉州清源山,性狀特征參照文獻[1-2]描述,經第二軍醫大學生藥教研室黃寶康教授鑒定為??浦参飿嫎涞某墒旃麑?。采集紅熟的果實(注意勿使其損傷或果汁流失)盡快帶回實驗室,用潔凈的去離子水將果實表面清洗干凈,靜置瀝干多余的水分后放入70℃的電熱恒溫鼓風干燥箱中干燥至恒質量。樣品自然冷卻,粉碎,置于干燥器中保存,備用。
試驗所用試劑均為化學純或分析純。
1.3 其他試驗用品
硅膠GF254薄層板(青島海洋化工有限公司);柱色譜硅膠G(青島海洋化工有限公司,200~300目);葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(美國Amersham Pharmacia Biotech公司)。
2.1 提取與分離
取構樹果實10 kg,用6倍量95%乙醇加熱回流提取2次,每次2 h,合并提取液,用旋轉蒸發儀減壓濃縮,所得流浸膏加水攪拌分散,依次用石油醚、乙酸乙酯萃取,各萃取液濃縮減壓回收溶劑后得浸膏。
制得乙酸乙酯萃取部位浸膏382 g,干法上硅膠(200~300目,4.5 kg)柱,以不同比例的石油醚-乙酸乙酯(V/V)梯度洗脫進行層析分離,用500 ml收集瓶收集洗脫液,回收溶劑后用薄層色譜法(TLC)鑒定、合并相似流份(用相同的展開劑在TLC上呈現斑點及斑點的化學位移均相同者),共得到7個不同梯度93個洗脫流份,見表1。

表1 不同比例石油醚-乙酸乙酯洗脫所得流份Tab 1 Fractions obtained and eluted by different proportions of aether petroleum to ethyl acetate
流份Fr.A-4(3.1 g)經反復硅膠柱層析分離,用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫得化合物1(11 mg);流份Fr.B-3(2.5 g)經反復硅膠柱層析分離,用石油醚-丙酮梯度洗脫得化合物8(12 mg);流份Fr.D-4經制備薄層[石油醚-乙酸乙酯(4∶1)]得化合物10(13 mg);流份Fr.D-17析出沉淀,反復重結晶得化合物2(23 mg);流份Fr.D-20流份經過Sephadex LH-20柱(甲醇洗脫)分離和反復重結晶得化合物3(16 mg)、化合物4(8 mg);流份Fr.F-9經Sephadex LH-20柱(甲醇洗脫)分離和重結晶純化得化合物5(23 mg)、化合物6(17 mg)。
石油醚萃取部分(207 g)經反復硅膠柱層析分離,用石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮梯度洗脫,得化合物7(22 mg)、化合物9(86 mg)和化合物11(21 mg)。
2.2 結構鑒定
化合物的鑒定主要依據化合物的理化性質和波譜數據完成。理化性質包括化合物形狀、熔點及特征反應等;波譜數據包括紅外光譜(IR)、電子轟擊離子源質譜(EI-MS)、電噴霧電離質譜(ESI-MS)、核磁共振氫譜和碳譜(1H-NMR和13C-NMR)等方法。鑒定結果如下:
化合物1:橘黃色針狀結晶。熔點(mp):200~202℃。EIMS m/z:284[M]+。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.82(1H,Ar-OH),7.48(1H,Ar-OH),7.65(1H,d,J=1.0 Hz,H-5),7.36(1H,d,J=2.6 Hz,H-4),7.05(1H,d,J=1.0 Hz,H-7),6.63(1H,d,J=2.6 Hz,H-2),3.94(3H,s,OCH3),2.42(3H,s,Ar-CH3)。13CNMR(100 MHz,CDCl3)δ:165.22(C-6),121.23(C-4),148.34(C-3),124.45(C-2),108.12(C-5),162.53(C-1),106.85(C-7),166.45(C-8),190.47(C-9),180.31(C-10),135.22(C-11),110.19(C-12),113.57(C-13),22.31(3-CH3),56.09(6-OCH3)。以上數據與文獻[7]報道一致,故鑒定化合物1為大黃素甲醚。
化合物2:黃色顆粒狀結晶。mp:340~342℃。鹽酸-鎂粉反應呈陽性。IR(KBr)νmax(cm-1):3 300,2 950,2 600,1 640,1 600,1 580,1 500,1 400,1 350,1 270,1 160,900,680。ESIMS m/z:270[M+H]+。1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ:12.91(1H,s,5-OH),6.69(1H,s,H-3),6.18(1H,d,J=2.2 Hz,H-6),6.50(1H,d,J=2.2 Hz,H-8),7.91(2H,d,J=8.5 Hz,H-2′,6′),6.96(2H,d,J=8.5 Hz,H-3′,5′)。13C-NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ:164.98(C-2),103.01(C-3),179.94(C-4),160.95(C-5),98.49(C-6),164.11(C-7),93.89(C-8),158.06(C-9),103.74(C-10),120.95(C-1′),128.44(C-2′,6′),116.88(C-3′,5′),160.99(C-4′)。以上數據與文獻[8]報道一致,故鑒定化合物2為芹菜素。
化合物3:黃色粉末(乙酸乙酯)。mp:340~342℃。鹽酸-鎂粉反應呈陽性,三氯化鐵-鐵氰化鉀反應呈陽性,Molish反應呈陽性。IR(KBr)νmax(cm-1):3 436,1 650,1 610,1 568,1 500,1 088,980,833。ESI-MS m/z:431[M-H]-。1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ:12.96(1H,s,5-OH),10.41(1H,s,4′-OH),7.85(2H,d,J=8.5 Hz,H-2′,6′),6.94(2H,d,J=8.5 Hz,H-3′,5′),6.85(1H,d,J=2.6 Hz,H-8),6.78(1H,s,H-3″),6.47(1H,d,J=2.0 Hz,H-6),5.15(1H,d,J=9.0 Hz,H-1″)。13C-NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ:166.31(C-2),105.42(C-3),183.97(C-4),160.41(C-5),100.06(C-6),165.04(C-7),95.95(C-8),161.30(C-9),105.32(C-10),121.91(C-1′),128.16(C-2′,6′),117.11(C-3′,5′),161.82(C-4′),葡萄糖(簡稱Glc)(C-1″-C-6″):101.60(C-1″),74.27(C-2″),77.82(C-3″),69.07(C-4″),76.45(C-5″),62.47(C-6″)。以上數據與文獻[9]報道基本一致,故鑒定化合物3為芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
化合物4:黃色針晶。分子式為C15H10O7。mp:311~313℃。鹽酸-鎂粉反應呈陽性,顯示為黃酮類化合物。IR(KBr)νmax(cm-1):3 402(OH),1 663,1 611(C=O),1 560,1 524。ESI-MS m/z:303[M+H]+。1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ:12.53(1H,s,5-OH),10.85(1H,s,7-OH),9.62(1H,s,3′-OH),9.34(1H,s,3-OH),9.30(1H,4′-OH),7.63(1H,d,J=2.4 Hz,H-2′),7.51(1H,d,J=8.5,2.4 Hz,H-6′),6.82(1H,d,J=8.5 Hz,H-5′),6.33(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.09(1H,d,J=2.0 Hz,H-6)。13C-NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ:146.35(C-2),135.65(C-3),175.55(C-4),156.10(C-5),98.54(C-6),162.59(C-7),93.41(C-8),160.97(C-9),103.05(C-10),121.78(C-1′),114.59(C-2′),145.01(C-3′),147.73(C-4′),115.46(C-5′),119.77(C-6′)。以上數據與文獻[10]報道一致,故鑒定化合物4為槲皮素。
化合物5:白色粉末。mp:290~292℃。ESI-MS m/z:577 [M+H]+,分子式為C35H60O6。Liebermann-Burchard和Molish反應均呈陽性。1H-NMR(400 MHz,C5D5N)δ:6.11(4H,br s,-OH),5.35(1H,br s,H-6),5.07(1H,d,J=7.6 Hz,Glc-H-1′),4.55,3.99(6H,m,H-糖基CH′),0.99(3H,d,J=6.4 Hz,H-29),0.92(3H,s,H-19),0.89(3H,d,J=7.2 Hz,H-21),0.65(3H,s,H-18)。13C-NMR(100 MHz,C5D5N)δ:35.96(C-1),30.03(C-2),77.55(C-3),38.25(C-4),140.35(C-5),122.03(C-6),32.05(C-7),31.81(C-8),49.88(C-9),36.87(C-10),20.88(C-11),40.23(C-12),41.8 6(C-13),56.67(C-14),24.05(C-15),28.94(C-16),56.21(C-17),11.49(C-18),18.82(C-19),36.13(C-20),19.00(C-21),34.27(C-22),27.88(C-23),46.11(C-24),28.85(C-25),19.86(C-26),19.15(C-27),23.04(C-28),12.12(C-29);Glc(C-1′~6′):102.16(C-1′),74.81(C-2′),78.77(C-3′),70.17(C-4′),77.61(C-5′),62.19(C-6′)。以上數據與文獻[11]報道基本一致,故鑒定化合物5為胡蘿卜苷。
化合物6:白色粉末。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:5.45(1H,s,H-6),1.28[br s,(CH2)n],1.01(3H,s,CH3),0.79~0.95[m,(CH3)5],0.68(3H,s,CH3)。13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:37.81(C-1),29.74(C-2),79.46(C-3),38.81(C-4),140.22(C-5),122.47(C-6),31.67(C-7),31.88(C-8),50.66(C-9),36.57(C-10),21.26(C-11),39.53(C-12),42.71(C-13),56.64(C-14),24.35(C-15),28.19(C-16),56.26(C-17),11.92(C-18),19.51(C-19),36.09(C-20),19.22(C-21),33.66(C-22),26.09(C-23),45.79(C-24),29.25(C-25),18.17(C-26),19.20(C-27),23.16(C-28),11.29(C-29)。糖部分δ:101.16(C-1′),73.19(C-2′),75.55(C-3′),70.18(C-4′),73.99(C-5′),62.87(C-6′)。脂肪鏈部分δ:174.57(C-1″),34.42(C-2″),24.16(C-3″),29.02~29.87(C-4″~C-14″),22.68(C-15″),14.20(C-16″)。以上數據與文獻[12]報道基本一致,故鑒定化合物6為胡蘿卜苷棕櫚酸酯。
化合物7:白色蠟狀物,可溶于石油醚。mp:24~25℃。TLC點板在碘蒸氣下顯示單一的紅色斑點。EI-MS m/z:284 [M]+,分子式為C18H36O2。1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ:4.31(2H,t,J=6.0 Hz,COOCH2),2.25(2H,t,J=7.8 Hz,CH2COO),1.15(3H,t,J=6.0 Hz,COOCH2CH3),0.88(3H,t,J=7.0 Hz,CH3CH2)。13C-NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ:175.82(C=O),63.52(C-2′),35.36(C-2),31.68,29.66~29.07,27.79,26.62,25.69,22.71,14.19(CH3)。以上數據與文獻[13]報道基本一致,故鑒定化合物7為棕櫚酸乙酯。
化合物8:淡黃色油狀物。EI-MS m/z:402[M]+。1H-NMR(400 MHz,Acetone-d6)δ:6.51(1H,d,J=2.8 Hz,Ar-H),6.29(1H,d,J=2.8 Hz,Ar-H),0.80~0.88(15H,5×CH3)和2.08(3H,s,CH3)。13C-NMR(100 MHz,Acetone-d6)δ:73.69(C-2),30.92(C-3),22.10(C-4),110.41(C-5),121.51(C-6),147.21(C-7),126.76(C-8),117.53(C-9),146.94(C-10),15.25(C-11),22.33(C-12),38.07(C-1′),20.26(C-2′),35.41(C-3′),33.02(C-4′),37.62(C-5′),25.02(C-6′),36.31(C-7′),32.16(C-8′),37.03(C-9′),25.06(C-10′),38.11(C-11′),26.69(C-12′),22.02(C-13′),19.13(C-14′),18.12(C-15′),22.15(C-16′)。以上數據與文獻[14]報道基本一致,故鑒定化合物8為δ-生育酚。
化合物9:淡黃色油狀物。分子式為C18H32O2,EI-MS m/z:280[M]+。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:5.28(4H,m,H-9,10,12,13),2.81(2H,m,H-11),2.26(2H,t,J=6.8 Hz,H-2),2.03(4H,m,H-8,14),1.60(2H,m,H-3),1.18~1.33(14H,m,H-4~7,15~17),0.85(3H,t,J=7.0 Hz,18-CH3)。13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:178.18(C-1),33.29(C-2),25.06(C-3),28.01~30.04(C-4~7),26.92(C-8),128.75(C-9),127.62(C-10),24.13(C-11),130.20(C-12),127.98(C-13),27.11(C-14),29.46(C-15),30.96(C-16),22.05(C-17),13.18(C-18)。以上數據與文獻[15]報道基本一致,故鑒定化合物9為亞油酸。
化合物10:白色無定形粉末。mp:206~208℃。EI-MS m/z:296[M]+。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:1.66(3H,s,H-3a),4.16(2H,d,J=7.2 Hz,H-1),5.40(1H,d,J=5.4 Hz,H-2)。13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:58.96(C-1),124.02(C-2),139.40(C-3),17.02(C-3a),39.69(C-4),25.31(C-5),35.87(C-6),32.26(C-7),19.55(C-7a),38.04(C-8),24.37(C-9),36.45(C-10),31.78(C-11),18.63(C-11a),37.30(C-12),24.58(C-13),39.15(C-14),28.36(C-15),22.56(C-15a),22.67(C-16)。以上數據與文獻[16]報道基本一致,故鑒定化合物10為葉綠醇。
化合物11:白色片狀固體。mp:50~52℃。EI-MS m/z:256[M]+。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:2.52(2H,t,J=7.2 Hz,H-2),1.59(2H,m,H-3),1.29(m,12×CH2),0.88(3H,t,J=7.2 Hz,H-16)。以上數據與文獻[17]報道基本一致,故鑒定化合物11為棕櫚酸。
構樹全身都有較高的價值,其葉、枝、皮、根皮、乳汁、果實都可以作藥用或食用[18]。本研究對構樹果實的乙酸乙酯和石油醚萃取部位經硅膠柱層析、薄層層析、Sephadex LH-20柱層析和重結晶等方法分離純化,根據化合物的理化性質和光譜數據鑒定其化學結構,共分離到11個化合物單體,分別鑒定為大黃素甲醚(1)、芹菜素(2)、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、槲皮素(4)、β-胡蘿卜苷(5)、胡蘿卜苷棕櫚酸酯(6)、棕櫚酸乙酯(7)、δ-生育酚(8)、亞油酸(9)、葉綠醇(10)和棕櫚酸(11),其中化合物2~4、7~11均為首次從構樹果實中分離得到。特別是化合物2、3、4[19-20]均為黃酮類化合物,曾報道在構樹的枝、葉中發現,而在有關構果及中藥材楮實子的化學成分研究中均未見報道。近年來,通過對芹菜素及其相關化合物的研究,發現芹菜素具有抗腫瘤、心腦血管保護、抗病毒、抗菌等多種作用[21]。因此,構果中該類化合物的發現為其臨床表現的多種藥理活性提供了物質基礎。棕櫚酸乙酯(7)、亞油酸(9)、棕櫚酸(11)經氣相色譜-質譜法測到其為楮實子脂肪酸的組分[22],本試驗首次從溶劑萃取部位分離了其單體。
筆者多年一直致力于構樹果實的研究,已發現構樹果實的多個活性部位和成分及生物活性,如構果色素具有抗氧化作用、生物堿具有細胞毒活性等[23-24]。本研究結果對進一步探索傳統的中藥楮實子以補腎入藥的活性部位和機制有一定的參考價值。
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(編輯:劉 萍)
Separation and Identification of Chemical Constituents of Broussonetia papyrifera Fruits
PANG Suqiu1,2,WANG Guoquan1,SUN Aijing1(1.School of Biomedical Sciences,Huaqiao University,Fujian Quanzhou 362021,China;2.Dept.of Clinical Pharmacy,No.180 Hospital of PLA,Fujian Quanzhou 362000,China)
OBJECTIVE:To separate and identify the chemical constituents of Broussonetia papyrifera fruits.METHODS:95%ethanol extracts from B.papyrifera fruits were extracted with different polar solvents as aether petroleum and ethyl acetate in turn.The extract parts were isolated and purified by various chromatographic methods including silica gel,ODS,Sephadex LH-20 and recrystallization.The chemical structure of them were identified according to physiochemical property and spectral data.RESULTS:Eleven compounds isolated from 95%ethanol extracts were identified as compound 1(physcion),compound 2(apigenin),compound 3(apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside),compound 4(quercetin),compound 5(β-daucosterol),compound 6(daucosterol palmitate),compound 7(palmitic acid ethyl ester),compound 8(δ-tocopherol),compound 9(linoleic acid),compound 10(phytol)and compound 11(palmitic acid).Compound 2-4 and compound 7-11 were all isolated from B.papyrifera fruits for the first time.CONCLUSIONS:The study further confirms the chemical constituents of B.papyrifera fruits,and can provide scientific evidence for material base of pharmacological activity of B.papyrifera.
Broussonetia papyrifera fruits;Chemical constituents;Separation;Extraction;Identification;Flavones;Apigenin
R284.1
A
1001-0408(2016)31-4384-04
2016-05-18
2016-08-09)
*副主任藥師,博士。研究方向:醫院藥學。電話:0595-28299781。E-mail:1074730795@qq.com
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.31.20