MLN4924在人乳腺癌小鼠移植瘤模型BR-05-0028中的藥效學研究

楊桂柱 周麗麗 閆少羽 崔 立（上海交通大學農業與生物學院 0040;上海藥明康德新藥開發有限公司 003）

MLN4924在人乳腺癌小鼠移植瘤模型BR-05-0028中的藥效學研究

楊桂柱1，2周麗麗2閆少羽2崔 立1*（1上海交通大學農業與生物學院 200240;2上海藥明康德新藥開發有限公司 200131）

為探討MLN4924聯合X射線放療對人乳腺癌小鼠移植瘤模型BR-05-0028的治療作用，采用病人來源的乳腺癌組織構建動物腫瘤模型，觀察了MLN4924治療對腫瘤細胞生長的影響。結果表明，MLN4924聯合X射線放療能夠明顯抑制BR-05-0028細胞的增殖。H.E染色結果顯示，MLN4924聯合放療對腫瘤組織壞死較少。

MLN4924；X射線放療；乳腺癌；小鼠移植瘤模型BR-05-0028；應用效果

近年來，乳腺癌是一種嚴重危害婦女健康的癌癥，其發病率在全世界范圍內呈逐年上升趨勢，是女性人群主要的惡性腫瘤[1]。MLN4924是新型的NEDD8-活化酶 (NAE)抑制劑[2，3]。為探尋一種新型有效的乳腺癌治療方法，研究了MLN4924聯合X射線放療對乳腺癌的治療作用，現將相關實驗情況報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗設計

本實驗采用病人來源的腫瘤組織接種到免疫缺陷鼠皮下構建實驗模型。共采用BALB/c 裸鼠24只，雌性，體重20-22 g，由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供。隨機平均分為4組，I組為對照組；II組為放療組；III組為MLN4924治療組；IV組為MLN4924聯合放療組，具體實驗設計（見表1）。

表1 實驗組別與給藥設計

1.2 模型制作

將病人來源的乳腺癌樣本接種到小鼠右側腋窩皮下處。待腫瘤長至約130 mm3時進行隨機分組治療。

1.3 觀察指標和測試方法

動物分組給藥后，觀察小鼠健康及活動狀況，監測移植瘤的生長進展，每周2次測量小鼠體重和腫瘤體積。實驗結束時，用CO2將動物安樂死，然后剝取腫瘤，用4%甲醛溶液固定，石蠟包埋并切片，進行H.E染色。

1.4 統計學分析

各組數據以均值±標準誤 (x-±S.E.) 表示，組間比較采用方差分析，所有數據均用SPSS統計軟件進行分析。

2 結果與分析

2.1 體重變化

給藥后，對照組和MLN4924治療組的裸小鼠體重穩步增長，而放療組及MLN4924聯合治療組的裸小鼠體重增長緩慢，相對體重變化率（見表2）。

表2 MLN4924及X射線放療對裸鼠相對體重的影響

2.2 腫瘤體積

與對照組比較，給藥35 d后，MLN4924治療組與對照組間腫瘤體積在統計學上無顯著差異（P＞0.05），而放療組和MLN4924聯合放療組的腫瘤體積明顯小于對照組，與對照組間有極顯著差異(P＜0.01)。結果表明，MLN4924劑量30 mg/kg時對乳腺癌BR-05-0028抗腫瘤作用不明顯，而放療及聯合治療表現出較好的抑制腫瘤作用（見表3）。

表3 MLN4924及X射線放療對裸鼠腫瘤體積的影響

2.3 病理檢測

在鏡下對照組出現腫瘤組織伴有壞死、炎癥細胞浸潤和

腫瘤細胞核多極分裂等現象；放療組出現組織壞死和炎癥細胞浸潤等現象；MLN4924治療組的腫瘤組織壞死較少，可見炎癥細胞，同時腫瘤組織有纖維化傾向；MLN4924聯合放療組的腫瘤組織壞死較少（見圖1）。

圖1 BR-05-0028乳腺癌裸鼠移植瘤病理切片(HEX400)

3 結論與討論

MLN4924是一種新型NAE抑制劑，可通過結合并失活NEDD8活化酶的方式殺死癌細胞，在對肺癌[4]、胰腺癌[5]動物模型的治療過程中表現出較好的治療作用。為降低單一放療對機體產生的副作用[6]，本實驗利用病人來源的乳腺癌瘤塊接種至BALB/c裸鼠皮下建立模型，通過MLN4924聯合X射線放療，在減少放療對機體損傷的基礎上，保證了對癌細胞的殺傷。結果表明，MLN4924劑量30 mg/kg作為增敏劑聯合X射線放療（1Gy）能有效抑制腫瘤細胞的增殖，同時對裸鼠體重沒有產生明顯的影響，且H.E染色結果顯示，MLN4924聯合放療組的腫瘤組織壞死較少。

本研究采用的病人來源瘤塊接種建模方法[7]，較傳統的細胞系懸液接種法更能保持腫瘤細胞原有的生物學特性[8]，有利于真實呈現原生腫瘤的生理環境和病理狀態，使模型有更好的穩定性及治療的可靠性。

[1] 李樹玲.乳腺腫瘤學[M].北京：科學技術文獻出版社,2000.

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[3] Lijun Jia, Hua Li,Yi Sun.Induction of p21-dependent senescence by an NAE inhibitor, MLN4924, as a mecha nism of growth suppression[J].Neoplasia,2011,13(13):561-569.

[4] 董揚,黎友倫.MLN4924促進人肺癌細胞株A549凋亡的機制研究[J].中國腫瘤臨床,2012,(24):2055-2058.

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2015-12-17

*為通訊作者。