清肺化痰逐瘀湯對慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者T淋巴細胞的干預研究

史 捷 喻 敏 強寧俠

(陜西中醫藥大學附屬醫院呼吸一科，陜西 咸陽 712000)

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清肺化痰逐瘀湯對慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者T淋巴細胞的干預研究

史 捷 喻 敏 強寧俠

(陜西中醫藥大學附屬醫院呼吸一科，陜西 咸陽 712000)

目的 觀察清肺化痰逐瘀湯對慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者肺泡灌洗液(BALF)及血清中T淋巴細胞的干預作用。方法 將60例AECOPD患者隨機分為2組，另選取健康老年人28人作為健康組。對照組30例予西醫常規治療，治療組30例在對照組治療基礎上應用清肺化痰逐瘀湯治療。2組均治療14 d。于治療前及治療結束后第2 d檢測患者BALF液及血清CD4+、CD8+及CD4+/CD8+T淋巴細胞，比較2組療效。結果 總有效率治療組93.33%，對照組76.67%，2組總有效率比較差異有統計學意義(P<0.05)，治療組療效優于對照組。治療組治療后BALF液、血清CD4+、CD4+/CD8+均較本組治療前升高(P<0.05)，CD8+降低(P<0.05)；治療組治療后BALF液、血清CD4+、CD4+/CD8+均高于對照組(P<0.05)，CD8+低于對照組(P<0.05)；治療組治療后BALF液、血清CD4+、CD4+/CD8+均低于健康組(P<0.05)，CD8+高于健康組(P<0.05)；治療組、對照組治療前BALF液、血清CD4+、CD4+/CD8+均低于健康組(P<0.05)，CD8+高于健康組(P<0.05)。結論 AECOPD患者存在細胞免疫功能下降和T淋巴細胞介導的肺部炎性損傷，清肺化痰逐瘀湯聯合西醫常規治療可有效改善癥狀及細胞免疫狀態。

肺疾病，慢性阻塞性；中藥療法；T淋巴細胞

1 資料與方法

1.1 一般資料 全部60例均為我院呼吸科住院患者，隨機分為2組。治療組30例，男18例，女12例；年齡58～83歲，平均(71.63±5.53)歲；病程8～28年，平均(18.20±6.68)年。對照組30例，男17例，女13例；年齡57～84歲，平均(70.63±5.71)歲；病程7～30年，平均(19.00±7.30)年。另選取健康老年人28人作為健康組，男17人，女11人；年齡54～76歲，平均(69.89±5.47)歲。治療組與對照組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性；3組性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 病例選擇

1.2.1 診斷標準 參照世界衛生組織(WHO)公布的COPD診斷標準[4]，并符合咳、痰、喘加重，或出現發熱及呼吸困難等急性加重期條件。

1.2.2 納入標準 ①符合AECOPD診斷標準；②年齡60～80歲，男女不限；③知情同意。

1.2.3 排除標準 ①其他各種疾病所致的呼吸困難；②嚴重的呼吸困難或意識模糊、嗜睡或昏迷需使用機械通氣者；③嚴重的心、肝、腎功能衰竭；④精神疾病；⑤依從性差，不能完成觀察者；⑥1周內使用過糖皮質激素或其他中藥者；⑦自身免疫性疾病、免疫缺陷性疾病，3個月內使用免疫抑制劑者。

1.3 治療方法

1.3.1 對照組 應用西醫常規治療。①持續低流量鼻導管吸氧。②抗感染治療，根據經驗及痰培養結果調整抗生素。③支氣管擴張劑：吸入用硫酸沙丁胺醇溶液(英國葛蘭素史克公司，注冊證號H20140029)2 mg，每日2次氧氣驅動霧化吸入；注射用多索茶堿(陜西博森生物制藥股份集團有限公司，國藥準字H20052407)0.2 g，加入5%葡萄糖注射液100 mL中，每日1次靜脈滴注。④化痰藥物：鹽酸氨溴索注射液(河北愛爾海泰制藥有限公司，國藥準字H20113063)60 mg，加入5%葡萄糖注射液100 mL中，每日1次靜脈滴注。⑤其他治療：糾正水電解質紊亂、補液、營養支持等，病情加重上述藥物可酌情加量。

1.3.2 治療組 在對照組治療基礎上應用清肺化痰逐瘀湯。藥物組成：魚腥草15 g，桑白皮15 g，黃芩10 g，瓜蔞10 g，杏仁10 g，浙貝母10 g，大黃(后下)6 g，厚樸10 g，丹參15 g，水蛭6 g。日1劑，水煎2次取汁300 mL，分早、晚2次服。

優化幼兒園一日活動科學保教實踐活動，是有效提高幼兒學習和成長質量的重要保障，特別是在當前人們對幼兒園教育要求越來越高的背景下，幼兒園工作面臨著非常大的壓力，通過有效優化幼兒園一日活動科學保教工作，能夠讓幼兒園教育工作的開展更為有效。

1.3.3 療程 2組均治療14 d。

1.4 觀察指標 比較治療組、對照組療效；觀察治療組、對照組治療前后及健康組肺泡灌洗液(BALF液)T淋巴細胞變化及血清T淋巴細胞變化。

1.5 BALF液T淋巴細胞收集及方法 ①簽署纖維支氣管鏡知情同意書，操作時吸氧，予心電監測、指脈氧監測。②收集時間：治療前及治療結束后第2 d進行收集。③于雙肺下葉用37 ℃滅菌0.9%氯化鈉注射液進行灌洗，每次20 mL，2個呼吸周期后用50～100 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)負壓吸引回收灌洗液，總量60～100 mL。④BALF液經300目金屬網細胞過濾器過濾去掉雜質和痰液，600 g，5 min離心后棄上清液，再用0.5%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液(PBS)洗脫，再次600 g，5 min離心后棄上清液，再次PBS洗脫第2遍；取BALF液100 L加入20 L熒光抗體，室溫避光孵育20 min，600 g，5 min離心后棄上清，加1∶9配制的溶血素450 L，避光10 min，600 g，5 min離心棄上清，加PBS液洗脫第3遍，600 g，5 min離心后棄上清，加入PBS液500 L重新混勻等待上機。

1.6 血清T淋巴細胞收集及方法 ①收集時間：治療前及治療結束后第2 d進行收集。②用EDTA-K2抗凝管收集患者清晨空腹外周血2 mL，混勻后取50 μL，加入15 μL熒光抗體，室溫避光孵育30 min，加溶血素450 μL，避光10 min，600 g，5 min離心棄上清，加PBS液洗脫離心2遍，棄上清，加入PBS液500 L重新混勻等待上機。

以上抗體均為美國BD公司生產的三色熒光單克隆抗體產品(CD4/CD8/CD3)。

1.7 流式細胞儀測定 按前述預處理的BALF液及血清標本依次上機；上機前調整儀器達到最佳工作狀態，雙色免疫熒光染色，三色熒光/側向散射光設門，用CD3細胞群圈門以排除巨噬細胞、碎片等干擾，調節電壓、閾值，血清標本每管獲取1萬個細胞，BALF標本每管獲取0.2～0.5萬個細胞，建立CD4+CD8-、CD8+CD4-、CD4+CD8+、CD4-CD8-散點圖，分析其表達情況，同時計算CD4+/CD8+比值。以上采用BD FACSCalibur流式細胞儀。

1.8 療效標準 顯效：咳嗽、咯痰消失，喘憋明顯減輕，可從事輕體力勞動；有效：偶有咳嗽、咯痰，靜息狀態下無明顯喘息；無效：癥狀無明顯改善或病情惡化[4]。

2 結 果

2.1 2組療效比較 見表1。

表1 2組療效比較 例

與對照組比較，*P<0.05

由表1可見，2組總有效率比較差異有統計學意義(P<0.05)，治療組療效優于對照組。

2.2 治療組、對照組治療前后及健康組BALF液T淋巴細胞比較 見表2。

治療組(n=30)治療前治療后對照組(n=30)治療前治療后健康組(n=28)CD4+(%)0.348±0.071#0.413±0.057*△#0.358±0.065#0.386±0.0540.455±0.045CD8+(%)0.413±0.075#0.358±0.061*△#0.418±0.065#0.388±0.0570.328±0.042CD4+/CD8+0.904±0.370#1.213±0.374*△#0.907±0.344#1.037±0.3141.428±0.319

與本組治療前比較，*P<0.05；與對照組治療后比較，△P<0.05；與健康組比較，#P<0.05

由表2可見，治療組治療后BALF液CD4+、CD4+/CD8+均較本組治療前升高(P<0.05)，CD8+降低(P<0.05)；治療組治療后BALF液CD4+、CD4+/CD8+均高于對照組(P<0.05)，CD8+低于對照組(P<0.05)；治療組治療后BALF液CD4+、CD4+/CD8+均低于健康組(P<0.05)，CD8+高于健康組(P<0.05)；治療組、對照組治療前BALF液CD4+、CD4+/CD8+均低于健康組(P<0.05)，CD8+高于健康組(P<0.05)。

2.3 治療組、對照組治療前后及健康組血清T淋巴細胞比較 見表3。

表3 治療組、對照組治療前后及健康組血清T淋巴細胞比較

治療組(n=30)治療前治療后對照組(n=30)治療前治療后健康組(n=28)CD4+(%)0.449±0.071#0.513±0.057*△#0.458±0.065#0.486±0.0540.555±0.045CD8+(%)0.514±0.074#0.459±0.062*△#0.518±0.065#0.488±0.0570.428±0.042CD4+/CD8+0.912±0.287#1.155±0.280*△#0.916±0.268#1.021±0.2411.320±0.232

與本組治療前比較，*P<0.05；與對照組治療后比較，△P<0.05；與健康組比較，#P<0.05

由表3可見，治療組治療后血清CD4+、CD4+/CD8+均較本組治療前升高(P<0.05)，CD8+降低(P<0.05)；治療組治療后血清CD4+、CD4+/CD8+均高于對照組(P<0.05)，CD8+低于對照組(P<0.05)；治療組治療后血清CD4+、CD4+/CD8+均低于健康組(P<0.05)，CD8+高于健康組(P<0.05)；治療組、對照組治療前血清CD4+、CD4+/CD8+均低于健康組(P<0.05)，CD8+高于健康組(P<0.05)。

3 討 論

現代醫學認為，AECOPD的發病機制集中在幾個方面：炎癥介質和細胞因子、蛋白酶-抗蛋白酶失衡、氧化/抗氧化失衡、肽類因子與COPD的發病等。成熟的T淋巴細胞可根據其表型不同分為CD4+、CD8+兩大亞群。CD4+分子能輔助B細胞產生抗體和誘導抑制T細胞功能，CD8+分子是早期抗腫瘤、抗感染的細胞，稱為細胞毒性T淋巴細胞，但其數目增高可引起機體損傷；CD4+和CD8+二者相互影響形成T細胞網絡，其中CD4+/CD8+是評價細胞免疫平衡的重要指標之一[5]。本研究結果表明，治療組、對照組治療前與健康組比較，患者CD4+T淋巴細胞下降，CD8+T淋巴細胞上升，CD4+/CD8+下降，存在T淋巴細胞亞群異常，說明機體免疫功能尤其是細胞免疫功能紊亂，與COPD患者的反復感染及病情的發展有密切關系。

除存在上述免疫平衡紊亂外，AECOPD患者T淋巴細胞在氣道持續炎性病變中也發揮重要作用，T淋巴細胞可分泌多種細胞因子，如γ-干擾素(IFN-γ)、腫瘤壞死因子(TNF)-β、白細胞介素(IL)-2、IL-4、IL-5、IL- 6、IL- 9、IL- 10、IL- 13等，這些細胞因子可激活氣道上皮細胞，募集中性粒細胞、巨噬細胞及嗜酸細胞向肺組織浸潤。病理組織學研究顯示，AECOPD的主要炎癥病變在細支氣管和肺實質[6]。AECOPD患者氣道、肺實質、肺血管周圍均有T淋巴細胞浸潤[7]。有研究表明，AECOPD患者CD4+和CD8+T淋巴細胞與肺功能密切相關[8]，T淋巴細胞浸潤與氣流受限程度密切相關[9]；2009年，Cosio MG等提出肺內T淋巴細胞介導的炎癥可在戒煙后持續多年，是COPD發生的關鍵因素[10]。AECOPD炎癥反應中的淋巴細胞改變主要是CD8+T淋巴細胞增多，CD4+/ CD8+比值下降，同時Ⅳ型變態反應增加引起組織、細胞的損傷[11]。

根據AECOPD發病機制，現代醫學對AECOPD的基礎治療一般為吸入表面激素、長效β2受體激動劑、長效M受體抑制劑等以降低炎性細胞、炎性因子、趨化因子等活性，降低氣道炎性反應。但單純現代醫學治療對患者仍有不可逆轉且逐年加重的咳、痰、喘及活動受限，且長期使用抗生素及糖皮質激素易導致機體免疫力下降、細菌耐藥，長期吸入β2受體激動劑、M受體抑制劑易導致相應受體數目減少，功能減低，正是由于單純現代醫學治療AECOPD存在上述局限性及反復性，近年來聯合中醫中藥治療成為了研究熱點。AECOPD屬中醫學肺脹范疇，肺、心、脾、腎氣虛是主要內因，痰、瘀既是AECOPD的病理產物也是致病因素，肺脾腎虛，聚津成痰，伏藏于肺，成為發病“夙根”，痰濕阻肺，郁而化熱，肺氣壅遏不暢，咳喘遂生，肺虛不能調節心血運行，心氣、心陽虛衰，無力運行血脈則血瘀，均提示了肺脹的發生與痰瘀互結、阻礙肺氣有關，故肺熱、痰濕、血瘀為AECOPD的主要病理機制。我們應用清肺化痰逐瘀湯治療肺脹，突出了“急則治其標”，扶正祛邪，強主逐寇，始終抓住“肺熱”“痰濕”“血瘀”“俱虛”的肺脹本質，在論證了清肺化痰逐瘀湯顯著的臨床療效同時，也證實了該方確能降低AECOPD患者肺部及全身炎癥反應。清肺化痰逐瘀湯方中魚腥草、桑白皮、瓜蔞、黃芩、杏仁、浙貝母清熱化痰，止咳平喘；厚樸燥濕降氣平喘，行氣消脹；大黃清熱通腑，泄濁逐瘀；丹參活血化瘀通絡；水蛭破血逐瘀通絡。諸藥合用，共奏清熱泄肺、止咳化痰、通腑泄濁、活血化瘀之效[12]。現代藥理研究表明，黃芩、浙貝母、魚腥草、桑白皮、厚樸、瓜蔞等對多種革蘭陽性及陰性桿菌均有抑制作用，其中魚腥草能提高白細胞吞噬能力[13]；黃芩能通過抑制組胺、白三烯和前列腺素E的生成，減輕氣道炎性反應，還能通過穩定肥大細胞、抑制炎性介質的生成調節免疫，尤其對Ⅳ型變態反應抑制強烈[13]；杏仁苷除抑制咳嗽中樞外，還可通過影響核因子κB表達，發揮抑制免疫過激、平喘作用[13]；浙貝母、厚樸均能拮抗氣管平滑肌M受體，從而擴張氣道[13]；丹參酮可通過抑制5-羥色胺(5-HT)釋放，改善微循環，防止血栓，丹參多酚能降低人基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)表達，抑制氣道炎癥[13]；水蛭有抗凝、清除氧自由基等作用[13]。

本研究結果顯示，2組AECOPD患者治療前CD4+T淋巴細胞均下降，推測該類患者存在輔助性T淋巴細胞缺失，協助B細胞產生抗體和輔助其他淋巴細胞的功能減弱，機體免疫功能低下，從而導致反復感染且不易治愈。CD8+T淋巴細胞上升，推測該類患者CD8+T淋巴細胞過度募集，雖能清除一定的感染細胞，但也加重肺部小氣道炎性反應、Ⅳ型變態反應，從而導致氣流不可逆性受限及肺功能持續下降，CD4+/CD8+下降倒置，說明體內存在細胞免疫功能紊亂。2組治療后CD4+T淋巴細胞上升，CD8+T淋巴細胞下降，CD4+/CD8+上升，且治療組改善更明顯，因此清肺化痰逐瘀湯能改善外周血T淋巴細胞亞群相關指標，調節細胞免疫功能，改善肺部炎癥損傷，可能是其發揮臨床療效的作用機制之一。

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(本文編輯：習 沙)

Intervention study of Qingfei-huatan-zhuyu decoction on T-lymphocyte in patients with acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease

SHIJie,YUMin,QIANGNingxia.

FirstDepartmentofPneumology,HospitalAffiliatedtoShanxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shanxi,Xianyang712000

Objective To observe the effects of Qingfei-huatan-zhuyu decoction on T-lymphocyte of the serum and bronchoalveolarlavage fluid (BALF) in patients with acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease (AECOPD). Methods 60 patients with AECOPD were randomly divided into two groups, another 28 healthy elderly were selected as healthy group. The control group (n=30) received western routine treatment, the treatment group (n=30) received Qingfei-huatan-zhuyu decoction on the basis of control group treatment, continuously treatment for 14 d. The CD4+, CD8+and CD4+/CD8+in serum and BALF before and 2 d after treatment were observed in two groups, and the curative effect was compared. Results The total effective rate in treatment and control group was 93.33% and 76.67%, respectively. The total curative effect in treatment group was superior to that in control group (P<0.05). The CD4+and CD4+/CD8+in serum and BALF after treatment were increased in treatment group (P<0.05), the CD8+was decreased (P<0.05). The CD4+and CD4+/CD8+in serum and BALF after treatment in treatment group were higher than those in control group (P<0.05), and the CD8+was lower (P<0.05). The CD4+and CD4+/CD8+in serum and BALF after treatment in treatment group were lower than those in healthy group (P<0.05), and the CD8+was higher (P<0.05). The CD4+and CD4+/CD8+in serum and BALF before treatment in treatment and control group were lower than those in healthy group (P<0.05), and the CD8+was higher (P<0.05). Conclusion The decrease of cellular immunity function and pulmonary inflammatory injury mediated by T-lymphocyte were existed in AECOPD. The Qingfei-huatan-zhuyu decoction combined with routing western medicine can effectively improve the symptoms and cellular immunity.

Pulmonary; Chronic obstructive; Traditional Chinese herbs therapy; T-lymphocyte

10.3969/j.issn.1002-2619.2016.09.007

史捷(1978—)，女，副主任醫師，碩士。研究方向：中西醫結合治療肺系疾病。

R287；R563.9；R563.905.8；R289.6

A

1002-2619(2016)09-1308-05

2016-02-22)