果蠅Cullin 3基因dsRNA設(shè)計(jì)及RNAi效率檢測(cè)

白廣棟，王夢(mèng)竹，王紅巖，楊 雪，李明月，何倩毓

(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江 大慶 163319)

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果蠅Cullin 3基因dsRNA設(shè)計(jì)及RNAi效率檢測(cè)

白廣棟，王夢(mèng)竹，王紅巖，楊 雪，李明月，何倩毓*

(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江 大慶 163319)

Cullin 3作為Cullin蛋白家族的一員對(duì)調(diào)控細(xì)胞內(nèi)蛋白降解有著重要意義。為便于深入研究果蠅中Cullin 3基因的功能，本實(shí)驗(yàn)對(duì)Cullin 3基因進(jìn)行dsRNA設(shè)計(jì)，并通過(guò)PCR、體外轉(zhuǎn)錄、RNA干擾以及Real-time PCR等方法，檢測(cè)得到該dsRNA的RNAi效率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：Cullin 3基因的dsRNA具有RNA干擾效果。該實(shí)驗(yàn)將為今后研究果蠅Cullin 3基因的功能提供一定的技術(shù)支持。

Cullin 3基因；雙鏈RNA(dsRNA)；E3連接酶；RNA干擾；Real-time PCR

泛素化是蛋白質(zhì)翻譯后重要的一類修飾。蛋白質(zhì)經(jīng)泛素化修飾后最終通過(guò)泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin-proteasome system，UPS)被降解。靶蛋白的泛素化降解一般是在E1活化酶、E2結(jié)合酶以及E3連接酶的共同作用下完成，其中對(duì)特定蛋白的降解主要是由E3連接酶決定。據(jù)目前研究發(fā)現(xiàn)，高等真核生物體內(nèi)共存在1 000多種E3連接酶[1]，主要?jiǎng)澐譃閮纱蠹易澹謩e為HECT(Homologous to E6-AP C-Terminus)家族和RING(Realy Interesting New Gene)家族。由Cullin蛋白等組成的Cullin-RING E3 Ligases(CRL)復(fù)合體，便是RING家族中一員并占有相當(dāng)大的比例。它通過(guò)降解生物體內(nèi)的某些關(guān)鍵蛋白可以精細(xì)調(diào)控細(xì)胞中的許多信號(hào)通路和生理過(guò)程，如DNA復(fù)制、細(xì)胞周期、DNA 損傷修復(fù)、腫瘤抑制、生長(zhǎng)發(fā)育、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)等[2，3]。

CRL復(fù)合體是由含RING結(jié)構(gòu)域的催化亞基(如ROC1、ROC2)、Cullin骨架蛋白、接頭蛋白(如SKP1，ElongB/C，DDB1等)以及底物識(shí)別亞基(如F box，DCAF等)這4個(gè)部分組成。CRL復(fù)合體中所包含的Cullin骨架蛋白的不同決定了構(gòu)成CRL的RING亞基、接頭蛋白以及底物識(shí)別亞基的不同及特定的功能。……