標本保存方法和時間對促腎上腺皮質激素檢測的影響研究

林 江

(江蘇省江陰市人民醫院檢驗科 214400)

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·臨床研究·

標本保存方法和時間對促腎上腺皮質激素檢測的影響研究

林 江

(江蘇省江陰市人民醫院檢驗科 214400)

目的 探討標本的不同保存方法和時間對促腎上腺素皮質激素(ACTH)檢測結果的影響。方法 試驗分3組。1組采集自愿者的乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝血標本2例，將離心血漿分別放置4 ℃冰箱及室溫(20±5)℃保存，在不同的時間點取出標本進行檢測；1組采集自愿者的EDTA抗凝血標本21例，每7例標本分別在冰浴、4 ℃冰箱及室溫條件下保存，在不同的時間點進行離心，檢測血漿ACTH；1組采集自愿者的EDTA抗凝血標本2例，將標本離心后，放4 ℃冰箱及室溫條件下保存，在不同時間點取出一定量上層血漿進行ACTH檢測。結果 血漿標本、不同時間點離心的標本、離心后在不同時間點檢測的標本，在不同時間點及不同保存方法組間檢測結果在24 h內變化差異無統計學意義(P>0.05)。結論 EDTA抗凝標本檢測ACTH時，標本室溫或4 ℃冰箱放置時，在24 h內檢測結果變化相對穩定。

促腎上腺皮質激素； 標本保存； 溫度； 時間

血標本的運送與保存是醫學檢驗分析前質量控制的一部分，特別是對某些激素類檢測項目，此類檢測項目半衰期短，降解快，對標本采集、運送、檢測時間等都有特別要求。促腎上腺皮質激素(ACTH)是由腺垂體分泌、維持腎上腺正常形態和功能的重要激素。按照國際臨床實驗室標準化組織要求，采集ACTH標本應采用冰凍乙二胺四乙酸(EDTA)管，采集后冰浴送檢，低溫離心機分離血漿和血細胞，然后立即用塑料或硅化玻璃分裝冷凍保存或冰凍長期保存[1]。臨床檢測ACTH多采用節律試驗[2]，按8、16、24 h的時間點采樣，因此，臨床標本運送很難按照要求送檢，標本到達檢驗科后也未能立即檢驗。標本運送保存條件、放置時間及檢測的及時性等因素可能對檢測結果造成的影響，一直困擾著臨床和檢驗，而對其檢測結果的影響研究鮮見報道。本研究將對相關影響因素進行分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取門診自愿者6例，其ACTH值在正常參考范圍內；住院患者6例，其中3例患者ACTH值為高值，3例患者ACTH值為低值；本科室自愿者3例，其中ACTH值為正常參考范圍。男8例，女7例，中位年齡32歲。

1.2 儀器與試劑 采用西門子IMMULITE 1000 化學發光檢測儀及儀器配套的ACTH檢測試劑盒。儀器操作嚴格按照儀器操作規程進行。

1.3 方法 (1)取本院門診自愿者3例、高值ACTH住院患者1例、低值ACTH住院患者1例，每人晨采集前臂靜脈血2例各4 mL于EDTA抗凝管中，混勻后即刻低溫離心處理(3 500 r/min，5 min)，取血漿于編號的EP管中，置4 ℃及室溫(20±5)℃環境下存放，分別于0、2、4、8、12、24 h取150 μL血漿按常規方法分別進行ACTH檢測，記錄4 ℃及室溫環境條件下存放不同時間點血漿標本ACTH的檢測結果。(2)準備冰浴，并準備冰浴的EDTA抗凝管，取本科室自愿者3例、高值ACTH住院患者1例、低值ACTH住院患者1例，每人晨采集前臂靜脈血3組7例各2 mL于EDTA抗凝管中，混勻后置冰浴、4℃及室溫(20±5)℃環境下存放，分別于0、2、4、8、12、24 h各取1例血標本低溫離心處理，按常規方法進行ACTH檢測，記錄冰浴、4 ℃及室溫環境條件下不同時間點分離血漿標本ACTH的檢測結果。(3)取本院門診自愿者3例、高值ACTH住院患者1例、低值ACTH住院患者1例，每人晨采集前臂靜脈血2例各4 mL于EDTA抗凝管中，混勻后即刻離心，分別置4 ℃及室溫(20±5)℃環境下存放，分別于0、2、4、8 、12、24 h取出150 L血漿進行ACTH檢測，記錄4 ℃及室溫環境條件下不同時間點血漿標本ACTH的檢測結果。

2 結 果

2.1 不同保存方法血漿標本放置時間對ACTH結果的影響 EDTA抗凝標本檢測ACTH，分離后得到的血漿標本在室溫(20±5)℃及4 ℃放置到24 h時，各組間檢測結果比較差異無統計學意義(F=0.135，P=0.729)。室溫組與4 ℃組間檢測結果比較差異無統計學意義(F=1.689，P=0.290)。見表1。

表1 不同保存方法血漿標本放置時間對ACTH結果的影響

2.2 不同保存方法在放置時間點分離血漿對ACTH檢測結果的影響 EDTA抗凝標本檢測ACTH，冰浴放置、4 ℃放置、室溫放置的標本到24 h在不同時間點分離血漿，各組間檢測的結果比較差異無統計學意義(F=2.750，P=0.110)。4 ℃放置、室溫放置與冰浴放置檢測結果間比較差異無統計學意義(F=6.503，P=0.061)。見表2。

表2 不同保存方法在放置時間點分離血漿檢測對ACTH結果的影響

2.3 不同保存方法離心后不同時間點檢測對ACTH結果的影響 EDTA抗凝標本檢測ACTH項目時，標本離心分離后，分別在室溫(20±5)℃及4 ℃放置到24 h時，不同時間點檢測，各組間檢測的結果變化差異無統計學意義(F=6.063，P=0.057)。室溫放置的標本呈下降的趨勢，4 ℃組的結果無趨勢性變化，但是各組間檢測結果比較差異無統計學意義(F=1.381,P=0.428)。見表3。

表3 不同保存方法下離心后不同時間點檢測對ACTH結果的影響

3 討 論

ACTH是脊椎動物腦垂體分泌的一種多肽類激素，含39個氨基酸，相對分子質量為4 500×103。其增高可見于原發性腎上腺皮質功能減退癥、異位ACTH綜合征、庫欣癥、Nelson綜合征、先天性腎上腺皮質增生癥等[3]。ACTH降低可見于垂體前葉功能減退癥、腎上腺皮質腺瘤或癌、單純性ACTH缺乏綜合征、醫源性ACTH減少等[4]。ACTH的臨床意義越來越引起臨床重視，開展此項目的醫院也越來越多，而多數實驗室人員專注于分析階段的質量保證，而分析前階段的質量環節還存在許多問題值得探討[5]。

分析前檢驗標本質量是目前影響檢驗結果的最大不確定因素[6]。采用放免競爭法檢測ACTH的結果不穩定，體現了ACTH免疫原性低、儲存穩定性較差、半衰期短及不同抗原決定族的位阻競爭等特性，通常要求標本立即分離、收集血漿，并儲存在-20 ℃條件下。多數醫院已淘汰放免方法檢測ACTH，多采用雙抗體夾心化學發光法檢測。采用新的檢測技術及標記方法，大大提高了檢測敏感性和特異性，對標本的要求不再過分苛刻。有研究證明，ACTH在血漿中可穩定較長時間。本研究通過研究標本不同貯存條件及處理時間，分析其對ACTH檢測結果的影響，并期在保證分析前質量控制時，找到適合ACTH測定標本的試驗前預處理便利方法。有關標本運送及保存對ACTH的影響報道不多。Evans等[7]在研究抗凝血漿于不同保存溫度下檢測激素類項目標本的穩定性時指出，采用放射免疫法檢測ACTH，采用EDTA抗凝管，標本在4 ℃保存時在18 h內的檢測結果穩定，在30 ℃保存時結果可穩定8 h。

本研究在考慮標本受儲存方式及時間影響的同時，也考慮到標本檢測結果可能會受到血細胞影響。研究中，首先立即離心分離采集的EDTA血標本，將分離出的血漿分別放置于4 ℃冰箱及室溫(20±5)℃保存，在不同的時間點取出進行檢測，并與初次檢測結果比較，發現檢測結果差異無統計學意義。其次，觀察EDTA抗凝標本在冰浴、4 ℃冰箱及室溫保存條件下，于不同時間點進行離心檢測血漿ACTH，并將檢測結果與初次檢測結果比較，發現不同組間、不同時間點間的結果差異無統計學意義。最后，觀察EDTA抗凝標本離心后，于不同時間點取出一定量血漿進行ACTH檢測，結果顯示不同時間比較差異無統計學意義。

質量的管控貫穿于患者采樣前準備、標本采集、保存、運送等多個過程[8]。影響ACTH檢驗的可能因素較多，本試驗重點研究了標本采用不同處置方式時標本放置時間對檢測結果的影響，發現EDTA抗凝血漿的標本檢測ACTH時，標本室溫或4 ℃冰箱放置在24 h內檢測結果相對穩定。筆者認為，目前采用西門子IMMULITE 1000 化學發光檢測儀及配套試劑檢測ACTH時，標本已不需要冰浴保存送檢，在24h內檢測可室溫送檢。但需注意，離心后室溫放置的標本，在24 h內的變化差異無統計學意義，但血漿檢測結果呈下降趨勢，放置時間越長，下降幅度越大。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.22.047

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1673-4130(2016)22-3205-03

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