瀾滄江水生絲孢菌資源調(diào)查*

保旦鳳，唐松明，王如瀟，蘇錫鈞，蘇鴻雁

(1.大理大學農(nóng)學與生物科學學院，云南 大理 671003；2.大理大學基礎醫(yī)學院,云南 大理 671000)

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瀾滄江水生絲孢菌資源調(diào)查*

保旦鳳1，唐松明2，王如瀟2，蘇錫鈞2，蘇鴻雁*

(1.大理大學農(nóng)學與生物科學學院，云南 大理 671003；2.大理大學基礎醫(yī)學院,云南 大理 671000)

目的：對瀾滄江(中排鄉(xiāng)北-云嶺鄉(xiāng)北，海拔1554m―2003m)水生絲孢菌資源及其多樣性進行調(diào)查。方法：2015年3月從瀾滄江支流及入江口采集沉水腐木700份，采用保濕培養(yǎng)的方法對水生真菌進行培養(yǎng)，基于形態(tài)學特征對水生絲孢菌進行鑒定。結(jié)果：分離獲得水生絲孢菌88種，通過形態(tài)學鑒定，鑒定出水生絲孢菌36屬58種，30種鑒定到屬，未鑒定到種。結(jié)論：瀾滄江水生絲孢菌資源豐富，物種多樣性較高，其中Sporoschismasaccardoi(1.86%)、Periconiaatra(1.86%)出現(xiàn)頻率相對較高。海拔對水生絲孢菌多樣性有影響。

水生絲孢菌；瀾滄江；資源調(diào)查；多樣性

1.前言

淡水真菌(Freshwater fungi)是指整個生活史或生活史部分階段依賴于淡水環(huán)境的真菌，是一個生態(tài)復合群，具有豐富的多樣性[1]。它包含子囊菌及其無性型、擔子菌、壺菌、卵菌、接合菌等[2]。水生真菌在有機物降解和水生生態(tài)系統(tǒng)營養(yǎng)循環(huán)中起著重要作用[3,4]，主要是分解水體中植物殘體、纖維素和木質(zhì)素含量高的有機質(zhì)，并被水生動物取食進入食物鏈[5,6,7]，亦可以分解一些動物組織。水生木棲真菌在木材分解過程中很重要，因為他們產(chǎn)生各種木材分解酶從而使木頭形成軟腐洞[4,6,8]。

絲孢類真菌(Hyphomycetes)是一類菌絲體發(fā)達，呈絮狀或絨狀，有絲分裂產(chǎn)孢的真菌，是無性真菌中的重要的類群[9]。絲孢真菌菌絲體發(fā)達，有絲分裂產(chǎn)生分生孢子，生存環(huán)境較為廣泛，特別是凋落的腐枝葉中蘊含著大量的絲孢菌物種資源。自從Igold在1942年首次報道了水生絲孢菌后，引起了世界上的真菌學家的極大興趣和廣泛研究。我國水生真菌的研究始于20世紀80年代。楊發(fā)蓉在研究云南“洱海湖體真菌類群分布的研究”中，曾發(fā)現(xiàn)一種水生絲孢菌—剛毛枝孢，這是我國水生絲孢菌報道的首例[10]。直到本世紀，蔡磊[11]、胡殿明[12]、蘇鴻雁[13]等人對云南部分地區(qū)淡水真菌進行研究，才報道了大量的子囊菌及其無性型。到2008年為止，已報道的水生絲孢菌有300多個種，分布在100多個屬內(nèi)[14]。

瀾滄江-湄公河全長約4900公里，流經(jīng)柬埔寨、越南、老撾、緬甸、泰國和我國云南省，上游瀾滄江，發(fā)源于青藏高原的唐古拉山，流出中國后始稱湄公河(Mekong River)。該區(qū)域總面積256.86萬平方公里，總?cè)丝诩s3.2億。瀾滄江地處全球34個生物多樣性熱點地區(qū)，是歐亞大陸生物群落最富集的地區(qū)。而迄今為止，還沒有學者對瀾滄江水生絲孢菌資源進行過全面的調(diào)查。本項目主要對部分瀾滄江段(中排鄉(xiāng)北-云嶺鄉(xiāng)北，海拔1554m―2003m)水生絲孢菌資源及其多樣性進行調(diào)查分析。

2.材料和方法

2.1沉水腐木的采集

2015年3月分別沿瀾滄江(中排鄉(xiāng)北-云嶺鄉(xiāng)北，海拔1554m―2003m)下游往上游隨機采集腐木，選擇浸泡時間較長，腐爛程度良好(以手指可以輕松捏陷、樹皮脫落)，直徑1-5厘米、長20-30厘米的腐木各50份。采集好的腐木裝入自封塑料袋中，記錄采樣時間、地點，帶回實驗室進行保濕培養(yǎng)。

2.2培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂18g，蒸餾水1000mL。

MEA培養(yǎng)基:麥芽浸膏30g，大豆蛋白胨3g，瓊脂18g，蒸餾水1000mL。

WA培養(yǎng)基:瓊脂條18g，蒸餾水1000mL。

以上培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌(121℃, 20min)后冷卻至50℃(以不燙手為宜)時加入終濃度為100μg/mL氨芐青霉素混勻，倒入平板備用。

2.3樣品的觀察

保濕培養(yǎng)一周后，將樣品置于GL-99BI連續(xù)變倍體視鏡下進行觀察，在所觀察到的目標菌株附近插上大頭針作為標記。對所觀察到的絲孢菌用Nikon-SMZ1000進行外部形態(tài)拍照。以無菌水、甘油等作為浮載劑，對所觀察到的真菌進行制片，在OLYMPUS BX51顯微鏡下進行繪圖、拍照、測量。

2.4水生絲孢菌的單孢分離

在體式鏡下鎖定目標菌株，用削尖的無菌牙簽將分生孢子挑取下來，轉(zhuǎn)移到WA培養(yǎng)基上，保證每皿至少有7個分生孢子。室溫培養(yǎng)，24h后進行觀察，將萌發(fā)的孢子轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基或MEA培養(yǎng)基上，用保鮮膜封口，室溫培養(yǎng)；同時挑取萌發(fā)的孢子制片，用OLYMPUS BX51顯微鏡拍照。以上操作均在無菌條件下進行。每周定期檢查菌落的生長情況，若發(fā)現(xiàn)污染及時純化。

2.5拼圖

使用Photoshop軟件對菌種的外部形態(tài)和微觀結(jié)構(gòu)圖片進行拼圖。

2.6形態(tài)學鑒定

對真菌在基質(zhì)上的著生情況、菌絲、孢子梗、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)、分生孢子著生情況及分生孢子形態(tài)等特征進行描述，根據(jù)形態(tài)特征進行分類，主要參照相關(guān)文獻[15-17]。

3.結(jié)果與討論

3.1瀾滄江水生真菌多樣性

對采集的700份沉水腐木在實驗室進行保濕培養(yǎng)，一周后開始不間斷觀察，采用形態(tài)學分類方法進行分類鑒定，鑒定出水生絲孢菌36屬58種，其中30種鑒定到屬，未鑒定到種。瀾滄江中常見種為Sporoschismasaccardoi、Periconiaatra，檢出率分別為1.86%，1.86%。水生絲孢菌的結(jié)果統(tǒng)計如表1所示。

3.2瀾滄江水生絲孢菌各海拔內(nèi)的分布情況

由表2可以看出海拔在1500―1600m之間的水生絲孢菌有13屬18種，分別占總檢出屬數(shù)和總檢出種數(shù)的14.44%和14.4%，1600―1700m間有36屬53種，分別占總檢出屬數(shù)和總檢出種數(shù)的40%和42.4%，1700―1800m間有27屬37種，分別占總檢出屬數(shù)和總檢出種數(shù)的30%和29.6%，1800―1900m間有9屬12種分別占總檢出屬數(shù)和總檢出種數(shù)的10%和9.6%，1900―2000m間有5屬5種，分別占總檢出屬數(shù)和總檢出種數(shù)的5.56%和4%。由該數(shù)據(jù)可以看出1600―1700m之間的水生絲孢菌多樣性最為豐富，1900―2000m之間水生絲孢菌多樣性最低。

表1 瀾滄江水生絲孢菌資源調(diào)查結(jié)果統(tǒng)計

(注：檢出率指被檢樣本總數(shù)中某物種出現(xiàn)的百分率，檢出率(%)=(某個物種檢出次數(shù)/樣本總數(shù))×100%。)

表2 瀾滄江水生絲孢菌各海拔內(nèi)的分布情況

3.3討論

影響水生真菌群落及其多樣性的因素有很多，如溫度[18]、植被[19―20]、氣候帶[21―23]、水污染[20]、人為干擾[24]、真菌生長基質(zhì)[25]等。此次研究選取的為瀾滄江不同海拔的地點，共鑒定出水生絲孢菌36屬58種，30種鑒定到屬，未鑒定到種，其中常見種為Sporoschismasaccardoi、Periconiaatra，檢出率分別為1.86%，1.86%。通過數(shù)據(jù)分析，海拔為1600―1700m之間的水生絲孢菌的多樣性最為豐富，1900―2000m之間的水生絲孢菌多樣性最低，說明不同海拔水生絲孢菌多樣性不同，而且不同海拔的群落結(jié)構(gòu)也不同，這和Sherear[26]2015年的研究結(jié)果一致。

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(責任編輯 徐成東)

Investigation on the Resources of Freshwater Hyphomycetes from the Lancang River

BAO Danfeng, TANG Songming, WANG Ruxiao, SU Xijun & SU Hongyun

(CollegeofAgricultureandBiologicalSciences,DaliUniversity,Dali, 671003,YunnanProvince;CollegeofAgricultureandBiologySciences,DaliUniversity,Dali, 671000,YunnanProvince)

Objective: To investigate diversity and resourses of hyphomycetes in Lancang River(middle row rural North-North Yunling Township, altitude 1554m-2003m). Method: In March 2015 collected from tributaries of the Lancang River and the estuary submerged rotten wood 700 samples, using the moisturizing incubation method to incubate the freshwater hyphomycetes and identified them under the morphological characters. Results: Isolated hyphomycetes 88 kinds of raw silk cinerea, under the morphological characters, the investigation indicated that there are 36 genera 58 species of hyphomycetes, 30 species not identified . Conclusion: The rich resources of Lancang River Hyphomycetes silk cinerea, highspecies diversity,whichSporoschismasaccardoi,Periconiaatrafrequency of relatively high detection rate of 1.86%, 1.86% respectively. Altitude of raw silk water sp diversity affected

Lancang River; Hyphomycetes; Resourse investigated; Diversity

國家自然科學基金項目，項目編號：31460015；云南省中青年學術(shù)技術(shù)帶頭人后備人才培養(yǎng)計劃資助項目，項目編號：2012HB-042。

2016 - 06 - 07

保旦鳳(1994―)，女，在讀本科生，研究方向：微生物及疾病。

蘇鴻雁(1967―)，女，教授，研究方向：菌物學。

Q949.323.2

A

1671 - 7406(2016)09 - 0033 - 06