磺胺甲唑聯(lián)合抗結(jié)核藥物對結(jié)核桿菌的體外抑菌作用

文強(qiáng)，張紅，馬云波

(臨沂市人民醫(yī)院，山東臨沂276000)

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文強(qiáng)，張紅，馬云波

(臨沂市人民醫(yī)院，山東臨沂276000)

1 材料與方法

1.1 材料 實驗菌株：結(jié)核桿菌菌株29株，均從結(jié)核病患者痰液中分離；標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核桿菌菌株(H37Rv ATCC27924)1株，購自衛(wèi)生部臨床檢驗室。96孔板，美國Corning公司。SMX、甲氧芐啶(TMP)、鏈霉素(S)、H、利福平(R)、乙胺丁醇(E)、卡那霉素(Km)、氧氟沙星(Ofx)、利福布丁(Rfb)，美國Sigma公司。二甲基甲酰胺(DMF)、吐溫-80及氫氧化鈉，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 藥物敏感試驗 采用絕對濃度法。從痰液中分離結(jié)核桿菌，標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)；挑取結(jié)核桿菌菌落，置于玻璃磨菌器內(nèi)，研磨后加0.5%吐溫-80生理鹽水稀釋，配制成1 mg/mL菌懸液；進(jìn)一步稀釋10倍后，取0.1 mL接種于含藥培養(yǎng)基(SMX、TMP、S、H、R、E、Km、Ofx、Rfb絕對濃度法專用培養(yǎng)基)及對照培養(yǎng)基(不含藥)中，培養(yǎng)4周觀察結(jié)果。如結(jié)核菌落生長“+”及以上為耐藥。其中多重耐藥(MDR，對以上2種或以上抗結(jié)核藥同時耐藥)菌株6株、非MDR株 9株、敏感株15株。

1.2.2 抗結(jié)核藥最低抑菌濃度(MIC)確定 采用微孔板Alamar blue法，具體步驟參照文獻(xiàn)[10～12]，藥物終濃度：SMX為0.63～160 μg/mL；TMP為0.125～32 μg/mL； TMP ∶SMX=1 ∶19時為0.03/0.6～4/76 μg/mL；R為0.07～8.00 μg/mL；H為0.013～1.600 μg/mL；S為0.13～16.00 μg/mL；E為0.31～40.00 μg/mL；Km為0.31～40.00 μg/mL；Ofx為0.13～16.00 μg/mL；Rfb為0.03～4.00 μg/mL。SMX、TMP、R、Rfb用DFM溶解，H、S、E、Km用水溶解，Ofx用1%氫氧化鈉溶解。根據(jù)藥物終濃度中最高濃度基數(shù)進(jìn)行2倍稀釋，每種藥物包括8個濃度梯度，每種藥物濃度重復(fù)2孔。同一濃度梯度下，每個菌株均取1個陽性對照孔(不含藥物，只含菌液)和1個陰性對照孔[只含7H9(米氏)分枝桿菌培養(yǎng)基，不含藥物和菌液]，各菌株平行測定2次。在陽性對照孔中加入吐溫-80及Alamar blue的混合液孵育24 h，由藍(lán)色變?yōu)榉奂t色后，在各藥物孔中加入上述混合液，孵育24 h，觀察顏色變化，粉紅色為生長，藍(lán)色為不生長。阻止顏色(由藍(lán)色變?yōu)榉奂t色)變化的最低藥物濃度，即為MIC。SMX與S、H、R、E、Km、Ofx、Rfb聯(lián)合用藥時的MIC同法測定。

1.3 藥物相互作用效果判定 藥物相互作用以分級抑菌濃度(FICI)表示，F(xiàn)ICI=甲藥聯(lián)用MIC/甲藥單用MIC+乙藥聯(lián)用MIC/乙藥單用MIC(SMX為甲藥，其他抗結(jié)核藥物為乙藥)，F(xiàn)ICI≤0.5為協(xié)同作用，0.5

2 結(jié)果

2.1 結(jié)核桿菌對TMP ∶SMX=1∶19、SMX、TMP的體外MIC 見表1。

表1 結(jié)核桿菌對TMP∶SMX=1∶19、SMX、TMP的體外MIC(μg/mL)

2.2 不同濃度SMX、TMP對結(jié)核桿菌的抑制作用 見表2。

表2 不同濃度SMX、TMP對結(jié)核桿菌的抑制作用(株)

2.3 SMX聯(lián)合抗結(jié)核藥物的藥物相互作用效果 見表3。SMX與抗結(jié)核藥物對標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv的藥物相互作用：SMX+S、SMX+R主要為相加作用，SMX+Rfb主要為協(xié)同作用，SMX+H、SMX+E、SMX+Km、SMX+Ofx主要為無關(guān)作用。SMX與抗結(jié)核藥物對29株結(jié)核桿菌的藥物相互作用效果見表3。

表3 SMX聯(lián)合抗結(jié)核藥物對29株結(jié)核桿菌菌株的藥物相互作用效果(株)

3 討論

近年來隨著MDR-TB的出現(xiàn)，結(jié)核病的防治形勢越來越嚴(yán)峻。S、R、E、H是一線抗結(jié)核藥物，但目前其治療效果并不理想。國外有研究發(fā)現(xiàn)，初治結(jié)核患者對以上藥物耐藥率分別為27.7%、6.7%、4.9%、16.0%；復(fù)治患者耐藥率分別達(dá)37.2%、29.4%、17.2%、38.5%[9]。因此，尋找新的抗結(jié)核藥物成為研究熱點(diǎn)。磺胺類藥物問世已有半個世紀(jì)，其為人工合成的氨苯磺胺衍生物，抗菌譜廣，藥物價格低廉，最初主要用于感染性疾病的治療。隨著新型抗菌藥物的臨床研發(fā)，磺胺類藥物在臨床上的應(yīng)用逐漸減少。近年研究發(fā)現(xiàn)，磺胺類藥物可抑制結(jié)核桿菌生長，其與TMP制成復(fù)方制劑(復(fù)方新諾明)抑菌效果更好[13～15]。本研究觀察了TMP、SMX對結(jié)核桿菌的體外抑菌活性，結(jié)果顯示，TMP∶SMX=1∶19時，MDR株的MIC與非MDR株、敏感株接近；TMP的MIC無論是否為MDR株均較高；SMX的MIC≤30 μg/mL時，對5株MDR株、8株非MDR株、14株敏感株有抑制作用，表明MIC≤30 μg/mL是SMX較為適宜的體外抑菌濃度，且與是否為MDR無關(guān)；TMP>30 μg/mL時，對6株MDR株、9株非MDR株、9株敏感株有抑制作用，表明TMP對結(jié)核桿菌的體外抑菌活性較低。

目前臨床上抗結(jié)核治療多采用聯(lián)合用藥[16]。本研究發(fā)現(xiàn)，對標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv，SMX+Rfb為協(xié)同作用，SMX+H、SMX+E、SMX+Km、SMX+Ofx均為無關(guān)作用，表明上述聯(lián)合用藥對單一菌株的抑菌活性以無關(guān)作用為主。SMX與抗結(jié)核藥物聯(lián)用對29株結(jié)核桿菌的藥物相互作用顯示，SMX+S、SMX+H、SMX+R、SMX+E、SMX+Ofx等多表現(xiàn)為無關(guān)作用及拮抗作用，僅SMX+Rfb主要表現(xiàn)為協(xié)同作用及相加作用。

綜上所述，SMX單獨(dú)使用對結(jié)核桿菌的體外抑菌活性較好，但TMP單獨(dú)使用體外抑菌效果較差，SMX聯(lián)合Rfb時具有明顯協(xié)同作用，聯(lián)合其他抗結(jié)核藥物多表現(xiàn)為無關(guān)作用。

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臨沂市科技發(fā)展計劃項目(201113018)。

馬云波(E-mail： wagfsx@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.40.031

R521

B

1002-266X(2016)40-0091-03

2015-12-19)