食管鱗癌組織MMP-10、RKIP表達及意義

趙一帆，肖春陽，張瑜紅，冼磊

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧530021)

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食管鱗癌組織MMP-10、RKIP表達及意義

趙一帆，肖春陽，張瑜紅，冼磊

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧530021)

目的 探討基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)和Raf激酶抑制蛋白(RKIP)在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 選擇食管鱗癌組織及癌旁正常組織各92例份,采用免疫組化兩步法檢測MMP-10、RKIP表達；分析MMP-10、RKIP表達與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系及MMP-10表達與RKIP表達的關(guān)系。結(jié)果 食管鱗癌組織MMP-10陽性表達率高于癌旁正常組織，RKIP陽性表達率低于癌旁正常組織(P均<0.05)。食管鱗癌組織MMP-10陽性表達與患者性別、年齡、組織分化程度無關(guān)(P均>0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤浸潤程度有關(guān)(P均<0.05)；RKIP陽性表達與患者性別、年齡、組織分化程度、TNM分期、腫瘤浸潤程度無關(guān)(P均>0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。食管鱗癌組織MMP-10陽性表達與RKIP陽性表達呈負相關(guān)(r=-0.372，P<0.05)。結(jié)論 食管鱗癌組織MMP-10高表達、RKIP低表達；二者表達變化可促進食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展。

食管鱗癌；基質(zhì)金屬蛋白酶10；Raf激酶抑制蛋白；免疫組化

臨床研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織中抑癌基因的缺失與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)能降解細胞外基質(zhì)成分，與腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)[1]，目前已發(fā)現(xiàn)其在食管癌、肝癌、肺癌等組織中高表達，并與其潛在惡性程度和腫瘤進展有關(guān)[2～6]。Raf激酶抑制蛋白(RKIP)是PEBP家族的重要一員，可參與人體內(nèi)多種細胞信號傳導(dǎo)過程，在胃癌、結(jié)腸癌、食管癌等組織中低表達[7～11]，其低表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，RKIP可通過負性調(diào)控MMP-1、MMP-2、MMP-9等的表達，抑制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[12,13]。但在食管鱗癌中RKIP是否可負性調(diào)控MMP-10表達繼而抑制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移鮮見報道。本研究觀察食管鱗癌組織MMP-10、RKIP表達，并分析其臨床意義。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2011年7月～2014年11月我院手術(shù)切除的食管鱗癌組織及癌旁正常組織(距腫瘤組織>5 cm)各92例份。所有患者為初治，術(shù)前未行放療、化療及其他免疫治療，術(shù)后病理均明確為食管鱗狀細胞癌。其中，男84例、女8例，年齡36～85(59.87±9.39)歲，組織分化程度：低分化12例、中分化42例、高分化38例，食管癌國際TNM分期(2009版)：Ⅰ期4例、Ⅱ期69例、Ⅲ期17例、Ⅳ期2例；有淋巴轉(zhuǎn)移52例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例；組織浸潤程度：黏膜層10例，肌層45例，纖維層37例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者均知情同意。

1.2 MMP-10、RKIP表達檢測 采用免疫組化兩步法。取食管癌組織及癌旁正常組織標(biāo)本，10%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚切片。組織切片經(jīng)65 ℃烘烤4 h，二甲苯脫蠟3 min×4次，梯度乙醇脫苯，pH 6.0的枸櫞酸鹽緩沖液(RKIP)或pH 9.0的EDTA修復(fù)液(MMP-10)高溫高壓修復(fù)，3% H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶10 min，PBS沖洗5 min×3次，滴加一抗RKIP(1∶150)或MMP-10(1∶100)，37 ℃濕盒中孵育1.5 h，PBS沖洗5 min×3次，滴加二抗孵育 20 min，PBS沖洗5 min×3次，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。陽性對照和陰性對照方法同上，以PBS取代一抗作為陰性對照。 MMP-10陽性染色主要定位于細胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒。RKIP陽性染色主要定位于細胞質(zhì)或細胞膜，呈黃色或棕黃色顆粒。判定標(biāo)準(zhǔn)：隨機取5個高倍視野(×400)，觀察陽性細胞染色強度和陽性細胞所占百分比。陽性細胞染色強度：無著色計為0分，淺黃色計為1分，黃色計為2分，棕黃色計為3分；陽性細胞所占百分比：<10%計為0分，≥10%～<50%計為1分，≥50%～<75%計為2分、≥75%計為3分。以陽性細胞染色強度和陽性細胞所占百分比綜合評定。兩項評分相加<4分為陰性表達，≥4分為陽性表達。

1.3 相關(guān)性分析 分析MMP-10、RKIP陽性表達與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系及二者的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 食管鱗癌組織及癌旁正常組織MMP-10、RKIP表達比較 食管鱗癌組織MMP-10、RKIP陽性表達率分別為71.74%(66/92)、28.26%(26/92)，癌旁正常組織分別為9.78%(9/92)、67.39%(62/92)；二者比較P均<0.05。

2.2 MMP-10、RKIP表達與食管鱗癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 食管鱗癌組織MMP-10陽性表達與患者性別、年齡、組織分化程度無關(guān)(P均>0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤浸潤程度有關(guān)(P均<0.05)。食管鱗癌組織RKIP陽性表達與患者性別、年齡、組織分化程度、TNM分期、腫瘤浸潤程度無關(guān)(P均>0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。見表1。

表1 MMP-10、RKIP陽性表達與食管鱗癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 MMP-10陽性表達與RKIP陽性表達的關(guān)系 食管鱗癌組織MMP-10陽性表達者66例，其中RKIP陽性表達者13例、陰性表達者53例；食管鱗癌組織MMP-10陰性表達者26例，其中RKIP陽性表達者13例、陰性表達者13例。二者陽性表達呈負相關(guān)(r=-0.372，P<0.05)。

3 討論

據(jù)估計，2012年我國新發(fā)食管癌患者287 000例，發(fā)病率為21.17/10萬，居所有新發(fā)惡性腫瘤的第5位；死亡210 000例，病死率為15.58/10萬，居所有惡性腫瘤的第4位[14]。食管癌的早期癥狀不明顯，多數(shù)患者就診時已屬中晚期。目前臨床對食管癌的治療仍以手術(shù)為主，但術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移常見，術(shù)后5年生存率低于50%[15]。 MMP-10是基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員之一，可降解Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型膠原及明膠、蛋白聚糖等[1]。目前研究發(fā)現(xiàn)，MMP-10在肝癌、結(jié)腸癌、肺癌等組織中高表達，并與其潛在惡性程度和腫瘤進展有關(guān)。Liu等[6]研究發(fā)現(xiàn)，在早期食管鱗癌組織中MMP-10高表達，其高表達與患者預(yù)后不良有關(guān)。本研究結(jié)果亦證實，在食管鱗癌組織中MMP-10高表達。本研究還發(fā)現(xiàn)，MMP-10陽性表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及腫瘤浸潤程度有關(guān)，與患者性別、年齡、組織分化程度無關(guān)。說明MMP-10高表達是食管癌的早期事件，一旦發(fā)生癌變即具有了侵襲和轉(zhuǎn)移的能力。

RKIP是PEBP家族的一員，參與人體內(nèi)多種細胞信號傳導(dǎo)過程。RKIP不僅能干擾Raf-1-MEK1/2-ERK1/2信號途徑，還能抑制NF-κB和G蛋白偶聯(lián)受體激酶的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。RKIP低表達與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)，如胃癌、結(jié)腸癌、食管癌等。本研究結(jié)果顯示，在食管鱗癌組織中RKIP低表達；RKIP陽性表達僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與患者性別、年齡、TNM分期、腫瘤浸潤程度、組織分化程度均無關(guān)。表明RKIP表達缺失對腫瘤轉(zhuǎn)移具有重要作用，但對食管鱗癌的發(fā)生影響不大。

RKIP作為一個抑癌基因，可通過負性調(diào)控MMP-1、MMP-2、MMP-9、MMP-13表達，繼而抑制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。而MMP-10可促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移。但RKIP是否可調(diào)控MMP-10的表達及二者表達是否相關(guān)鮮見報道。本研究發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌組織MMP-10陽性表達和RKIP陽性表達呈負相關(guān)，說明兩者在食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展過程中具有相互抑制作用。有研究表明，Snail基因可通過E-box來抑制RKIP的表達[16]，而E-box則可以通過CHF1/Hey2促進MMP-10的表達[17]，這說明RKIP或許是通過E-box來調(diào)控MMP-10的表達[18]。但RKIP調(diào)節(jié)MMP-10表達的機制仍需要進一步研究。

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