11 339例孕婦無創產前檢測結果對比分析

王元麗 唐明珠 楊學習

·論著·

11 339例孕婦無創產前檢測結果對比分析

王元麗1唐明珠2楊學習3★

目的探討不同年齡段及不同高危因素孕婦無創產前檢測結果的對比分析。方法回顧性分析2014年12月至2015年8月進行無創產前檢測的11 339例孕婦資料，分別計算21、18、13號染色體發生變異的概率。將孕婦按年齡段（＜35歲組，35～39歲組和≥40歲組）、孕產史（無不良孕產史組和有不良孕產史組）、受孕情況（自然受孕組和試管嬰兒組）分組，分別比較各組間的胎兒患21、18、13?三體綜合征的概率。結果11 339例樣本中共檢出82例胎兒染色體異常者，占樣本總數7.2‰（82/11 339），其中，21?三體最常見，所占比例為67.07％（55/82）。≥40歲組陽性發生率2.45％，較＜35歲組（0.59％）和35～39歲組（0.61％）差異有統計學意義（P＜0.001）。孕產史和受孕情況2組的陽性發生率差異無統計學意義（P＞0.05）。結論高齡孕婦是胎兒患染色體非整倍體疾病的重要危險因素，應提高無創產前檢測在此類人群中的應用。

無創產前檢測；三體綜合征；高齡孕婦

21?三體綜合征、18?三體綜合征、13?三體綜合征發病率占胎兒染色體非整倍體疾病的絕大多數，其中，21?三體綜合征最為常見，年發病率為1/800～1/ 600，占新生兒三體型染色體疾病的70％～80％［1?2］。隨著國家計劃生育政策的放寬、外界環境因素影響以及輔助生殖技術的不斷進步，高齡孕婦、具有不良孕產史夫婦以及試管嬰兒的數量逐漸增多。近年來發達國家試管嬰兒的出生比例明顯增高，約占新生兒總數的1％～3％［3?4］。這些都有可能成為出生缺陷發生率升高的因素。目前，利用孕婦外周血游離DNA開展的無創產前檢測已成為胎兒染色體非整倍體疾病篩查的臨床探索新方向［2，5］。本研究利用下一代測序技術對孕婦外周血中的游離DNA進行測序，通過生物信息學分析胎兒遺傳信息，從而檢測胎兒染色體非整倍體疾病，并根據孕婦年齡和不良孕產史等高危因素分組，研究胎兒21、18、13?三體綜合征的發生率，為無創產前檢測技術在染色體非整倍體疾病高發人群中的應用提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2014年12月至2015年8月在廣州達安臨床檢驗中心進行無創產前檢測的孕12周及以上的單胎妊娠孕婦11 339例，孕婦年齡范圍在16～50歲，平均年齡31.34歲，其中高齡（≥35歲）4 033例，有不良孕產史996例，試管嬰兒262例。

1.2 方法

1.2.1 標本收集

對孕婦提供遺傳咨詢并簽署知情同意書后，按正常靜脈采血方式采集7～10m L靜脈血。采血管使用Cell?Free DNA BCTTM管（Streck公司，美國）。采血后輕輕顛倒混勻8～10次，使血液與管內保護劑充分混勻，達到保護作用。采集的血液可常溫運輸，72 h內送達實驗室進行血漿分離，或立即分離后將血漿用干冰運輸至實驗室。

1.2.2 無創產前檢測

使用基因測序儀DA8600和胎兒染色體非整倍體21三體、18三體和13三體檢測試劑盒（半導體測序法）（中山大學達安基因股份有限公司）對標本進行無創產前檢測，并使用配套算法對結果進行分析，判斷21、18、13號染色體的風險值（正常參考范圍值為?3.0～3.0），檢測值在正常參考范圍內則判為“低風險”，超出則為“高風險”。由廣州達安臨床檢驗中心出具篩查報告，并隨訪獲取確診結果，以核實無創產前檢測結果的準確性。

1.3 統計學分析

采用SPSS 19.0統計軟件對數據進行統計分析，使用χ2檢驗進行組間比較，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 整體檢測結果

11 339例樣品中，無創產前檢測為高風險孕婦82例，篩查陽性率為7.2‰（82/11 339），其中21?三體55例，發生率67.07％（55/82），遠高于18?三體的29.27％（24/82）和13?三體的3.66％（3/82）。

2.2 不同年齡孕婦組胎兒三體結果比較

將孕婦按年齡組分為＜35歲組，35～39歲組和≥40歲組。＜35歲組共檢出陽性43例，發生率0.59％（43/7 306），35～39歲組檢出20例，發生率0.61％（20/3 256），≥40歲組檢出19例，發生率2.45％（19/777），結果見表1。＜35歲和35～39歲2個組間陽性發生率差異無統計學意義（P＞0.05），≥40歲和＜35歲、35～39歲組差異具統計學意義（P均＜0.001）。其中，21?三體和18?三體的發生率組間的差異性和總體陽性發生率相似，13?三體發生率在各組間差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.3 不同孕產史組胎兒三體結果比較

按照孕產史情況分為無不良孕產史組和有不良孕產史組。無不良孕產史組共檢出陽性71例，發生率0.69％（71/10 343），有不良孕產史組共檢出陽性11例，發生率1.1％（11/996），結果見表2。有不良孕產史組陽性發生率比無不良孕產史組高，但2組間差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.4 不同受孕方式組胎兒三體結果比較

按照受孕方式情況分為自然受孕組和試管嬰

兒組。自然受孕組共檢出陽性81例，發生率0.73％（81/11 077），試管嬰兒組共檢出陽性1例，發生率0.38％（1/262），結果見表3。2組間差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 不同年齡孕婦組胎兒三體結果比較Table 1 Comparation of fetal trisomy syndrome results in differentwomen age groups

表2 不同孕產史組胎兒三體結果比較Table 2 Comparation of fetal trisomy syndrome results in differentwomen pregnancy history groups

表3 不同受孕方式組三體結果比較Table 3 Comparation of fetal trisomy syndrome results in different fertilization ways groups

3 討論

21?三體綜合征、18?三體綜合征、13?三體綜合征發病率占胎兒染色體非整倍體疾病的絕大多數，其中，21?三體綜合征發病較高，為1/800～1/600［2］。本研究人群中，篩查陽性率為7.2‰（82/11 339），其中21?三體55例，發生率67.07％（55/82）。這比國內水平稍低，考慮可能與本研究所選擇標本來源和年齡范圍偏廣有關。在國內研究中，Liao等［6］對1 760例孕婦進行無創產前檢測，共報道16例異常，陽性率為9‰。鄭靜等［1］對1 566例孕婦進行分析得出，該人群陽性發生率為14.7‰，21?三體發生率為78.26％。劉叢叢［7］在對2 152例孕婦無創檢測結果的分析發現有22例陽性，綜合陽性率為10.2‰。目前，孕期胎兒染色體異常的檢測方法主要以侵入性的產前診斷技術為主，均存在一定的流產風險，難以被廣大孕婦和家庭接受。而傳統的血清學篩查方法檢出率為60％～65％，假陽性率高。自1997年胎兒游離DNA被發現存在于孕婦外周血以來，基于下一代測序技術的無創產前檢測以其安全、快速以及準確的優勢被迅速用于孕婦特別是高齡孕婦的產前染色體非整倍體篩查［2，5，8?9］。劉叢叢［7］在對2 152例孕婦無創基因檢測的結果分析發現，該技術對21、18、13號染色體非整倍體的檢測靈敏度為92.3％～100％，特異性度99.95％～100％。Palomaki等［10］也通過該技術分析得出，283例染色體非整倍體異常樣本復合檢出率為98.9％，總的假陽性率僅0.5％。所以，無創產前

檢測技術在染色體異常篩查中具有很高的應用價值。

醫學上將年齡≥35歲的初產產婦界定為高齡產婦，隨著孕產婦年齡增大，其卵巢內處于減數分裂期的初級卵母細胞在體內停留時間會逐漸延長，且高齡孕產婦更易受內外環境影響，其卵巢功能發生老化和退化，使胚胎期染色體變異的幾率增加［11］。國際和國內相關法規也明確建議應對高齡產婦進行產前診斷［12］。本研究發現，孕婦年齡≥40歲其胎兒發生染色體異常的比例明顯高于其他2組（P＜0.001），35～39歲組雖與＜35歲組間陽性發生率差異無統計學意義（P＞0.05），但其概率也略高于＜35歲組。鄭靜等［1］在對1 566例標本的三體結果分析中，也發現≥40歲組孕婦陽性發生率明顯高于35～39歲組與＜35組。譚衛荷等［11］對898例孕婦進行核型結果分析，發現21?三體和18?三體在≥40歲組孕婦中發生率也顯著高于35～39歲組與＜35組。

不良孕產史包括自然流產、死胎和胎兒發育畸形等，在引起不良孕產史的眾多因素中，染色體異常是一個重要的病因之一［3，13］。在本研究中，有不良孕產史組共檢出21、18和13?三體11例，發生率1.1％（11/996）。較無不良孕產史組0.69％（71/ 10 343）無顯著差異。不良孕產史多發生在染色體位置異常和多態性核型中。何淑貞等［3］在對217對有不良孕產史的夫婦進行染色體核型分析中發現有9例異常的核型和55例多態性核型，檢出率分別為2.07％和12.67％。其中異常核型包括4例羅伯遜易位，4例平衡易位，1例倒位。湯素環等［13］對375對不良孕產夫婦進行核型分析發現，有81例異常核型（5.0％），其中51例常染色體異常（6.8％）如相互異位、倒位等。因此，不良孕產史與染色體核型異常之間存在密切聯系，而多態性核型如Y染色體異質性等具有遺傳效應，會導致胎兒患染色體核型異常疾病概率增加。

隨著體外受精技術的不斷發展，近年來，發達國家試管嬰兒約占新生兒總數的1％～3％，出生比例明顯升高［4］。由于試管嬰兒技術采用體外受精—胚胎移植，其過程皆在體外完成，很多因素可引起遺傳物質發生改變［14］。試管嬰兒出生缺陷和圍產期合并癥日益受到人們的關注，許多學者對此做了研究，但研究結論各不相同［15］。本研究人群中，自然受孕組陽性發生率0.73％（81/11 077），與試管嬰兒組0.38％（1/262）的差異無統計學意義（P＞0.05），這與許小艷等［15］的分析相似，該研究對150例試管嬰兒和200例自然受孕嬰兒的出生缺陷及新生兒期并發癥等指標進行比對分析發現，試管嬰兒出生缺陷與自然受孕嬰兒無顯著差異。而米弘瑛等［14］對43例試管嬰兒和50例自然受孕嬰兒的出生缺陷及圍生期疾病等情況進行比對發現，試管嬰兒出生缺陷發生率顯著高于自然受孕嬰兒。

綜上所述，高齡孕婦是胎兒患染色體異常疾病的一個重要危險因素。應用無創產前檢測技術對高齡孕婦進行胎兒染色體異常篩查，并結合侵入性產前診斷技術對篩查陽性結果進行核實。這樣可降低有創性檢測的人數及孕婦的負擔。同時，應加強無創產前檢測技術在其他出生缺陷疾病方面的研發與應用，提高除21、18、13?三體綜合征以外的染色體疾病的準確性，更好地應用于不良孕產史和試管嬰兒等高危因素孕婦的異常檢測，才能更好地降低新生兒出生缺陷的發生率。

［1］鄭靜，卓越，孫大康，等.不同年齡段孕婦無創DNA產前檢測結果對比分析［J］.中國婦幼保健，2015，30（36）：6538?6540.

［2］丁辰月，吳畏，劉嘉茵.測序技術在無創產前篩查中的應用及進展［J］.國際生殖健康/計劃生育雜志，2014，33（3）：201-204.

［3］何淑貞，蒲育棟，曹金如，等.217對不良孕產史夫婦細胞遺傳學分析［J］.海南醫學，2016，27（15）：2542-2543.

［4］張惠琴，樊蕊，田國華，等.試管嬰兒雙胎及自然受孕雙胎臨床分析［J］.中國當代兒科雜志，2015，17（1）：63-67.

［5］李玉芝，任景慧，林琳華，等.大規模并行基因組測序技術應用于無創產前染色體非整倍體的研究［J］.華中科技大學學報：醫學版，2012，41（4）：475-480.

［6］Liao C，Yin AH，Peng CF，et al.Noninvasive prena?tal diagnosis of common aneuploidies by sem iconduc?tor sequencing［J］.PNAS，2014，111（20）：7415-7420.

［7］劉叢叢.母血游離胎兒DNA在21-三體、18-三體產前篩查的應用研究［D］.北京：北京協和醫學院，2012.［8］李燕芳，張蘭珍，田耕，等.胎兒游離DNA用于無創產前檢測21、18、13三體綜合征的臨床研究［J］.中國婦產科臨床雜志，2015，16（2）：126-129.

［9］林洋洋，徐婉芳，劉彥慧，等.大規模平行測序技術在產前無創檢測胎兒染色體異常中的臨床應用［J］.中國優生與遺傳雜志，2016，24（1）：52-54.

［10］Palomaki GE，Deciu C，K loza EM，et al.DNA se?quencing ofmaternal plasma reliably identifies trisomy 18 and trisomy 13 aswellas Down syndrome：an inter?national collaborative study［J］.GenetMed，2012，14（3）：296-305.

［11］譚衛荷，郭曉燕，張金云，等.不同年齡段孕婦妊娠中期羊膜腔穿刺及羊水細胞染色體核型分析結果的對比分析［J］.中國婦幼保健，2014，29（1）：125-127.

［12］沈國松，張甦，何平亞，等.779例高齡孕婦的產前篩查與診斷結果分析［J］.中國產前診斷雜志，2009，1（2）：29-32.

［13］湯素環，李付廣，譚衛荷，等.不良孕產夫婦的染色體核型分析［J］.中國藥物經濟學，2015，Z1：245-247.

［14］米弘瑛，李利，麻新梅，等.試管嬰兒新生兒情況分析［J］.實用醫學雜志，2013，29（4）：593-594.

［15］許小艷，楊景暉，麻新梅，等.試管嬰兒新生兒期并發癥及出生缺陷分析［J］.中國當代兒科雜志，2015，17（4）：350-355.

Com parative analysis of the non?invasive prenatal test results among 11 339 pregnantwomen

WANG Yuanli1,TANGM ingzhu2,YANG Xuexi3★
(1.Guangzhou Darui Biotechnology Co.,Ltd.,Guangzhou,Guangdong,China,510665;2.Guangzhou Daan Clinical Laboratory Centre,Guangzhou,Guangdong,China,510665;3.School of Laboratory Medicine and Biotechnology,Southern MedicalUniversity,Guangzhou,Guangdong,China,510515)

Objective The objective is to explore non?invasive prenatal test for pregnantwomen in different age and risk factor groups.Methods Non?invasive prenatal test results from 11 399 pregnant women were recorded from December 2014 to August 2015,and the incidence rates of trisomy 21/18/13 variationswere calculated.The pregnantwomenwere divided into differentgroupsaccording to age(＜35?years?old group,35～39?years?old group,and≥40?years?old group),pregnancy history(normalpregnancy history group and abnormal pregnancy history group)and conception method(natural conception group and IVF group).The incidence rates of trisomy 21/18/13 syndrome w ithin these groupswere compared.Results In 11 339 cases, 82 were found w ith fetal chromosomal abnormalities,accounting for 7.2‰(82/11 339),the trisomy 21 syndrome was themost common w ith the rate of 67.07％(55/82).The proportion of positive trisomy syndrome in the≥40?years?old group(2.45％)was statistically significantly different(P＜0.001)compared w ith the＜35?years?old group(0.59％)and 35～39?years?old group(0.61％).There was no significant differences of the

Non?invasive prenatal test;Trisomy syndrome;Advancedmaternalage pregnantwomen

廣東省科技計劃下一代基因測序生物信息云分析服務平臺及其關鍵技術研究（2015A030401040）；廣州市科技計劃基于下一代測序技術的唐氏綜合征無創篩查系統研發和應用研究（201400000004?4）

1.廣州市達瑞生物技術股份有限公司，廣東，廣州510665 2.廣州達安臨床檢驗中心，廣東，廣州510665 3.南方醫科大學檢驗與生物技術學院，廣東，廣州510515

★通訊作者：楊學習，E?mail：yxxzb@sohu.com

positive trisomy syndrome rate between the pregnancy history and different fertilization ways groups(P＞0.05).Conclusion The advanced age of the pregnant women is an important risk factor in the fetal chromosomalaneuploidy disease,which should be improved the use of non?invasive prenatal test.