乙型腦炎和豬繁殖與呼吸綜合征混合感染的診斷

馮賢巧，陳錦成，陳志科，蘇丹萍，賀東生*

（1．陽江市畜牧科學研究與技術推廣中心，廣東 陽江 529500；2．廣州市南沙區大崗鎮畜牧獸醫站， 廣州 511470；3．華南農業大學，廣州510640）

乙型腦炎和豬繁殖與呼吸綜合征混合感染的診斷

馮賢巧1，陳錦成2，陳志科1，蘇丹萍3，賀東生3*

（1．陽江市畜牧科學研究與技術推廣中心，廣東 陽江 529500；2．廣州市南沙區大崗鎮畜牧獸醫站， 廣州 511470；3．華南農業大學，廣州510640）

目前，豬場疫病混合感染的現象普遍存在，給我國養豬業造成了巨大損失。2015年4月廣東省某豬場母豬群發生以發熱、返情、流產、產死胎為主要特征的傳染病，根據發病情況、臨床癥狀、剖檢變化并結合實驗室診斷方法進行綜合診斷，最終結果顯示：導致該豬場母豬群繁殖障礙的主要病原為乙型腦炎病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒混合感染。

乙型腦炎；豬繁殖與呼吸綜合征；繁殖障礙；混合感染

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）又稱豬藍耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的豬急性傳染病，造成母豬繁殖障礙和仔豬的呼吸癥狀，具有發病快、死亡率高等特點。乙型腦炎是由日本乙型腦炎病毒（JEV）引起的一種主要侵害宿主中樞神經系統的急性人獸共患自然疫源性傳染病，主要通過蚊蟲傳播，可造成妊娠母豬流產、死胎、繁殖障礙，及少數豬的神經癥狀。由于豬只機體抵抗力下降、病原微生物抗逆性增強、病原種類的日趨復雜、毒株發生變異及飼養管理不當等因素的影響，豬場疫病混合感染的情況普遍存在，這使豬群臨床癥狀更加復雜，同時使死亡率大大提高。2015年4月廣東省某豬場母豬群出現以發熱、返情、流產、產死胎為主要特征的傳染病案例，經臨床及實驗室綜合診斷確診為豬繁殖與呼吸綜合征和乙型腦炎混合感染。現將此次疫情介紹如下。

1 臨床癥狀及剖檢病變

2015年4月，廣東省某存欄900頭母豬的豬場妊娠母豬部分發病，病豬主要為一胎和二胎母豬，占70%左右。妊娠母豬主要表現為懷孕前期返情，中后期流產，臨床母豬產死胎和弱仔，部分母豬發熱，部分弱仔體溫升高，呼吸困難，部分仔豬震顫、神經癥狀，最后都歸于死亡，見圖1。

圖1 死胎與弱仔

圖2 肺部及腹股溝淋巴結病變

剖檢死胎可見皮下水腫，胸腹腔積液，肝、肺腫大出血，脾腎有壞死點，腦充血水腫，積液。剖檢死亡弱仔可見間質性肺炎，出血，腹股溝淋巴結出血水腫，見圖2。

2 實驗室診斷

2.1 細菌檢測

無菌采集病豬腦、肝、肺及胸腹腔積液，接種于鮮血培養基、麥康凱培養基（MAC）、胰蛋白大豆瓊脂培養基（TSA）上，37 ℃溫箱中培養24 h以上。同時將病變病料涂片進行革蘭氏染色和瑞氏染色鏡檢。

2.2 病毒核酸檢測

選取部分死胎和病死仔豬的具有典型病變特征的腦、肺臟、淋巴結、脾臟等臟器進行研磨處理后，利用TAKARA MiniBEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver．5．0試劑盒進行病毒DNA和RNA的抽提，設計合成特異性的檢測引物，采用PCR和RT-PCR方法對豬2型圓環病毒（PCV2）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬瘟病毒（CSFV）、乙型腦炎病毒（JEV）、豬偽狂犬病毒（PRV）、豬細小病毒（PPV）進行檢測。

3 結果

3.1 細菌檢測結果

經接種培養，在各培養基上無細菌菌落生長，病料涂片經革蘭氏染色和瑞氏染色，未見病原菌，說明引起該次疫情不是由細菌引起，并且無細菌的混合感染或繼發感染。

3.2 病毒核酸檢測結果

圖3 PRRSV RT-PCR檢測結果

圖4 JEV RT-PCR檢測結果

以提取的病料中的總病毒DNA或RNA為模板，使用PCV2、PRRSV、CSFV、JEV、PRV、PPV特異性檢測引物進行PCR或RT-PCR反應，結果顯示，PRRSV引物的RT-PCR擴增出278 bp的陽性條帶（圖3），JEV引物的RT-PCR擴增出480 bp的陽性條帶（圖4），均與預期的片段大小相符；而PCV2、PRV、CSFV、PPV檢測無陽性條帶出現，為陰性。

4 討論

隨著我國養豬業集約化、規模化程度的不斷提高，豬場各種混合感染疫情已屢見不鮮，加上疫病非典型化、病原變異、新發疫病等多方面的原因，給獸醫臨床的確診和防治工作增加了一定的難度，并影響著我國現代養豬業健康快速發展。實驗室檢測診斷及病原基因檢測為疫病的確診提供了技術支持和捷徑，尤其是豬繁殖障礙性疫病的臨床表現及剖檢病變有很大的相似之處，臨床的初步診斷不一定完全可靠，需要經實驗室診斷才能確診。

乙型腦炎是一種自然疫源性人獸共患傳染病，主要通過蚊蟲傳播，而廣東地處亞熱帶地區，一年四季均有蚊子存在，是乙型腦炎的高發地區，疫苗是預防本病最有效的方法，免疫不確實極易引起本病的發生。豬繁殖與呼吸綜合征給我國養豬業造成了重大的損失，由此引起的豬群免疫力低下、免疫抑制，極易造成豬群的混合感染和繼發感染。本次疫情就是在結合發病情況、臨床癥狀、剖檢病變的基礎上，根據實驗室PCR診斷結果，確診為豬乙型腦炎和豬繁殖與呼吸綜合征混合感染。

針對以上結果，我們建議豬場對后備豬和經產豬群全群緊急免疫接種豬乙型腦炎疫苗，2周后接種豬藍耳病疫苗，疫情在2周后逐步得到控制。這提示我們平時要制定全面、科學合理的免疫程序，在每年的4月份，對豬場進行乙型腦炎疫苗的全群免疫，尤其是后備公母豬；做好豬繁殖與呼吸綜合征的免疫，一年免3次。同時定期進行免疫抗體水平監測，提高免疫效果和豬群對疫病的抵抗力。采取一定的綜合防治措施，加強衛生和飼養管理，嚴格控制引種和確保“全進全出”，這是有效防控混合感染發生的重要手段。

2016-02-08）

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*通訊作者