不同豬場(chǎng)豬偽狂犬病凈化效果與探討

王建輝 胡斐元 劉劍峰 王慧 魏恒 魏勇 姜寧（，江蘇省睢寧縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 00；，南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 004）

不同豬場(chǎng)豬偽狂犬病凈化效果與探討

王建輝1胡斐元1劉劍峰2王慧1魏恒1魏勇1姜寧1
（1，江蘇省睢寧縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 221200；2，南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 210014）

筆者通過(guò)開(kāi)展不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場(chǎng)偽狂犬病野毒抗原和抗體監(jiān)測(cè)、凈化試驗(yàn)，建立不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場(chǎng)偽狂犬病監(jiān)測(cè)方案和免疫程序，為不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場(chǎng)提供一個(gè)實(shí)用、經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)單的偽狂犬病毒凈化方案，以供生產(chǎn)參考。

豬偽狂犬病；凈化效果；試驗(yàn)

豬偽狂犬病 （PR）是由偽狂犬病毒 （PRV）引起的家畜和多種野生動(dòng)物共患傳染病，豬感染后主要引起母豬的繁殖障礙、流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎以及仔豬的高病死率，是生豬主要疫病之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[1]。PR凈化技術(shù)在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家比較成熟，甚至在美國(guó)和荷蘭等國(guó)家通過(guò)實(shí)施凈化根除計(jì)劃已成功地消滅該病[2]。我國(guó)也將PR列入優(yōu)先防治病種之一[3]，要求通過(guò)開(kāi)展綜合凈化技術(shù)，有效控制該病的發(fā)生和流行。睢寧縣是全國(guó)生豬養(yǎng)殖、調(diào)運(yùn)大縣，2012年生豬飼養(yǎng)量達(dá)到172.3萬(wàn)頭，出欄119.7萬(wàn)頭，年出欄500頭以上的場(chǎng) （戶(hù)）達(dá)到185個(gè)，其中年出欄萬(wàn)頭豬場(chǎng)6個(gè)，年出欄3000頭以上的豬場(chǎng)36個(gè)，生豬規(guī)模養(yǎng)殖比重達(dá)到87%。筆者通過(guò)開(kāi)展不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場(chǎng)偽狂犬病野毒抗原和抗體監(jiān)測(cè)、凈化試驗(yàn)，建立不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場(chǎng)偽狂犬病監(jiān)測(cè)方案和免疫程序，為不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場(chǎng)提供一個(gè)實(shí)用、經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)單的偽狂犬病毒凈化方案，以供生產(chǎn)參考。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)場(chǎng)所選擇

A場(chǎng)為母豬存欄2000頭以上豬場(chǎng)，其中種公豬50頭；B場(chǎng)為母豬存欄50～100頭豬場(chǎng)，其中種公豬10頭 （種公豬精液為種豬人工授精站提供）；C場(chǎng)為母豬存欄0～50頭豬場(chǎng)，其中種公豬5頭 （種公豬精液為種豬供精站提供）。

1.2 試劑與器材

試劑盒：豬偽狂犬病野毒抗原ELISA診斷試劑盒及豬偽狂犬病抗體ELISA診斷試劑盒均購(gòu)自美國(guó)IDEXX生物科技有限公司。

疫苗：偽狂犬gE基因缺失弱毒疫苗。

設(shè)備：上海科華KHB ST-360酶標(biāo)儀和IKA多 (單)通道移液器等。

2 試驗(yàn)方法

2.1 野毒抗體流行病學(xué)調(diào)查

采集試驗(yàn)場(chǎng)所有后備豬、種公豬以及能繁母豬的血液，分離血清，采用豬偽狂犬病野毒抗原ELISA診斷試劑盒及豬偽狂犬病抗體ELISA診斷試劑盒檢測(cè)豬場(chǎng)種豬群中豬偽狂犬病感染情況，并統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

2.2 凈化方案建立與實(shí)施

根據(jù)豬偽狂犬病野毒抗體流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，根據(jù)感染程度不同將豬場(chǎng)分為3個(gè)級(jí)別：低風(fēng)險(xiǎn)豬場(chǎng) （野毒感染率≤1%）、中風(fēng)險(xiǎn)豬場(chǎng) （野毒感染率1～10%）以及高風(fēng)險(xiǎn)豬場(chǎng)（野毒感染率≥10%）。根據(jù)豬偽狂犬野毒不同感染強(qiáng)度制定不同的豬偽狂犬凈化措施如下。

2.2.1 低風(fēng)險(xiǎn)場(chǎng) （野毒感染率≤1%）

豬場(chǎng)不使用疫苗免疫接種，采取血清學(xué)普查，如果發(fā)現(xiàn)血清學(xué)陽(yáng)性立即隔離/淘汰該豬。

數(shù)值計(jì)算和實(shí)驗(yàn)結(jié)果與第2節(jié)中的理論分析相符合，由于少模光纖的模場(chǎng)面積大于單模光纖，且傳輸?shù)恼荒Ｊ蕉嘤趩文９饫w，在干擾因素恒定的情況下使用少模光纖接收可以顯著提高光耦合效率，因此采用少模光纖進(jìn)行信號(hào)光接收可以提高接收端的信噪比，增強(qiáng)鏈路的穩(wěn)定性，改善接收端性能.容易推測(cè)，提高模式數(shù)量，如采用四模光纖，能夠進(jìn)一步增加系統(tǒng)的魯棒性，但相應(yīng)的在空間光通信系統(tǒng)中也必須換用基于四模光纖的EDFA和波分多路復(fù)用(Wavelength Division Multiplex，WDM)等.

2.2.2 中風(fēng)險(xiǎn)場(chǎng) （野毒感染率1～10%）

按照 “首次檢測(cè)→隔離/淘汰→免疫→二次檢測(cè)→隔離/淘汰→再次檢測(cè)→淘汰”等步驟進(jìn)行凈化。具體步驟如下。

（1）首次檢測(cè)。對(duì)全部種豬和后備豬作1次偽狂犬病野毒感染檢測(cè)，陰性者留作種用。

（2）隔離/淘汰。野毒感染檢測(cè)陽(yáng)性者及時(shí)淘汰，或立即免疫基因缺失疫苗進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，間隔4～6周后加強(qiáng)免疫1次作為商品豬出欄。

（3）二次檢測(cè)。按照免疫程序每3個(gè)月免疫1次。間隔6個(gè)月再次進(jìn)行一次野毒感染普檢，再次淘汰/隔離陽(yáng)性豬。

（4）再次檢測(cè)。連續(xù)2次檢測(cè)結(jié)果均為陰性者，以后每12個(gè)月進(jìn)行一次抽檢，每次每群抽檢30～60頭份，不足30頭者全部檢測(cè)。若抽檢出現(xiàn)野毒感染陽(yáng)性，則全群檢測(cè)并淘汰/隔離陽(yáng)性豬。

當(dāng)減少到一定程度時(shí) （野毒感染率≤1%），可按低風(fēng)險(xiǎn)場(chǎng)凈化方案操作處理。

2.2.3 高風(fēng)險(xiǎn)場(chǎng) （野毒感染率≥10%）

（1）暫停向外供應(yīng)種豬。

（2）淘汰/隔離陽(yáng)性種公豬、后備母豬及所有能繁母豬，按照免疫程序每3個(gè)月免疫一次陰性種公豬和后備母豬，并持續(xù)監(jiān)測(cè)陰性種公豬和后備母豬偽狂犬病野毒抗原和抗體水平，淘汰/隔離陽(yáng)性種公豬和后備母豬，逐步建立不同養(yǎng)殖規(guī)模豬偽狂犬病野毒陰性繁殖群和生產(chǎn)群。每次樣品的采集、檢測(cè)、陽(yáng)性豬的處理均應(yīng)在10d內(nèi)完成。

（3）根據(jù)豬場(chǎng)淘汰母豬的標(biāo)準(zhǔn)逐步淘汰陽(yáng)性經(jīng)產(chǎn)母豬（年淘汰33.3%），由經(jīng)檢測(cè)為豬偽狂犬陰性后備母豬補(bǔ)欄。

（5）間隔6個(gè)月進(jìn)行一次野毒感染普檢，每次每群抽檢30～60頭份，不足30頭者全部檢測(cè)。當(dāng)減少到一定程度時(shí)（野毒感染率1～10%），按中度感染場(chǎng)凈化方案操作處理。

2.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)期間豬場(chǎng)按正常生產(chǎn)流程管理，每周兩次消毒，每年全場(chǎng)滅鼠2次。

2.4 測(cè)定指標(biāo)

測(cè)定試驗(yàn)場(chǎng)種公豬、能繁母豬、后備母豬凈化前后偽狂犬病野毒陽(yáng)性率和免疫抗體水平，試驗(yàn)場(chǎng)凈化前后的生產(chǎn)成績(jī)進(jìn)行比較，研究豬偽狂犬凈化后對(duì)豬場(chǎng)生產(chǎn)成績(jī)的影響。

3 結(jié)果與分析

3.1 凈化前豬偽狂犬普查結(jié)果

對(duì)3個(gè)試驗(yàn)場(chǎng)中的所有種豬及后備豬進(jìn)行采樣，豬偽狂犬野毒gE抗體檢測(cè)試劑盒 （IDEXX）進(jìn)行g(shù)E抗體檢測(cè)，其檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，A場(chǎng)陽(yáng)性率高達(dá)80%以上，為高風(fēng)險(xiǎn)豬場(chǎng)；B、C場(chǎng)陽(yáng)性率在1～10%之間，為中風(fēng)險(xiǎn)豬場(chǎng)。

隨機(jī)抽取3個(gè)試驗(yàn)場(chǎng)中10%的種公豬、能繁母豬、后備母豬的血樣，采用豬偽狂犬病抗體ELISA診斷試劑盒檢測(cè)豬群豬偽狂犬免疫抗體水平，其檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，3個(gè)試驗(yàn)場(chǎng)的免疫抗體水平均較高，其中場(chǎng)A免疫抗體合格率達(dá)90%以上；B、C場(chǎng)達(dá)100%，說(shuō)明3個(gè)試驗(yàn)場(chǎng)均能按照規(guī)范要求對(duì)豬群進(jìn)行豬偽狂犬病免疫，日常管理比較到位。

表1 凈化前種豬群豬偽狂犬野毒陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果

表2 凈化前種豬群豬偽狂犬免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

3.2 凈化實(shí)施1年后的豬偽狂犬野毒陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果

根據(jù)普查結(jié)果確定豬偽狂犬凈化程序：A場(chǎng)使用高風(fēng)險(xiǎn)豬場(chǎng)凈化程序，即立即暫停向外供應(yīng)種豬，淘汰/隔離陽(yáng)性種公豬、后備母豬及所有能繁母豬，按照免疫程序?qū)﹃幮苑N公豬和后備母豬進(jìn)行免疫，免疫接種3個(gè)月后對(duì)豬只進(jìn)行豬偽狂犬病野毒抗原和抗體水平檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果繼續(xù)對(duì)陰性種公豬和后備母豬進(jìn)行免疫，直至野毒感染率減少到10%以下，按中低度感染場(chǎng)凈化方案操作處理，以此逐步建立規(guī)模豬場(chǎng)偽狂犬病野毒陰性繁殖群和生產(chǎn)群。B、C場(chǎng)使用中風(fēng)險(xiǎn)豬場(chǎng)凈化程序，淘汰/隔離全部陽(yáng)性種公豬、后備母豬及能繁母豬，陰性者留作種用，立即按照免疫程序?qū)﹃幮苑N公豬和后備母豬進(jìn)行免疫，免疫接種半年后對(duì)豬只進(jìn)行豬偽狂犬病野毒抗原和抗體水平檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果繼續(xù)對(duì)陰性種公豬和后備母豬進(jìn)行免疫，不斷淘汰陽(yáng)性種公豬、后備母豬及能繁母豬，逐步建立不同養(yǎng)殖規(guī)模豬偽狂犬病野毒陰性繁殖群和生產(chǎn)群。由表3可知，B場(chǎng)和C場(chǎng)經(jīng)過(guò)2次淘汰，已經(jīng)全為陰性；A場(chǎng)經(jīng)過(guò)淘汰所有陽(yáng)性種公豬、能繁母豬及后備母豬，并加強(qiáng)豬偽狂犬基因缺失苗后，實(shí)現(xiàn)了后備母豬及公豬偽狂犬野毒陽(yáng)性率的大幅度降低。

3.3 凈化實(shí)施1年后豬偽狂犬免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

凈化實(shí)施1年后，隨機(jī)采集3個(gè)試驗(yàn)場(chǎng)10%的后備母豬，種公豬以及能繁母豬血樣進(jìn)行豬偽狂犬免疫抗體檢測(cè)，其檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可知，A場(chǎng)種公豬經(jīng)3次凈化后，免疫抗體水平為100%，與凈化前持平；能繁母豬按照試驗(yàn)方法中高風(fēng)險(xiǎn)場(chǎng)標(biāo)準(zhǔn)予以全部淘汰；后備母豬2次凈化后的免疫抗體水平為100%，比凈化前提高了7.23%；A場(chǎng)第3次凈化后免疫抗體水平為100%，比凈化前提高了6.38%。B、C場(chǎng)種公豬、能繁母豬和后備母豬經(jīng)2次凈化后的免疫抗體水平均為100%，均與凈化前的免疫抗體水平持平。

3.4 A場(chǎng)凈化實(shí)施1年半后偽狂犬病野毒檢測(cè)結(jié)果

在B、C場(chǎng)偽狂犬病野毒陽(yáng)性率降為0之后，A場(chǎng)繼續(xù)按照 “首次檢測(cè)→隔離/淘汰→免疫→二次檢測(cè)→隔離/淘汰→再次檢測(cè)→淘汰”等步驟繼續(xù)進(jìn)行凈化，凈化實(shí)施1年半后，采集全部種豬血樣進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表5，由表5可知，A場(chǎng)所有種豬均為陰性。

3.5 凈化前后豬場(chǎng)生產(chǎn)成績(jī)分析

按照既定的凈化方案逐步實(shí)施豬場(chǎng)的凈化后，A場(chǎng)能繁母豬配種率從90%提高到98%，提高8%；返情率下降2%；準(zhǔn)產(chǎn)率提高5%；母豬窩產(chǎn)仔數(shù)平均增加1頭；窩弱仔數(shù)減少3頭；窩活仔數(shù)平均增加1頭；窩斷奶仔豬數(shù)增加1.5頭；產(chǎn)房成活率提高3%。B場(chǎng)能繁母豬配種率從92%提高到96%，提高4%；返情率下降6%；準(zhǔn)產(chǎn)率提高4%；母豬窩產(chǎn)仔數(shù)平均增加1頭；窩弱仔數(shù)減少3頭；窩活仔數(shù)平均增加1頭；窩斷奶仔豬數(shù)增加1頭；產(chǎn)房成活率提高6%。C場(chǎng)能繁母豬配種率持平；返情率下降15%；準(zhǔn)產(chǎn)率持平；母豬窩產(chǎn)仔數(shù)平均增加1頭；窩弱仔數(shù)減少1頭；窩活仔數(shù)平均增加1頭；窩斷奶仔豬數(shù)增加1頭；產(chǎn)房成活率提高2%。3個(gè)試驗(yàn)場(chǎng)能繁母豬的生產(chǎn)繁殖性能均有明顯提高，凈化試驗(yàn)達(dá)到了預(yù)期效果。

4 小結(jié)與討論

豬偽狂犬病 （PR）廣泛分布于世界范圍內(nèi)。特別是在豬群密集地區(qū)易發(fā)病。20世紀(jì)60年代以前，在東歐之外的地方?jīng)]有這種疾病，但在20世紀(jì)80年代末這種病已經(jīng)擴(kuò)展到全球。最近幾十年來(lái)，由于不斷出現(xiàn)的各種控制措施和全國(guó)性的消除計(jì)劃推行，在世界上的一些地區(qū)，PR已實(shí)現(xiàn)在家豬中的凈化，比如歐洲的奧地利、塞浦路斯、捷克共和國(guó)、丹麥、芬蘭、德國(guó)、匈牙利、盧森堡、荷蘭、瑞典、瑞士、英國(guó)以及美洲的加拿大、新西蘭和美國(guó)[4]。然而至今為止PR仍然是我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)最重要的疫病之一，尤其是2011年后出現(xiàn)的PRV突變強(qiáng)毒株，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[5-7]。

表3 凈化實(shí)施1年后種豬群豬偽狂犬野毒陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果

表4 凈化實(shí)施1年后豬群豬偽狂犬免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

表5 A場(chǎng)凈化結(jié)束后種豬群豬偽狂犬野毒陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果

表6 豬偽狂犬病毒凈化前后種豬群生產(chǎn)成績(jī)對(duì)比分析表

減群和免疫接種疫苗是防控以及凈化該病的主要措施。Ketusing N[8]等利用北美動(dòng)物疾病傳播模型 （The North American Animal Disease Spread Model(NAADSM)的計(jì)算機(jī)仿真模型，對(duì)比了泰國(guó)兩省份不同策略 （包括減群、限制區(qū)域活動(dòng)、疫苗免疫、豬群規(guī)模、檢測(cè)等）的豬偽狂犬凈化成效。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，減群對(duì)PRV凈化的影響最大，限制感染豬群的區(qū)域次之。最后評(píng)估結(jié)果是減群，聯(lián)合限制區(qū)域活動(dòng)，配合感染豬群周邊16km內(nèi)的疫苗免疫是泰國(guó)兩省份進(jìn)行PRV凈化的最有效手段。PRV疫苗主要包括自然弱毒疫苗、滅活疫苗、亞單位疫苗、DNA疫苗以及基因工程缺失苗等。其中基因缺失苗在豬偽狂犬病毒凈化中起著至關(guān)重要的作用，包括減少陽(yáng)性種豬的散毒，區(qū)別疫苗和野毒株等。張錦余[9]等采取了 “篩查一撲殺，淘汰一持續(xù)監(jiān)測(cè)一凈化”及 “免疫、檢疫、消毒、隔離”等綜合措施成功凈化了一個(gè)600頭基礎(chǔ)母豬的種豬場(chǎng)。本試驗(yàn)通過(guò)制定合理的免疫程序，定期進(jìn)行疫苗免疫，監(jiān)測(cè)淘汰陽(yáng)性豬，并做好妊娠母豬分娩前后及仔豬的日常飼養(yǎng)管理工作，加強(qiáng)豬場(chǎng)消毒，3個(gè)試驗(yàn)場(chǎng)PR野毒平均陽(yáng)性率下降76.3%。

豬偽狂犬野毒抗體檢測(cè)對(duì)豬偽狂犬的凈化尤為重要，因?yàn)閭慰袢甮E抗體ELISA檢測(cè)試劑盒能區(qū)分偽狂犬病野毒和疫苗毒所產(chǎn)生的抗體，通過(guò)檢測(cè)可獲知豬是否被偽狂犬病野毒所感染。蔣建國(guó)等[10]針對(duì)廣西某偽狂犬病發(fā)病豬場(chǎng)，采用PRV gE抗體ELISA檢測(cè)試劑盒對(duì)該場(chǎng)免疫豬偽狂犬病基因缺失疫苗的豬群進(jìn)行3次野毒感染檢測(cè)，經(jīng)過(guò)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)、加強(qiáng)綜合防控和逐步淘汰措施，使該豬場(chǎng)成為偽狂犬病陰性豬場(chǎng)。本試驗(yàn)應(yīng)用ELISA試劑盒檢測(cè)了試驗(yàn)場(chǎng)的種公豬、能繁母豬和后備母豬，結(jié)果顯示：規(guī)模最大的A場(chǎng)PR野毒陽(yáng)性率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于B、C場(chǎng)，分析原因：A場(chǎng)由于規(guī)模較大，豬場(chǎng)工作人員和生豬流動(dòng)也較大，豬場(chǎng)日常管理存在較多漏洞；且由于A場(chǎng)豬精液來(lái)源于本場(chǎng)種公豬，精液質(zhì)量難以保證；相反，B、C場(chǎng)由于規(guī)模較小，人員和生豬流動(dòng)較小，易于管理，且兩場(chǎng)的豬精液均來(lái)源于質(zhì)量有保證的公豬站，以上是造成A場(chǎng)PR野毒陽(yáng)性率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于B、C場(chǎng)的主要原因。

試驗(yàn)表明，在3個(gè)試驗(yàn)場(chǎng)PR凈化后，哺乳仔豬成活率保持在95%以上，其中A場(chǎng)仔豬成活率提高3%，B場(chǎng)仔豬成活率提高6%，C場(chǎng)仔豬成活率提高2%，之所以會(huì)有較大的差距，分析原因：A場(chǎng)由于規(guī)模較大，各項(xiàng)生產(chǎn)指標(biāo)的提高比較緩慢；B場(chǎng)由于凈化前成活率指標(biāo)較低，所以隨著凈化的實(shí)施，仔豬成活率提升較快；C場(chǎng)由于凈化前成活率指標(biāo)已經(jīng)較高，所以成活率提高不多，但可以看出，隨著凈化的實(shí)施，C場(chǎng)成活率指標(biāo)已經(jīng)提高到一個(gè)較高的水平。說(shuō)明不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場(chǎng)由于野毒感染程度不同，所采取的凈化方案不同，其凈化效果顯著，較適用于當(dāng)前農(nóng)村不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式豬場(chǎng)偽狂犬病凈化工作。

任何一種疾病暴發(fā)都可以給豬場(chǎng)帶來(lái)嚴(yán)重危害，都會(huì)使豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)受到重創(chuàng)。PRV與藍(lán)耳病毒 (PRRSV)、圓環(huán)病毒(PCV)、豬瘟病毒 (HCV)、口蹄疫病毒 (FMDV）等協(xié)同作用時(shí)，更易引起疫苗免疫失敗，所以控制與凈化好其他疫病是控制與凈化PR的基礎(chǔ)。因此，不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場(chǎng)根據(jù)本場(chǎng)的疫病流行的特點(diǎn)和造成PR暴發(fā)的原因，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)施采取綜合措施來(lái)控制與凈化PRV，才能真正做到清內(nèi)源和防外源，達(dá)到凈化目的。

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項(xiàng)目資金來(lái)源：江蘇省三新工程項(xiàng)目SXGC[2015]054。